Правила работы в гистологическом классе

1. Взяв микроскоп, старайтесь постоянно помнить о необходимости аккуратного обращения с ним. Ведь он понадобится в дальнейшем и другим людям, твоим сверстникам. Будьте осторожны, когда пользуетесь этим прибором. Внимательно следите, чтобы не сломать, не испортить и не расстроить чего-то в нѐм. Ведь этим микроскопом придѐтся пользоваться и Вам, и другим.

2. Перемещая микроскоп, не допускайте рывков, толчков и ударов. Перенося прибор, поддерживайте снизу рукой его основание и не наклоняйте его. На стол ставьте его мягко, бережно.

3. Без надобности не стоит отвинчивать или снимать какие-то детали оснастки.

4. Пользуясь микроскопом, старайтесь соблюдать все правила работы с ним.

5. Оптические поверхности линз, зеркал, стѐкол микроскопа и препарата не терпят прикосновений пальцев, пишущих частей карандашей и ручек – на них остаются отпечатки, которые нелегко бывает отчистить. И самому от таких отпечатков будет хуже видно.

6. Свою внимательность и аккуратность Вы можете продемонстрировать тем, что препараты, окуляры, объективы, зеркала и т.п. не будут выпадать из Ваших рук.

7. В ходе работы Вы проявите свою воспитанность и уважение к окружающим, если воздержитесь от посторонних разговоров и постараешься не создавать шум.

8. Пользуясь литературой, будьте аккуратны. Старайтесь не допускать повреждений, пачканья страниц, падения книг. Не кладите альбом на книгу, когда рисуете в нѐм. Было бы неправильно как забирать без спросу книгу, которой кто-то пользуется в данный момент, так и долго удерживать у себя книги, которые нужны и другим.

9. Если всѐ-таки препарат расколется (или произойдѐт что-то подобное), пожалуйста, поставьте в известность педагога. Под его руководством необходимо удалить все осколки во избежание травм.

10. После завершения работы сдайте свой препарат дежурному, приведите микроскоп в нерабочее положение и уберите его на место – поставьте поглубже в тумбу.

11. Все инструменты, которыми Вы пользовались в работе, следует положить на место (если необходимо, предварительно отчистив или помыв их).

12. Уходя со своего места, задвиньте свой стул. Не забывайте свои вещи - проверьте, не осталось ли чего-то из них на столе. Если на столе остались следы работы (крошка от ластика, стружка от затачивавшихся карандашей или др.), устраните их, чтобы твоѐ рабочее место осталось после тебя чистым. Помните при этом, что есть урна.

На занятия приносить обязательно:

1. Белый халат.

2. Рабочая тетрадь.

3. Заточенный простой карандаш.

4. Набор заточенных цветных карандашей.

5. Хороший ластик (который не пачкает бумагу).

6. Ручка.

Раздел основы гистотехники

ЛЗ. ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

Цель занятия:

• Изучить устройство светооптического микроскопа и правила работы с микроскопом

• Изучить методы взятия материала и приготовления гистологических препаратов

• Усвоить приемы и методы гистологической техники

Задание:

• Определить разрешающую способность разных объективов микроскопа и записать полученные расчеты

• Заполнить таблицу №1 «Устройство светового микроскопа».

• Определить разрешающую способность микроскопа

Микроскоп – это оптический прибор, дающий

– объективом и окуляром. Микроскоп состоит из оптической, механической частей и осветительной системы.

Таблица 1. Устройство светового микроскопа

Название систем микроскопа	Составные системы	Функция системы	Примечания
Механическая
Оптическая
Осветительная

Обычные биологические микроскопы (МБИ-I, МБР-I, БИОЛАМ и другие) в наборе имеют три объектива и столько же окуляров, в то время как у исследовательских число их намного больше. Увеличение объективов бывает 8, 40 и 90-кратным, а окуляров, соответственно 7, 10 15-кратным. Объективы являются важнейшими частями микроскопа, дающими изображение. Объективы состоят из линз – шлифованных стекол. Они в некоторой степени дают искажения изображения, которые называются абберациями. Абберации выражаются в появлении нечеткости и цветности изображения. Различают три возможных вида абберации: хроматические, сферическией и по кривизне поля зрения.

Сущность хроматической абберации заключается в частичном разложении лучей белого света на составные части при прохождении через линзу объектива. Получается частично цветное изображение объекта. При сферической абберации лучи света, падающие на различные поверхности линзы объектива, преломляются неодинаково и поэтому получается нечеткое изображение изучаемого объекта. Абберации по кривизне поля зрения возникают из-за искривления поверхности изучаемого объекта и в результате центр и края поля зрения одновременно не имеют резкости.

Абберации в значительной степени устраняются объективами из нескольких линз, поэтому объективы (особенно большого увеличения) являются многолинзовыми системами.

Объективы современных микроскопов по качеству изображения, т.е. по степени устранения аббераций, подразделяются на несколько типов. Объективы ахроматы имеют простое устройство, частично лишены хроматической абберации по двум цветовым волнам и имеют остаточную окраску изображения. Они характеризуются вполне удовлетворительным качеством изображения и поэтому, используется для проведения повседневных работ. Объективы полуапохроматы или флюориты имеют меньше абберации, чем ахроматы. Самыми сложными и лучшими считаются объективы апохроматы, лишенные по существу хроматической абберации. Объективы полуапохроматы и апохроматы используются при проведении научно-исследовательских работ.

