Занятие № 15. «Обмен липидов (часть1)»

Цель занятия: сформировать знания о строении, функции и метаболизме липидов. Освоить методику определения общих липидов в сыворотке крови.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Липиды пищи: строение и классификация.

2. Биологическая роль и функции липидов в организме.

3. Переваривание липидов в желудочно-кишечном тракте и их всасывание. Ресинтез жиров в клетках слизистой оболочки кишечника.

4. Транспорт жиров в организме.

5. Строение и биологическая роль желчных кислот.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Влияние желчи на активность липазы.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

Реактивы. 1. Молоко.

2. Фенолфталеин, раствор.

3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

4. Липаза, вытяжка.

5. Желчь.

1. Возьмите две пробирки.

2. В обе пробирки внесите по 2 мл молока и по 1 капле раствора фенолфталеина.

3. В каждую пробирку добавьте по каплям раствор гидроксида натрия до слабо-розовой окраски по фенолфталеину.

4. В каждую пробирку внесите по 2 капли вытяжки липазы, а в пробирку 1, кроме того, и каплю желчи.

5. Пробирки поместите в водяную баню при 37°С и отметьте время обесцвечивания фенолфталеина в опыте с желчью и без нее.

Объясните наблюдаемые явления.

Опыт 2. Качественная реакция на желчные кислоты.

Приборы. 1. Предметное стекло.

2. Стеклянная палочка.

5. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Желчь.

2. Сахароза, 20%-ный раствор.

3. Серная кислота, концентрированная.

1. На сухое предметное стекло нанесите 1 каплю желчи (разведена водой в 2 раза) и 1 каплю 20%-ного раствора сахарозы.

2. Перемешайте стеклянной палочкой. Рядом нанесите 3 капли концентрированной серной кислоты.

3. Через некоторое время (10-15 мин) на месте слияния капель появляется красное окрашивания, переходящего при стоянии в красно-фиолетовое.

Где и из чего синтезируются в организме желчные кислоты? Какую роль желчные кислоты играют в переваривании и всасывании липидов?

Опыт 3. Определение концентрации общих липидов в сыворотке крови.

Для количественного определения общих липидов в сыворотке крови чаще всего пользуются колориметрическим методом с фосфованилиновым реактивом. Общие липиды взаимодействуют после гидролиза серной кислотой с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови.

1. В три пробирки внесите реактивы по следующей схеме:

Наименование растворов	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Сывор. крови (мл)	0,02	-	-
Калибровочный р-р (мл). Реактив 1	-	0,02	-
Конц.Н2SO4 (мл)	1,5	1,5	1,5
Перемешать и поставить на кипящую водяную баню на 20 мин. Затем охладить проточной холодной водой. Отобрать аликвоты гидролизатов в сухие пробирки.
Гидролизат (мл)	0,4	0,4	0,4
Фосфованилиновый реактив (мл). Реактив 2	3,0	3,0	3,0

2. Содержимое пробирок перемешайте, оставьте в темноте на 40-60 мин. (цвет раствора меняется с желтого на розовый).

3. Снова перемешайте и измерьте оптическую плотность при 500-560 нм (зеленый светофильтр) против слепой пробы в кювете толщиной слоя 5 мм.

4. Рассчитайте количество общих липидов по формуле:

где D₁ – экстинкция опытной пробы в кювете;

D₂ – экстинкция калибровочного раствора липидов в кювете;

Х  концентрация общих липидов в стандартном растворе.

Дайте определение понятия «общие липиды». Сравните полученное Вами значение с нормальными величинами. О каких биохимических процессах можно судить по данному показателю?

Опыт 4. Определение содержания - и пре--липопротеинов в сыворотке крови.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная палочка.

4. ФЭК.

5. Кюветы, 0,5 см.

Реактивы. 1. Сыворотка крови.

2. Хлорид кальция, 0,025М раствор.

3. Гепарин, 1%-ный раствор.

4. Дистиллированная вода.

1. В пробирку налейте 2 мл 0,025 М хлористого кальция и добавьте 0,2 мл сыворотки крови.

2. Перемешайте и измерьте оптическую плотность пробы (D₁) на ФЭК-е при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см против дистиллированной воды. Запишите значение оптической плотности D₁.

3. Затем в кювету добавьте 0,04 мл 1%-го раствора гепарина (1000ЕД в 1 мл) и точно через 4 мин вновь измерьте оптическую плотность D_2.

Разница значений (D₂ – D₁) соответствует оптической плотности, обусловленной осадком -липопротеинов.

Рассчитайте содержание - и пре--липопротеинов по формуле:

Содержание липопротеинов, мг% = (D₂ – D₁)  12,

где 12 - коэффициент, для переводы в г/л.

Укажите место биосинтеза -липопротеинов. Какую функцию они выполняют в организме человека и животных? Сравните полученное Вами значение с нормальными величинами. В каких случаях наблюдаются отклонения от нормальных величин?

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________