15. Способы создания условий для культивирования анаэробных микроорганизмов.

Способы создания анаэробных условий.

а) механический - удаление (откачивание) воздуха из анаэростата с помощью вакуумного отсоса. Затем анаэростат заполняют газовой смесью, которая со-стоит из 80% азота, 10% водорода и 10% углекислого газа;

б) химический - поглощение кислорода за счет химических веществ (щелоч-ной раствор пирогаллола, двууглекислая сода);

в) биологический (метод Фортнера) - совместное культивирование анаэробов и аэробов. При этом на одну половину чашки Петри с плотной питательной средой (чаще используют среду Цейсслера) засевают культуру анаэробов, на другую - культуру аэробов, способных энергично поглощать кислород. В качестве аэро бов используют культуру чудесной палочки (Serratia marcescens). Края чашки Петри парафинируют;

г) физико-химический - посев исследуемого материала на специальные среды для анаэробов, например, среды Китта-Тароцци и Вильсона-Блера (железо-сульфитный агар). Среды перед посевом регенерируют (кипятят на водяной бане в течение 15 минут) для удаления кислорода.

15. Рост и размножение бактерий. Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких питательных средах.

Рост бактерий - это увеличение линейных размеров и массы микробной клетки.

Размножение бактерий - это увеличение количества особей в популяции за счет поперечного (бинарного) деления, реже путем почкования.

Интервал времени, за который число клеток удваивается, называется време­нем генерации (Т - генерации). Для большинства бактерий время генерации со­ставляет 20-30 мин., у возбудителя туберкулеза - 18-24 час.

Популяция бактерий - совокупность особей одного вида, сформиро­вавшаяся в определенных условиях внешней среды.

2. Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких питательных средах. Популяция бактерий, развившаяся из одной микробной клетки на плотной питательной среде, называется колонией.

Колонии характеризуются по следующим признакам:

1. по размеру: мелкие - 1-2 мм; средние - 2-4 мм; крупные - более 4 мм;

2. по форме: круглые или неправильной формы;

3)по характеру поверхности: матовые или блестящие, гладкие или шероховатые;

4. по рельефу: выпуклые, уплощенные;

5. по характеру краев: ровные, изрезанные, фестончатые;

6. по оптическим свойствам: прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные;

7. по цвету: бесцветные или пигментированные (золотистые, красные, сине-зеленого цвета и др);

8. по запаху, например, колонии синегнойной палочки имеют запах жасми­на, фиалки, карамели;

9) по консистенции: сухие, влажные, слизистые;

10) по связи с питательной средой: прочно связанные, непрочно связанные. Гладкие колонии с ровными краями обозначаются как S-колонии (англ.

smooth - гладкие), шероховатые с изрезанными краями - R-колонии (англ. rough - шероховатые). Внешний вид колоний у некоторых бактерий настолько характерен, что может служить одним из дифференциальных признаков при их идентификации. Например, R-колонии возбудителя чумы (Y.pestis) сравнивают с

«кружевными платочками», т.к. они имеют плотный центр и прозрачные волни­стые края. Возбудитель сибирской язвы (B.anthracis) на плотных питательных средах также растет в R-форме, и колонии напоминают «гриву льва».

Рост микроорганизмов на жидкой питательной среде зависит от скорости деления и типа дыхания бактерий и может быть:

1. диффузно-мутящий (S.aureus, E.coli);

2. придонный или придонно-пристеночный (S.pyogenes);

3. поверхностно-пленчатый (V.cholerae).

Некоторые виды возбудителей дают характерный тип роста в жидкой пита­тельной среде. Например, Y.pestis образует на поверхности пленку со спускаю­щимися вниз тяжами (нитями) - «чумные сталактиты»; B.anthracis образует придонный осадок в виде «комочка ваты».

3. Фазы развития бактериальной популяции в жилкой питательной

среде.I - исходная стационарная фаза. В эту фазу бактерии адаптируются к новым условиям обитания и размножения их не происходит.

II - лаг-фаза - характеризуется началом интенсивного роста клеток и невы- сокой скоростью деления.

3. - логарифмическая (экспоненциальная) фаза роста характеризуется мак­симальной скоростью размножения клеток.

4. - фаза отрицательного ускорения роста характеризуется снижением ско­рости размножения клеток.

V - максимальная стационарная фаза характеризуется динамическим равно­весием между количеством погибающих и вновь образующихся клеток. В эту фазу количество живых бактерий в популяции достигает максимальной (М) кон­центрации.

М-концентрация - это максимальное количество жизнеспособных бакте­рий, которое может накопиться в единице объема жидкой питательной среды при стандартных условиях культивирования за единицу времени. М-концентрация является видовым признаком.

6. - фаза логарифмической гибели бактерий, характеризуется макси­мальной скоростью гибели клеток.

7. - фаза отрицательного ускорения гибели бактерий, которая харак­теризуется снижением скорости гибели клеток.