Вышеописанные объективы имеют существенный недостаток, который заключается в искажении по кривизне изображения, т.е. примерно от одной трети до половины радиуса поля зрения изображение становится размытым. Для устранения этого используются планахроматические и планапохроматические объективы. Они дают плоское изображение поля зрения. Поэтому изображение получается одинаковым на всем поле зрения. Такие объективы незаменимы для микрофотографирования изучаемых объектов.

Кроме того, объективы подразделяются на сухие и иммерсионные. В сухих – между объективом и изучаемым объектом находится воздушная среда. К ним относятся, в основном, объективы малого и среднего увеличения (8× и 40×).

В объективах большого увеличения – 60× (имеется в научно-исследовательских микроскопах) и 90× пространство между фронтальной линзой объектива и препаратом заполняется иммерсионной средой – водой, водным раствором глицерина или кедровым маслом. Иммерсионные системы обладают большей преломляющей способностью лучей свет, чем воздушная среда и поэтому в объектив попадает больше лучей света.

Для научно-исследовательской работы часто используются объективы специального назначения: фазово-контрастные, эпиобъективы и другие.

Второй оптической системой микроскопа являются окуляры, которые увеличивают изображение, проецированные объективом. Наиболее простым и широко используемыми являются окуляры Гюйгенса. Они применяются с ахроматическими объективами.

Для работы с планахроматическими и апохроматическими объективами больших увеличений применяются компенсационные окуляры. Они более сложно устроенные и в значительной степени исправляют абберации и, тем самым, улучшают качество изображения. Кроме того, для специальных целей применяются фотоокуляры и гомали. Фотоокуляры служат для проецирования изображения на фоточувствительные материалы или же на экран.

Известно, что ахроматические и апохроматические объективы имеют значительную кривизну изображения. Гомали устраняют этот недостаток и поэтому могут быть использованы для фотографирования объекта. В то же время они до одной трети уменьшают поле зрения.

На объективах и окулярах имеются гравировки. С одной стороны обоймы объектива фигуры или написано «ЛОМО» (Ленинградское оптико-механическое объединение), здесь же указывается номер объектива. На противоположной стороне обоймы объектива указывается его увеличение, численная апертура, а иногда и максимально допустимая толщина покровного стекла (0,17мм). В объективах большого увеличения (90×) гравировано «МИ» (масляная иммерсия).

Кроме того, в объективах планахроматах, полуапохроматах и апохроматах гравированы слова «планахромат», «полуапохромат», и «апохромат». В окулярах обычно имеется гравировка увеличения, а в компенсационных буква «К».

На занятиях по самостоятельной работе студенты берут закрепленные за ними на ЛПЗ микроскопы. Каждый студент должен определить общее увеличение микроскопа и разрешающую способность его объективов. Для их определения необходимо знать численную апертуру объектива. Численная апертура – это произведение показателя преломления среды на половину апертурного угла и определяется по формуле:

А = n*sin

Где n – показатель преломления среды, находящегося между препаратом и фронтальной линзой объектива; u – половина апертурного угла. Он образуется коническим пучком света, попадающим в объектив из точки препаратов.

Показатель преломления сред различный:

N n_{воздуха} = 1,0; n_воды =1,33 и n_масла = 1,51

Таким образом, используя иммерсионные среды, можно увеличить апертуру объектива. В современных микроскопах апертура определена и выгравирована на объективах. У объективов с увеличением 8х численная апертура равна 0,20 и соответственно 40х=0,65; 90х=1,25.

Человеческий глаз при нормальной остроте зрения на расстоянии наилучшего видения (250мм) способен различить две линии или точки, отстоящие друг от друга на расстоянии не меньше, чем на 0,08мм. Эта величина называется разрешающей способностью глаза.

Под разрешающей способностью микроскопа понимается то наименьшее расстояние между двумя деталями изучаемого объекта, когда они видны раздельно. Чем меньше это расстояние, тем выше разрешающая способность микроскопа.

Если изучаемый объект будет равным или большим разрешающей способности, то он будет виден в действительной форме, т.е. таким каким он является. Если же изучаемый объект будет меньше разрешающей способности, но не меньше ее половины, то он будет округлым независимо от его истинной формы, равным величине разрешающей способности. Если объект меньше половины разрешающей способности он не будет виден.

Разрешающая способность светооптического микроскопа определяется по формуле:

e = λ / -А,

где е – разрешающая способность объектива;

λ – длина световой волны;

А – численная апертура.

Длина волны белого света λ = 0,55мкм, красного цвета = 0мкм, фиолетового = 0,4мкм. Из формулы видно, что можно увеличить разрешающую способность объектива, используя лучи коротковолновой части спектра.

При работе со светооптическим микроскопом нужно учитывать полезное увеличение, которое не должно превышать тысячекратной численной апертуры (1000 А). Можно добиться увеличения, превышающего 1000 А, используя сильные окуляры. Однако при этом заметно ухудшается освещенность и качество изображения. В то же время иногда используется увеличение микроскопа превышающее 1000А при микрофотографии, микропроекции и в целях измерения. Общее увеличение микроскопа при разных объективах и окулярах по вычисляется по формуле:

β_м = β_об * β_ок

где β_м – общее увеличение микроскопа;

β_об – увеличение объектива;

β_ок – увеличение окуляра.