Практическая часть:

Лабораторная работа № 1. Качественная реакция на желчные кислоты.

ПРИНЦИП МЕТОДА: При взаимодействии желчной кислоты с оксиметилфурфуролом, образующимся из тростникового сахара под действием концентрированной серной кислоты, появляется красно-фиолетовое окрашивание (реакция Петтенкофера).

ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с концентрированной серной кислотой.

ХОД РАБОТЫ. В сухую пробирку (под которую подложен лист белой бумаги) вносят 2 капли желчи, 2 капли 20% раствора сахарозы и тщательно перемешивают стеклянной палочкой, а затем приливают 7 капель концентрированной серной кислоты и перемешивают этой же стеклянной палочкой. Через 2-3 минуты появляется красная окраска, переходящая при стоянии в красно-фиолетовую.

ВЫВОД:

Лабораторная работа № 2. Влияние желчи на активность липазы.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Активность панкреатических липаз, определяемых титрометрически, резко возрастает при действии желчных кислот.

ХОД РАБОТЫ: Готовят три колбы - две опытные и одну контрольную. В них смешивают препарат липазы и субстрат (молоко или подсолнечное масло) как указано в таблице 1:

Таблица 1.

Состав инкубационной смеси (мл)	Опытные пробы		Контроль
	без желчи	с желчью
Молоко разведенное (1:10)	10	10	10
Глицериновый экстракт поджелудочной железы	1	1	1*
Раствор желчи	-	1	1
Вода	1	-	1

* - экстракт предварительно кипятят 10 мин для инактивации липаз

Приготовленные инкубационные смеси тщательно перемешивают. Затем из каждой колбы отбирают по 1 мл смеси в заранее приготовленные стаканчики для титрования. Добавляют в каждый стаканчик по 1-2 капли раствора фенолфталеина и титруют 0,01М раствором NaOH до слабо-розового окрашивания. При первом титровании нейтрализуются органические кислоты - молочная и другие, которые присутствовали в молоке до начала действия липазы.

Оставшуюся в колбах смесь помещают в термостат (при t 40C) и через определенные интервалы времени (15, 30, 90 мин) отбирают из каждой колбы (не извлекая их из термостата) по 2 мл смеси и титруют 0,01М раствором NaOH. Время титрования и объем израсходованного NaOH фиксируют в таблице 2:

Таблица 2.

Время инкубации (мин)	Объем (мл) 0,01М NaOH, пошедшего на титрование
	Опытные пробы		Контроль
	Без желчи	С желчью
0
15
30
90

Результаты первого титрования, полученные до начала действия липаз, вычитают из результата последующих титрований.

На основании полученных данных строят график, где по оси абсцисс откладывают время (в минутах), а по оси ординат - активность липазы, выраженную объемом (мл) 0,01 М раствора NaOH, пошедшего на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся за данный отрезок времени. Сравнивают активность липазы в присутствии желчи и без нее.

ВЫВОД: (записать полученный результат и дать ему клинико-диагностическую оценку)

Лабораторная работа № 3. Эмульгирование жира.

ПРИНЦИП МЕТОДА: Эмульгирование жира различными амфифильными веществами происходит благодаря их адсорбции на границе раздела двух фаз - гидрофобной и гидрофильной.

ХОД РАБОТЫ: В пять пробирок вносят по 1 капле растительного масла. Затем в каждую пробирку соответственно приливают по 1-2 капли растворов NaOH, NaHCO₃, яичного белка, моющего средства и желчи. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и наблюдают образование эмульсии жира. Объясните механизм образования эмульсии жира в этих растворах и значение процесса эмульгирования.

ВЫВОД: (записать полученный результат и дать ему клинико-диагностическую оценку)

ЗАНЯТИЕ 14.

ТЕМА: Липиды 2. Тканевой обмен липидов.

Цель занятия: Изучить главные метаболические пути основных классов липидов (ТГ, ФЛ, жирных кислот, кетоновых тел, ХС). Научиться определять содержание общих липидов крови и насыщенности жиров.

Исходный уровень знаний и навыков:

Студент должен знать:

1. Характеристику основных классов ЛП.

2. Метаболизм ЛП в норме.

3. Пути передачи гормонального сигнала на клетку (аденилатциклазный, инозитолтрифосфатный).

4. ЦТК, его энергетический баланс.

5. Структуру и функцию полиферментных комплексов (на примере пируват-ДГ).

Студент должен уметь:

1. Проводить исследование на фотоэлектроколориметре