Испытания с использованием клинических образцов спинномозговой жидкости: определение родовой принадлежности возбудителей гбм.

Было проведено ПЦР-тестирование 173 образцов СМЖ, взятых при поступлении больных с клиническим диагнозом менингококковый менингит (с или без проявлений менингококцемии) или диагнозом ГБМ неясной этиологии во 2^ую Инфекционную клиническую больницу г.Москвы (Таблица 4). Бактериологически и/или методом ЛА менингококк был выявлен у 68 больных (39%), пневмококк - у 22 больных (13%), гемофильная палочка типа b - у 9 больных (5%), "прочие" бактерии (K.pneumoniae, E.coli, L.monocytogenous, S.aureus, E.cloacae и др.) - в сумме у 11 больных (6%); 63 случая (36%) не были этиологически расшифрованы с помощью "классических" методов. При этом культивирование само по себе позволяло диагностировать 30-50% эпизодов ГБМ, а метод ЛА - 50-70% эпизодов ГБМ (см. подробнее Таблицу 4).

Таблица 4.

Результаты диагностики бактериологическим методом, методом латекс-агглютинации (ла) и с помощью полимеразной цепной реакции (пцр).

Клинический диагноз при поступлении:  в скобках число пациентов / образцов СМЖ, взятых при поступлении	Диагноз бактерио-логический	Диагноз методом ЛА	Диагноз бактерио-логический и / или методом ЛА	Диагноз методом ПЦР по образцу СМЖ	Серогруп-пирование методом ПЦР по образцу СМЖ
	Возбуди-тель и его серогруппа	Возбуди-тель и его серогруппа	Возбуди-тель и его серогруппа	Возбуди-тель	Серогруппа возбудителя
Менингококковая инфекция, менингит, менингококкцемия (78)	А (12)  В (14)  С (5)  отр. (47)	А (20)  В (10)  С (6)  отр. (42)	А (22)  В (17)  С (9)  отр. (30)	нейссерии (74) отр. (4)	А (29)  В (28)  С (13)  отр. (8)
Гнойный бактериальный менингит неясной этиологии. Окончательный диагноз с учетом лабораторных данных - менингококковая инфекция, менингит (35)	А (3)  В (3)  С (2)  Y(1)  отр. (26)	А (10)  В (4)  С (4)  отр. (17)	А (11)  В (4)  С (4)  Y(1)  отр. (15)	нейссерии (34)  отр. (1)	А (19)  В (3)  С (8)  истинно-отр. (1)*  отр. (4)
Гнойный бактериальный менингит неясной этиологии. Окончательный диагноз с учетом лабораторных данных - пневмококковый менингит (28)	пневмо-кокк (14)  отр. (14)	пневмо-кокк (20)  отр. (8)	пневмо-кокк (22)  отр. (6)	стрепто-кокк (27)  отр. (1)	истинно-отр. (28) **
Гнойный бактериальный менингит неясной этиологии. Окончательный диагноз с учетом лабораторных данных - менингит, вызванный Hib (9)	Hib (5)  отр. (4)	Hib(9)  отр. (0)	Hib(9)  отр. (0)	Haemo-philus(9)  отр. (0)	истинно-отр. (9) **
Гнойный бактериальный менингит неясной этиологии. Окончательный диагноз с учетом лабораторных данных - менингит, вызванный "прочими" бактериями (11)	рост бактерий (11)  отр. (0)	отр. (11)	рост бактерий (11)  отр. (0)	истинно-отр. (11)	истинно-отр. (11) **
Гнойный бактериальный менингит неясной этиологии. Окончательный диагноз с учетом лабораторных данных не уточнен (12)	отр. (12)	отр. (12)	отр. (12)	отр. (12)	отр. (12)
Окончательный диагноз с учетом клинических и лабораторных данных - иные патологии, то есть не "гнойный бактериальный менингит" (78)	отр. (78)	отр. (78)	отр. (78)	истинно-отр. (78)	истинно-отр. (78)

* истинно-отрицательный результат ПЦР серогруппирования образца СМЖ, из которого был высеян штамм менингококков серогруппы.  ** истинно-отрицательный результат ПЦР серогруппирования образца СМЖ, из которого был высеяны штаммы иных бактерий (не менингококков).

Применение ПЦР с "родовыми" праймерами позволило выявить присутствие ДНК нейссерий у 108 больных (62%), ДНК стрептококков - у 27 больных (16%), ДНК бактерий рода Haemophilus - у 9 больных (5%). Только 29 образцов СМЖ (17%) были негативны в ПЦР, в том числе 11 образцов, из которых были выделены "прочие" бактерии, принадлежащими к родам, ДНК которых не взаимодействует с нашими праймерами. Использование данных, полученных тремя методами (культура, ЛА и ПЦР) оставило не диагностированными только 15 случаев ГБМ из 173.

Приняв в качестве "золотого стандарта" результаты изоляции штаммов Neisseria, Streptococcus, Haemophilus из образцов СМЖ, можно оценить относительную чувствительность и специфичность наших ПЦР-методик. При ПЦР-исследовании 70 образцов СМЖ, из которых были высеяны бактерии, ложно-отрицательный результат (отсутствие специфического ампликона после ПЦР) был получен в одном случае менингококкового менингита с менингококцемией, а ложно-положительные результаты ("обнаружение" ДНК не того рода бактерий, который был изолирован) не были отмечены. Таким образом, чувствительность ПЦР диагностики ГБМ по предложенной схеме составляет не менее 98%, а специфичность может достигать 100%. Существенно также, что ПЦР-исследование 78 пациентов с иными патологиями (серозный менингит, ОРВИ, и др) не выявляло присутствия в СМЖ бактериальной ДНК.

Аналогичные результаты были получены в более широком испытании "родоспецифических" праймеров, данные которого опубликованы [Платонов 1999г].