Выводы:
Нингидриновая реакция.
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на образовании димера нингидрина и азота аминогруппы сине-фиолетового цвета.
ХОД РАБОТЫ: К 5 каплям раствора белка прибавить 5 капель раствора нингидрина и прокипятить 1-2 минуты. Появляется сине-фиолетовое окрашивание.
Выводы:
Ксантопротеиновая реакция (Мульдера)
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на образовании нитросоединений ароматических и гетероциклических аминокислот, окрашенных в ярко желтый цвет.
ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с концентрированной азотной кислотой
ХОД РАБОТЫ: В три пробирки наливают по 5 капель растворов: в 1- яичного белка, во 2 - желатина, в 3 - миозина. В каждую пробирку добавляют по 3 капли концентрированной азотной кислоты и осторожно кипятят. В первой пробирке образуется осадок желтого цвета, а во второй - слабое окрашивание, т.к. желатин не содержит циклических аминокислот. В 3-ей пробирке образуется осадок белого цвета, переходящий в желтый цвет. Пробирки охлаждают и добавляют в каждую по 10-15 капель 20% едкого натра до изменения окраски растворов, вследствие образования натриевой соли динитротирозина.
Выводы:
Реакция на тирозин (Миллона).
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на образовании осадка ртутной соли динитротирозина кроваво-красного цвета.
ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с реактивом Миллона (содержит Hg и HNO3)
ХОД РАБОТЫ: В три пробирки наливают по 5 капель растворов: в 1- яичного белка, во 2 - желатина, в 3 - миозина. В каждую пробирку добавляют по 3 капель реактива Миллона (раствор ртути в азотной кислоте) и осторожно нагревают. Отмечают изменение цвета в пробирках, характеризующее наличие в указанных белках тирозина.
Выводы:
Реакция Фоля (на аминокислоты, содержащие слабосвязанную серу).
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на щелочном гидролизе белка и последующем отщеплении серы -SH групп в виде сульфида свинца (PbS) черно-бурого цвета.
ВНИМАНИЕ:
Соблюдать меры безопасности при работе
с реактивом Фоля (содержит NaOH
и PbS)
ХОД РАБОТЫ: В три пробирки наливают по 5 капель растворов: в 1- яичного белка, во 2 - желатина, в 3 - миозина. В каждую пробирку добавляют по 5 капель реактива Фоля. Затем интенсивно кипятят и дают постоять 1-2 мин. При этом в 1 и в 3 пробирках образуется черный или бурый осадок сульфида свинца. Желатин осадка не образует, т.к. не содержит серосодержащих аминокислот.
Выводы:
Лаборатоpная работа № 2. Реакции осаждения белков.
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на денатурации и осаждении белков различными факторами:
Осаждение белков при кипячении.
ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с нагреванием пробирок.
ХОД РАБОТЫ: В 5 пробирок наливают по 5 капель раствора белка. Первую пробирку нагреть до кипения. Жидкость мутнеет, т.к. разрушаются водные оболочки вокруг молекулы белка и происходит укрупнение его частиц. Мицеллы белка несут заряд и удерживаются во взвешенном состоянии.
Во 2-й пробирке нагреть раствор до кипения и добавить 2 капли 1% раствора уксусной кислоты до слабого подкисления. При стоянии выпадает осадок белка. Частицы белка теряют заряд и приближаются к изоэлектрическому состоянию.
В 3 пробирку добавить 5 капель уксусной кислоты для сильно кислой реакции среды. При кипячении жидкости осадка не образуется, поскольку белковые мицеллы перезаряжаются и несут положительный заряд, что повышает их устойчивость.
В 4 пробирку налить 5 капель раствора уксусной кислоты, 2 капли насыщенного раствора хлористого натрия и нагреть. Выпадает белый хлопьевидный осадок, т.е. частицы белка теряют заряд.
В 5 пробирку добавить 2 капли раствора гидроксида натрия. При кипячении осадок не образуется, т.к. в щелочной среде отрицательный заряд на частицах белка увеличивается.