32. Ненаследственная изменчивость (модификации). Диссоциация бактерий.

Ненаследственная изменчивость (модификации).

Временные, наследственно не закрепленные изменения свойств бактерий принято обозначать как модификации. Модификации возникают как адаптив­ные реакции бактериальных клеток на изменения окружающей среды. После устранения соответствующего воздействия, бактерии реверсируют к исходному фенотипу.

Стандартным вариантом модификаций является диссоциация. Феномен диссоциации проявляется расщеплением однородной популяции бактерий (при посеве на плотную питательную среду) на два вида колоний: 1) гладкие S-форма (от англ. smooth - гладкий); 2) шероховатые R-форма (от англ. rough — шероховатый). Различия между S- и R-формами не ограничиваются только

они охватывают также биохимические, антигенные, пато

структурой колон

генные и другие признаки . Обычно диссоциация возникает при неблагоприятных условиях среды, при старении культуры, либо под действием бак­териофагов, иммунной сыворотки и других факторов

32. Практическое значение генетики и изменчивости микроорганизмов. Исполь­зование генной инженерии в медицине.

1. Для получения живых вакцин. В основе лежит принцип аттенуации, предложенный Л.Пастером, т.е. ослабление вирулентности микробов под действием физических, химических и биологических факторов с сохранением их

иуногенных свойств. Например, вакцинный штамм туберкулезных бажтц

(BCG) был получен Кальметом и Жереном путем длительного (13 лет) выравания возбудителя туберкулеза на питательной среде с желчью.

2. Для получения штаммов бактерий и микроскопических грибов с высокой продукцией антибиотиков.

3. Для получения штаммов бактерий с высокой продукцией экзотоксинов.

4. В генной инженерии для получения инсулина и интерферона в бактери

ьных клетках.

5. Для получения генно-инженерных вал

6. Разработка и внедрение в практику генетических методов диагноста инфекционных заболеваний, например, ПНР.

32. Антибиотики. Механизмы антимикробного действия. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Антибиотики - вещества, обладающие выраженной биологической акп

ностью по отношению к микроорганизмам. Они могут быть природного происхождения или синтетические и полусинтетические.

Антибиотики были открыты английским ученым А.Флемингом и американским ученым СВаксманом. В 1929 г. А.Флеминг установил, что фильтрат бульонной культуры плесневого гриба Penicilliion notatum содержит вещество (пенициллин), угнетающее рост стафилококков. Однако в чистом виде препа­рат был получен лишь в 1940 г., после чего было налажено его промышленное

производство. С.Ваксман открыл в 1944г. стрептомицин; его продуцентом яв­ляется Actinomyces grisens. В настоящее время существует более 6 тысяч при­родных антибиотиков и созданы многие десятки тысяч полусинтетических и синтетических препаратов.

Классификация антибиотиков по происхождению.

1. Животного происхождения: лизоцим, интерферон и др.

2. Растительного происхождения: фитонциды чеснока и лука и др.

3. Бактериального происхождения: полимиксин из B.polymyxa, грам дин из B.brevis.

4. Грибкового происхождения: пенициллин, стрептомицин, тетрациклин и

5. Синтетические (левомицетин) и полу синтетические: оксациллин, ампи-

циллин и др.

Некоторые антибиотики обладают бактерицидным действием, т.е. вызывают гибель микроорганизмов. Например, пеншщллины, цефалоспорины. Другие оказывают бактериостатическое действие, т.е. подавляют рост и размножение микроорганизмов. Например, тетрациклин, левомицетин.

Классификация антибиотиков по механизму антимикробного действия. 1. Подавление синтеза пептидогликана клеточной стенки бактерии (бета

лактамные антибиотики, гликопептиды).

2. Подавление синтеза белка на рибосомах (аминогликозиды, тетрацикл ны, макролиды, левомицетин).

3. Подавление синтеза белка на уровне транскрипции (рифампицин).

4. Нарушение структуры и функции цитоплазматической мембраны (г лимиксины, полиеновые).

5. Нарушение репликации ДНК (фторхинолоны).

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

1. Метод серийных разведенией: готовят двукратные разведения антибиотиков, а затем к каждому разведению добавляют взвесь исследуемых бактерий. После термостатирования в течение суток при 37°С, определяют минимальную подавляющую концентрацию антибиотика (МПК), которая полностью задерживает рост бактерий.

2. Диско-диффузионный метод: производят посев исследуемой культуры бактерий сплошным газоном на пластинчатый МПА. Затем на посев помещают стандартные бумажные диски, пропитанные различными антибиотиками. Посевы термостатируют при 37°С 24 часа.

Учет результатов производят по диаметру зон отсутствия роста бактерий вокруг дисков (рис.7). Оценка результатов определения чувствительности ос­нована на установлении зависимости между размером зон подавления роста исследуемой культуры и значениями МПК соответствующих антибиотиков в отношении этой культуры. Например, бактерии считаются чувствительными к

гентамицину, если диаметр зоны задержки роста >16мм; а устойчивыми -

<15мм.

38