Заняття 6.

Тема: Ріст і розмноження мікроорганізмів. Виділення чистих культур бактерій.

Актуальність. Одержання ізольованих колоній на щільному поживному середовищі – ключовий етап виділення чистої культури. Характеристика колоній – своєрідної видимої неозброєним оком сукупності бактерій – є однією з важливих культуральних властивостей, необхідних для ідентифікації бактерій. Від уміння виявити і розрізнити окремі типи колоній та встановити їх характерні ознаки багато в чому залежить успіх бактеріологічного дослідження.

Мета і завдання. Засвоєння бактеріологічного методу дослідження – виділення чистих культур аеробів. Вивчення культуральних властивостей мікроорганізмів і методів дослідження колоній бактерій. Оволодіння технікою пересіву колоній бактерій для виділення чистої культури.

Контрольні питання.

1. Ріст і розмноження мікроорганізмів.

2. Фактори росту та розмноження бактерій.

3. Швидкість та фази розмноження бактерій.

4. Періодична культура мікроорганізмів.

5. Визначення понять «вид», «штам», «клон», «колонія», «культура» .

6. Виділення чистих культур бактерій – основний метод мікробіологічної діагностики.

7. Етапи виділення чистих культур бактерій.

8. Культуральні властивості бактерій, методи вивчення.

9. Пігменти бактерій, їх значення в життєдіяльності мікроорганізмів.

10. Культуральні властивості бактерій. Визначення понять вид, колонія, клон, штам.

11. Пігменти бактерій, їх значення в життєдіяльності мікроорганізмів.

Практичні навики.

1. Засвоїти основні критерії, за якими характеризують колонії бактерій.

2. Вміти оцінити чистоту колоній.

3. Засвоїти техніку посіву колоній бактеріологічною петлею на похилий агар.

Зміст і хід заняття:

Робота 1. Вивчення морфологічних особливостей колоній.

Принцип дослідження. Візуальна оцінка характеру росту різних мікроорганізмів на щільному поживному середовищі.

Хід роботи. Вивчити морфологічні особливості колоній різних культур бактерій за допомогою демонстраційних посівів на МПА в чашках Петрі (форма, величина, характер країв, прозорість, характер поверхні, наявність пігменту, внутрішня структура та ін.).

Практичне значення. Морфологія колоній є однією з важливих диференціальних ознак бактерій, яка в поєднанні з іншими властивостями дозволить встановити вид виділеного збудника.

Робота 2. Облік посівів на пластинці МПА в чашці Петрі для виділення чистої культури. Макроскопічне і мікроскопічне дослідження колоній.

Принцип дослідження. Візуальна оцінка морфологічних властивостей ізольованої структури (колонії) на щільному поживному середовищі, отриманої шляхом механічного розділення.

Хід роботи. Визначити кількість морфологічних типів колоній, що виросли на МПА, відмітити характерні ознаки кожного типу колоній. Провести мікроскопічне дослідження колоній. Для цього виготовити препарати-мазки з колоній кожного типу, забираючи петлею частину досліджуваної ізольованої колонії, і зафарбувати за методом Грама. Визначити морфологію бактерій, досліджуючи мазки з допомогою імерсійного мікроскопа. Переконавшись, що колонія чиста (містить один морфологічний тип бактерій), пересіяти на похилий МПА її залишок. Для цього пропалену бактеріологічну петлю охолодити на внутрішній стінці чашки Петрі, зняти залишок колонії і засіяти зигзагоподібними штрихами на похилий МПА. Посіви підписати і помістити в термостат для інкубації.

Культуральні, морфологічні і тинкторіальні властивості досліджених бактерій подати у таблиці за схемою: