Структура занятия:

1. Теоретическая часть.

   1. Механизм мобилизации жира (роль гормонов, цАМФ и Ca²⁺).

   2. Свойства и физиологическая роль свободных жирных кислот (СЖК). Транспорт СЖК в крови.

   3. Окисление ТГ в тканях, окисление глицерина, его энергетический баланс.

   4. Этапы -окисления насыщенных жирных кислот. Механизм активации и транспорта жирных кислот через митохондриальную мембрану. Роль карнитина. Особенности-окисления ненасыщенных жирных кислот и жирных кислот с нечетным числом атомов. Энергетический баланс окисления C₁₆, C₁₅, C_18:2.

   5. Энергетический баланс окисления тристеарата. Физиологическая роль СЖК при стрессе.

   6. Обмен ацетил-КоА (пути образования и утилизации).

   7. Кетоновые тела - биосинтез, утилизация, физиологическая роль.

2. Практическая часть - выполнение лабораторной работы:

   1. Определение содержания в крови общих липидов.

   2. Определение насыщенности жиров.

3. Решение задач и проведение контроля конечного уровня

Литература основная:

1. Материал лекций.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия, М., Медицина, 1990, стр. 292-300, М. Медицина, 1998, стр. 370-381.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия, М., Высшая школа, 1989, стр. 263-266, 270-273, 280-281.

дополнительная:

4. Филиппович Ю. Б. Основы биохимии М., Высшая школа, 1993, стр. 380-402.

5. Марри Р. и др. Биохимия человека, М., Мир, 1993, том 1, стр. 274-297.

6. Климов А. Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз, Санкт-Петербург, 1995

7. Рецепторы ЛПНП в развитии атеросклеротических изменений сосудов, "В мире науки", 1988, № 12.

ЗАДАЧИ.

1. Жирная кислота C15 будет вступать в ЦТК в виде:

а) цитрата	в) ацетил КоА	д) сукцината
б) сукцинил КоА	г) -кетоглутарата	е) малонил КоА

2. Мембрана митохондрий проницаема для:

а) ацил-АПБ	г) ацетил-КоА
б) ацил-КоА	д) ни одного из названных соединений
в) малонил-КоА	е) всех названных соединений

3. Гормончувствительная липаза обеспечивает:

а) гидролиз эфирных связей в гормонах

б) адреналин-зависимый гидролиз пищевых липидов

в) мобилизацию ТГ жировой ткани;

г) гидролиз ТГ в печени

д) гидролиз ТГ в мозге.

4. Главным энергетическим субстратом для мозга в нормальных условиях является:

а) глюкоза	в) кетоновые тела	д) молочная кислота
б) аминокислоты	г) жирные кислоты	е) ТГ

5. При голодании окисление СЖК или кетоновых тел приводит к торможению гликолиза в мышцах, потому что:

а) ацетил-КоА подавляет активность пируват-ДГ

б) увеличение отношения АТФ/АДФ лимитирует гексокиназу

в) гипоинсулинемия ограничивает потребление глюкозы мышцей

г) увеличение отношения NADH/NAD⁺ лимитирует 3-ФГА-ДГ

д) жирные кислоты обладают контринсулярным эффектом.

е) активируется ГНГ

6. Кофакторы общие как для -окисления СЖК, так и для аэробного гликолиза включают:

а) витамин B12	в) АДФ	д) аскорбат
б) NAD+	г) HS-KoA	е) биотин

7. Мобилизация липидов из депо происходит при:

а) уменьшении концентрации цАМФ

б) увеличении концентрации цАМФ

в) увеличении концентрации инсулина

г) уменьшении концентрации инсулина

д) увеличении концентрации адреналина

е) увеличении концентрации ионизированного Ca²⁺в крови

8. Для транспорта CH₃CO-SКоА из митохондрии в цитоплазму при биосинтезе пальмитиновой кислоты необходимо наличие:

а) карнитин-ацилтрансферазы	г) АТФ-цитратлиазы
б) ацетил-КоА-карбоксилазы	д) цитратсинтетазы
в) КоА-гидролазы	е) малонил КоА

9. Что является ключевым метаболитом при биосинтезе кетоновых тел в печени?

а) ацетил-КоА	г) -окси-метилглютарил-КоА
б) малонил-КоА	д) цитрат
в) ацетоацетил-КоА	е) NADH

10. Какие из следующих ферментов необходимы для превращения ПВК в ацетил-КоА?

