Железный гематоксилин Вейгерта.

Готовят два раствора:

1. 1,0г гематоксилина растворяют в 100мл 96º спирта. Раствор созревает на свету около месяца.

2. Официальный раствор полуторахлористого железа 4,0мл, соляная кислота (удельный вес 1,15-1,17) 1,0мл, вода дистиллированная 95,0мл. Официальный раствор полуторахлористого железа представляет собой 50% водный раствор хлористого железа (FeCI₃ ˟ 6H₂O – желто-бурая масса).

Перед работой обо раствора смешивают в равных частях.

Окрашивание срезов гематоксилин – эозином. Замороженные срезы, за исключением случаев окраски на липиды, помещают для обезжиривания в 70º и 96º спиртах. Парафиновые срезы для удаления его проводят через 2 порции ксилола по 1-2 минуты, затем через спирты убывающей концентрации и переносят в воду.

Схема окрашивания гематоксилин – эозином

Прогрессивным методом.

1. Срезы помещают в раствор гематоксилина (Карраччи и другие) на 3-5 минут.

2. Срезы переносят в обычную воду до приготовления синеватого цвета. При этом ядра клеток, окрашенные в красновато-фиолетовый цвет в щелочной среде воды, приобретают сине-фиолетовый цвет. Синие ядра клеток становятся более контрастными. Затем срезы переносят в дистиллированную воду на 3-5 минут.

3. Срезы помещают в 1% раствор эозина на 1-3 минуты.

4. Отмывают краситель 1-2 и более минут дистиллированной водой.

Схема окрашивания гематоксилин – эозином

Регрессивным методом.

В этом методе используются легко перекрашивающие растворы гематоксилина Бемера, Делафильда, Эрлиха (рецепты их приготовления имеются в пособиях по гистологической технике).

Схема окрашивания.

1. Окраска срезов в растворе гематоксилина 2-5 минут.

2. Промывка в дистиллированной воде 1-6 секунд.

3. Срезы переносят в 0,5-1% раствор соляной кислоты на 70º спирте 3-30 секунд.

Срезы при дифференцировке начинают краснеть. При передержке в солянокислом спирте может произойти полное исчезновение краски. Затем красят эозином.

Метод окрашивания под ван Гизон.

Этот метод окрашивания дает цветное окрашивание разных гистоструктур. Перед окраской растворы Вайгерта1 и 2 смешивают поровну. Получается густая темно-фиолетовая жидкость. Нужно иметь в виду, что в готовом виде краска быстро портится из-за наличия сильных окислителей.

Вторую краску –пикрофуксин готовят из насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 1% водного раствора кислого фуксина.

Берут 100,0 мл пикриновой кислоты и смешивают с 10 мл фуксина. Образуется стойкая смесь гранатового цвета, сохраняющаяся месяцами.

Схема окрашивания по ван Гизон.

1. Срезы окрашиваются в гематоксилине Вейгерта в течение 3-5 минут.

2. Срезы быстро ополаскивают в 2 порциях обычной воды.

3. окрашивают пикрофуксином 1-3 минуты.

4. Срезы быстро ополаскивают в обычной воды.

После окраски гематоксилин – эозином, по ван Гизон и другими методами готовятся гистологические препараты. Существуют разные методы приготовления препаратов. Чаще всего пользуются заключением в бальзам. Для чего срезы проводят через спирты возрастающей консистенции, а затем через просветляющие среды. К ним относятся ксилол, толуол, эфирные масла, креозот, скипидар, карбоксилол. В большинстве случаев пользуются ксилолами или толуолом. В них срезы помещаются на непродолжительное время. Заключают срезы после ксилола или толуола в канадский или пихтовый бальзам.