Выводы:

Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами.

ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с концентрированными азотной и серной кислотами.

ХОД РАБОТЫ: В 2 пробирки наливают по 10 капель концентрированных кислот: азотной и серной. Наклонив пробирки под углом 45 градусов, осторожно по стенке пробирки приливают равный объем раствора белка так, чтобы обе жидкости не смешивались. На границе двух жидкостей образуется осадок в виде небольшого белого кольца. При добавлении избытка азотной кислоты осадок не исчезает, а при добавлении серной кислоты осадок растворяется.

Выводы:

Осаждение белков органическими растворителями.

ХОД РАБОТЫ: В 2 пробирки берут по 5 капель раствора белка и прибавляют по 15-20 капель этилового спирта и ацетона.

Выводы:

Осаждение белков органическими кислотами.

ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с трихлоруксусной кислотой.

ХОД РАБОТЫ: В две пробирки наливают по 5 капель раствора белка и добавляют по 2 капли раствора ТХУ (трихлоруксусной кислоты) в одну и 2 капли сульфосалициловой в другую. Следят за изменением растворов.

Выводы:

Лабораторная работа № 3. Разделение альбуминов и глобулинов методом высаливания (УИРС).

ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на обратимой реакции осаждения белков из растворов с помощью высоких концентраций нейтральных солей (NaCl, NH₄Cl, MgSO₄и др.)

ХОД РАБОТЫ: К 1 мл неразведенного яичного белка добавляют 1 мл насыщенного раствора сульфата аммония и перемешивают. Получается полунасыщенный раствор сульфата аммония, в котором выпадает осадок яичного глобулина. Через 5 минут осадок отфильтровывают, в фильтрате остается яичный альбумин. Для высаливания альбуминов к фильтрату добавляют порошок сульфата аммония до полного насыщения, т.е. пока новая порция порошка остается нерастворенной. Выпавший осадок альбумина отфильтровывают. С фильтратом проделывают биуретовую реакцию. Отрицательная реакция указывает на отсутствие белка.

Выводы:

ЗАНЯТИЕ 3

ТЕМА: Ферменты 2 . Механизм действия ферментов.

Цель занятия: закрепить знания по структуре ферментов, сформировать представления о механизме действия ферментов.

Исходный уровень знаний навыков:

Студент должен знать:

1. Теоретические основы химической кинетики.

2. Строение моносахаридов. Качественные реакции на альдегидные и спиртовые группы.

3. Строение полисахаридов. Свойство и качественные реакции.

4. Механизм образования шиффовых оснований.

5. Строение и механизм катализа коферментами NAD⁺ и NADP⁺.

Студент должен уметь:

1. Проводить качественные реакции на продукты ферментативного гидролиза.

Структура занятия:

1. Теоретическая часть.

   1. Свойства ферментов (термолабильность, специфичность и др.) Механизм действия ферментов. Этапы взаимодействия фермента и субстрата. Гипотезы Э.Фишера, Д.Кошланда и современные взгляды.

   2. Теория промежуточных соединений. Основы термодинамики катализа. Энергия активации. Энергетический барьер.

   3. Кинетика ферментативных реакций (факторы, влияющие на скорость ферментативных реакций: природа фермента и субстрата, их концентрация, pH, тем­пература, лекарственные препараты и др.). K_m - определение, фи­зиологическое значение.

   4. Регуляция активности ферментов. Роль гормонов, цАМФ, активаторов, ингибиторов. Регуляция активности путем химической модификации ферментов (ограниченный протеолиз, фосфорилирование, метилирование и др.). Виды ингибирования. Аллостерическая регуляция и свойства аллостерических ферментов.

2. Практическая часть (выполнение лабораторных работ):

   1. Изучение действия ферментов (липазы и уреазы).

   2. Изучение влияния различных факторов на скорость ферментативных реакций (УИРС).