а) пируват ДГ	г) ФЕПКК
б) цитратсинтетаза	д) АТФ-цитрат-лиаза
в) пируваткарбоксилаза	е) дигидролипоат ДГ.

Практическая часть:

Лабораторная работа № 1Определение общих липидов в сыворотке крови сульфофосфованилиновым методом

ПРИНЦИП МЕТОДА: Продукты распада ненасыщенных липидов образуют с реактивом, состоящим из серной, ортофосфорной кислот и ванилина, соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови.

ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с концентрированной серной кислотой и кипячением на водяной бане. Проводится дополнительный инструктаж по технике безопасности.

ХОД РАБОТЫ: Готовят опытную и контрольную пробы по схеме:

Проба	H2SO4	Сыворотка крови	Вода дистиллированная
Опытная	5 мл	0,1 мл	-
Контрольная	5 мл	-	0,1 мл

Пробы тщательно перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 10 минут. Затем охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Отбирают пипеткой из опытной и контрольной пробы по 0,2 мл гидролизата и переносят в сухие пробирки. Добавляют в каждую пробирку по 3 мл фосфорно-ванилиновой смеси, тщательно перемешивают и оставляют стоять 45 мин при комнатной температуре.

Интенсивность окраски измеряют на фотометре против контроля при зеленом светофильтре (длина волны 500-560 нм) в кювете шириной 5 мм. Расчет производят по калибровочному графику. Результат выражают в мг на 100 мл сыворотки крови (мг%) или грамм на литр (г/л).

НОРМА: содержание общих липидов в сыворотке крови здоровых людей составляет 4 - 8 г/л или 400 - 800 мг%.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Как физиологическое явление гиперлипемия наступает через 1-4 часа после приема пищи.

Патологическая гиперлипемия наблюдается при сахарном диабете (иногда до 10-20 г/л), при липоидном нефрозе (до 50 г/л), билиарном циррозе печени, остром гепатите (особенно в период желтухи), остром или хроническом нефрите.

Содержание общих липидов в крови возрастает также при эссенциальной гиперлипидемии, ожирении, атеросклерозе (часто у больных ИБС), гипотиреозе, панкреатите, злоупотреблении алкоголем.

ВЫВОД: (записать полученный результат и дать ему клинико-диагностическую оценку)

Лабораторная работа № 2Определение насыщенности жиров.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Насыщенность жира зависит от присутствия в его состав непредельных жирных кислот. Ненасыщенные соединения легко присоединяют по два атома галогена по месту каждой двойной связи. Обычно степень ненасыщенности определяют иодным числом. Иодное число измеряется количеством граммов иода, которое присоединяется к 100 г. жира.

Механизм реакции взаимодействия ненасыщенных жирных кислот (например, олеиновой) с иодом таков:

ХОД РАБОТЫ:

В сухую коническую колбу емкостью 100 мл с пришлифованной стеклянной пробкой помещают 2 капли исследуемого масла. В колбу добавляют 12,5 мл спирта для растворения навески. Если масло плохо растворяется, можно подогреть колбу на водяной бане. Во второй колбе ставят «слепой опыт» (контроль), т.е. берут в нее 12,5 мл спирта. В каждую колбу (опыт и контроль) прибавляют по 6,25 мл 0,2 н. спиртового раствора йода (из бюретки), смешивают, приливают по 50 мл дистиллированной воды и хорошо встряхивают, закрыв пробкой. Через 5 мин содержимое колб оттитровывают 0,1 н. раствором тиосульфата (Na₂S₂O₃) сначала до появления слабо-желтого окрашивания, а потом, прибавив 0,5 мл раствора крахмала, титруют до исчезновения синего окрашивания.

