Занятие № 13. «Обмен углеводов (часть 1)»

Цель занятия: рассмотреть факторы, влияющие на переваривание углеводов; освоить метод количественного определения глюкозы в крови.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Основные углеводы пищи, их характеристика. Биологическая роль и функции углеводов в организме.

2. Переваривание угле­водов в желудочно-кишечном тракте у моногастричных животных. Ферменты, участвующие в переваривании углеводов. Нарушения переваривания углеводов.

3. Особенности переваривания углеводов у жвачных животных. Пути включения летучих жирных кислот (ЛЖК) в метаболизм.

4. Метаболизм глюкозо-6-фосфата.

5. Регуляция содержания глюкозы в крови. Биологическая значимость данного явления.

6. Синтез и распад гликогена: последовательность стадий и биологическое значение этих процессов.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Влияние формальдегида на активность амилазы.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

Реактивы. 1. Крахмал, 1%-ный раствор.

2. Амилаза, раствор.

3. Йод, 1%-ный раствор.

4. Формальдегид, 5%-ный раствор.

1. Возьмите две пробирки.

2. В опытную пробирку налейте по 1 мл растворов крахмала, амилазы и 5 капель 5%-ного формальдегида.

3. В контрольную пробирку налейте по 1 мл раствора крахмала, амилазы и воды.

4. Поместите пробирки на 10 минут в водяную баню при 37°С.

5. В обе пробирки добавьте по 1 капле 1%-ного раствора йода.

Объясните полученные результаты.

Опыт 2. Определение концентрации глюкозы в биологических жидкостях ортотолуидиновым методом.

Для определения глюкозы в биологических жидкостях по данному методу в настоящее время различными фирмами выпускаются наборы реактивов. Поэтому суть работы сводится только к правильному использованию набора реактивов согласно инструкции по применению.

Глюкоза с ортотолуидином в кислой среде при повышенной температуре образует комплексное соединение сине-зеленого цвета. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в исследуемой пробе.

Определение без депротеинирования.

Без осаждения белков анализируют сыворотку и плазму крови, мочу. Мочу перед анализом разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:10 до 1:500 и в после­дующем результат умножают на степень разведения.

1. Приготовьте опытную, калибровочную и контрольную пробы по схеме:

	Объем компонента (мл)
	опытная проба	калибровочная проба	контрольная проба
Рабочий раствор реактивов (ортотолуидиновый реактив)	2,7	2,7	2,7
Исследуемый образец	0,3		
Калибратор (раствор глюкозы с известной концентрацией)		0,3	
Дистиллированная вода			0,3

2. Перемешайте. Закройте пробирки фольгой.

3. Поместите пробирки в кипящую водяную баню точно на 8 минут.

4. Охладите пробирку под струей холодной воды.

5. Измерьте оптическую плотность опытной (D₁) и калибровочной (D₂) проб против холостой пробы при длине волны 620 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.

Рассчитайте концентрацию глюкозы по формуле:

где Х  концентрация глюкозы в калибровочном растворе.

Сравните полученные величины с нормальными значениями. Сделайте вывод о состоянии животного. В случае отклонения полученных значений от нормальных величин, предложите возможные причины, объясняющие данный результат.

Назовите факторы, вызывающие гипогликемию и гипергликемию в крови животных.

Опыт 3. Обнаружение сахара в моче с помощью качественной пробы Троммера.

Появление сахара в моче наблюдается при бешенстве, нервной форме чумы собак, нарушениях функции печени, панкреатической железы и др. У лошадей глюкозурия встречается реже, чем у собак. Лактозурия наблюдается при родильном парезе, воспалении вымени, закупорке сосудов, маститах.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Держатель для пробирок.

4. Газовая горелка.

Реактивы. 1. Моча.

2. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

3. Сульфат меди, 2%-ный раствор.

1. В пробирку налейте 3 мл мочи и 1 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.

2. Осторожно, по каплям, добавляйте 2%-ный раствор сульфата меди до появления небольшой, неисчезающей при взбалтывании голубой мути гидроксида меди (II).

3. Верхний слой жидкости нагрейте до кипения (не кипятите!).

4. В течение 1 минуты (не дольше!) оцените цвет осадка. Образование желто-красного осадка свидетельствует о наличии сахара в моче. (Изменение цвета без осадка может быть при наличии муцина, мочевой кислоты и др.).

Сделайте вывод по результатам эксперимента.

Опыт 4. Полуколичественное определение глюкозы в моче.

Приборы. 1. Ступка с пестиком.

2. Весы.

3. Предметное стекло.

4. Газовая горелка.

5. Пипетка.

Реактивы. 1. Моча.

2. Сульфат меди, кристаллический.

3. Карбонат натрия, кристаллический.

1. В ступке разотрите в тонкий порошок 1 г сульфата меди и 10 г карбоната натрия.

2. На предметное стекло насыпьте немного порошка и нанесите несколько капель мочи.

3. Подогрейте до кипения. Синий цвет означает, что глюкозы нет, желтовато-зеленый означает, что глюкозы не более 0,5 %, зеленый – не более 1%, коричнево-красный – до 2%, интенсивно красный – свыше 2%.

Запишите Ваши результаты. Сравните результаты с предыдущим опытом.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________