Провести параллель с прогорклым (старым) и облученным маслом

Схема опыта:

Компоненты	Контрольная	Опытные с маслом
		свежим	старым	облученным
Масло свежее	-	12,5 мл	-	-
Масло старое	-	-	12,5 мл	-
Масло облученное	-	-	-	12,5 мл
Спирт	12,5 мл	12,5 мл	12,5 мл	12,5 мл
Раствор йода	6,25 мл	6,25 мл	6,25 мл	6,25 мл
Дистиллированная вода	50 мл	50 мл	50 мл	50 мл
Закрывают пробкой и встряхивают 5 мин.
Раствор Na2S2O3	Первое титрование
Раствор крахмала	0,5 мл	0,5 мл	0,5 мл	0,5 мл
Раствор Na2S2O3	Второе титрование

Разность между количеством 0,1 н. раствора тиосульфата, затраченного на титрование опыта и контроля, является показателем количества йода, связанного навеской масла. Йодное число (в г) вычисляют по формуле:

Йодное число = , гдеV₁ – количество 0,1 н. раствора Na₂S₂O₃, пошедшее на титрование контроля (в мл); V₂ – количество 0,1 н. раствора Na₂S₂O₃, пошедшее на титрование в опыте (в мл); 0,0127 – титр тиосульфата по йоду; a – навеска жира (в г).

Расхождения в параллельных опытах допускается лишь в десятых долях получаемых йодных чисел.

ВЫВОД: (записать полученный результат и дать ему клинико-диагностическую оценку)

ЗАНЯТИЕ 15.

ТЕМА: Липиды 3. Биосинтез липидов. Регуляция и патология липидного обмена.

Цель занятия:Изучить основные типы и механизмы нарушений липидного обмена. Научиться определять уровень общего холестерина в крови и липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) в сыворотке крови.

Исходный уровень знаний:

Студент должен знать:

1. Механизмы регуляции углеводного обмена.

2. Механизмы нарушения обмена веществ при сахарном диабете.

3. Строение и биологическая роль желчных кислот.

4. Характеристику основных классов ЛП.

5. Метаболизм ЛП в норме.

6. Пути передачи гормонального сигнала на клетку (аденилатциклазный, инозитолтрифосфатный).

7. ЦТК, его энергетический баланс.

8. Структуру и функцию полиферментных комплексов (на примере пируват-ДГ).

Студент должен уметь:

1. Проводить исследование на фотоэлектроколориметре

1. Теоретическая часть.

   1. Биосинтез насыщенных жирных кислот. Роль ацилпереносящего белка (АПБ), пантотеновой кислоты, биотина, NADPH+H⁺ и ферментов. Источники ацетил-КоА для биосинтеза жирных кислот (ЖК). Регуляция биосинтеза ЖК.

   2. Биосинтез триглицеридов (ТГ) и фосфатидов.

   3. Биосинтез холестерина, его регуляция, биологическая роль холестерина. Пул холестерина в клетке, его регуляция.

   4. Механизм регуляции липидного обмена. Гормоны, регулирующие липолиз и липогенез. Интеграция липидного и углеводного обменов.

   5. Жироуглеводный цикл Рэндла. Цикл триглицериды - жирные кислоты. Их механизмы и физиологическое значение. Взаимоотношения кетоновых тел, СЖК и глюкозы.

   6. Нарушение переваривания и всасывания липидов, его проявления.

   7. Жировая инфильтрация и дегенерация печени - механизмы развития и профилактика.

   8. Ожирение - виды, механизмы развития и осложнения.

   9. Дислипопротеидемии. Классификация по Фридриксону, биохимическая и клинико-диагностическая характеристика основных групп.

   10. Липидозы - наследственные нарушения липидного обмена.

   11. Перекисное окисление липидов мембран. Механизм возникновения. Реакции, метаболиты. Биологическое значение в норме и при патологии.

   12. Антиоксидантная защита (см. тему "БО").

2. Практическая часть: - выполнение лабораторной работы:

   1. Количественное определение общего холестерина в сыворотке крови методом Илька.

   2. Определение липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) в сыворотке крови.

3. Решение задач и проведение контроля конечного уровня

Литература: основная:

1. Материал лекций.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия, М., Медицина, 1990, стр. 292-291, М. Медицина, 1998, стр. 381-408, 574-577, 314-316.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия, М., Высшая школа, 1989, стр. 270-273, 280-281, 263-266.

дополнительная:

4. Марри Р. и др. Биохимия человека, М., Мир, 1993, том 1, стр. 274-297.

5. Филиппович Ю. Б. Основы биохимии, М., Высшая школа, 1993, стр. 380-402.

6. Климов А. Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз, Санкт-Петербург, 1995

7. Рецепторы ЛПНП в развитии атеросклеротических изменений сосудов, "В мире науки", 1988, № 12.

8. Лопухин Ю. М., Арчаков А. И. Холестериноз, М., Медицина, 1983.