ЗАНЯТИЕ № 30 ТЕМА: ОСОБО ОПАСНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ. РАБДОВИРУСЫ. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БЕШЕНСТВА. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ. ЭТИОЛОГИЯ И ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОРРАГИЧЕСКИХ ЛИХОРАДОК.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Вирусы, вызывающие нейроинфекции. Общая характеристика семейств.

2. Рабдовирусы, классификация. Вирус бешенства, структура, биологические свойства, внутриклеточные включения. Бешенство: природный источник, механизм и пути заражения человека. Клинические стадии течения инфекции. Лабораторная диагностика бешенства. Специфическая профилактика.

3. Классификация группы арбовирусов. Понятие об арбовирусных инфекциях.

4. Тогавирусы. Состав семейства, структура вирусов. Роль альфавирусов в патологии человека.

5. Флавивирусы: классификация семейства, строение вирусов. Характеристика рода Flavivirus, антигенные группы, вирусы клещевого и комариного энцефалитов. Эпидемиология и патогенез заболеваний. Вирусологическая и серологическая диагностика, динамика появления антител. Специфическая профилактика и лечение.

6. Буньявирусы: классификация, структура, свойства и роль в патологии человека.

7. Аренавирусы: классификация, структура, свойства.

8. Понятие о филовирусах, вирус Эбола, Марбург-вирус.

9. Геморрагические лихорадки, классификация по Чумакову. Принципы развития геморрагического синдрома. Лабораторная диагностика. Методы профилактики.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

ВИРУСЫ, ВЫЗЫВАЮЩИЕ НЕЙРОИНФЕКЦИИ И ГЕМОРРАГИЧЕСКИЕ ЛИХОРАДКИ

(перечислите основные семейства) 1)Reouiridae (род Сoltivirus-клещевая лихорадка колорадо); 2)Togaviridae (род Alphavirus лихорадки Синдбис, Карельская, Чикунгунья, леса Семлики); 3)Flaviviridae (желтая лихорадка, клещевой энцефалит); 4)Випyаviridae (род Bunyavirus тропическая лихорадка, род Nairovirus конго-крымская геморрагическа, род Phlebovirus -лихорадка паппатачи (москитная), род Hantavirus -ГЛПС); 5)Rhabdoviridae (бешенство); 6)Filoviridae ( болезнь Maрбурга, лихорадка Эбола ;7) Arenaviridae (род Arenavirus- лихорадка Лассса)

Рабдовирусы. Вирус бешенства.

Состав семейства 6 родов, для человека опасны род Lyssavirus вирус бешенства (Rabies virus) и Vesiculovirus – везикулярный стоматит

Форма и размер вириона пулевидная 70-170 нм Наличие суперкапсида сложный вирус Геном: линейная однонитевая -РНК Наличие сероваров один серотип: капсидный белок N группоспецифический, поверхностный G-гликопротеин типоспецифический – к нему вырабатываются антитела

Методы культивирования: Заражение культур клеток почек сирийского хомячка , мышей сосунков в мозг

Источник инфекции зооантропоноз – природные очаги волки, лисы, енотовидные собаки, летучие мыши (особенно опасны, у летучих мышейх наблюдается многомесячное носительство без клиники), ласки, хорьки и другие. В антропургических очагах бродячие собаки и кошки.

Путь передачи: Механизм передачи возбудителя - контактный. Заражение при укусах и/или ослюнении людей больными животными (в слюне животных вирус бешенства появляется за несколько дней до начала клинических проявлений), редко при контакте со шкурой. Очень редко аэрозольный путь (от летучих мышей в пещерах). Отмечены случаи заражения от человека в результате операций по трансплантации роговицы глаза от погибших от бешенства людей.

Локализация в организме человека: мозжечок, продолговатый мозг, слюнные железы- слюна, спинномозговая жидкость, слезная жидкость, кровь, биоптаты кожи, отпечатки роговицы.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БЕШЕНСТВА

Экспресс-диагностика Исследуемый материал: посмертно: мозжечок, продолговатый мозг, слюнные железы ;прижизненно- слюна, биоптаты кожи, отпечатки роговицы.

1. Вирусоскопический метод - выявление специфических включений Бабеша-Негри в клетках мозга погибших людей или животных.

Тельца Бабеша-Негри в клетках мозга. Окраска по Муромцеву. Увеличение х 600

2. РИФ - выявление антигена в мазках-отпечатках мозга или слюнных желез.

Вирусологический метод Исследуемый материал: мозжечок, продолговатый мозг, слюнные железы- посмертно; прижизненно слюна, спинномозговая жидкость, слезную жидкость, кровь, биоптаты кожи, мазки-отпечатки роговицы. Заражение культур клеток ВНК-21 и др., мышей сосунков в мозг Выявление вируса по: ЦПД- бляшкообразование- полная дегенерация, гибель мышей

Идентификация вируса в реакции нейтрализации с антирабическим иммуноглобулином, РИФ, ИФА

Препараты для профилактики бешенства (цель применения): Профилактическая и лечебная иммунизация

1.Инактивированная антирабическая вакцина культура штамма фиксированного вируса бешенства Внуково-32, 30–38 пассажа, выращенного на первичной культуре клеток почек сирийского хомяка (ПСХ), концентрированная и очищенная ультрафильтрацией и инактивированнойую ультрафиолетом. Это таблетка розовато-белого цвета, после растворения - опалесцирующая  красновато-розового цвета жидкость вводят в\м 4-5 иньекций в дельтовидную мышцу.

2.Антирабический гамма-глобулин это гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови лошади, гипериммунизирова-ной фиксированным вирусом бешенства.

АРБОВИРУСЫ

Арбовирусы – собирательное понятие это экологическая группа вирусов, передающаяся от зараженных животных или человека трансмиссивным путем членистоногими (комары, клещи, москиты)

Основные семейства, входящие в группу арбовирусов: 1)Reouiridae (род Сoltivirus-клещевая лихорадка колорадо); 2)Togaviridae (род Alphavirus лихорадки Синдбис, Карельская, Чикунгунья, леса Семлики); 3)Flaviviridae (желтая лихорадка, клещевой энцефалит); 4)Випyаviridae (род Bunyavirus тропическая лихорадка, род Nairovirus конго-крымская геморрагическа, род Phlebovirus -лихорадка паппатачи (москитная), род Hantavirus -ГЛПС); 5)Rhabdoviridae (вирус везикулярног стоматита); 6)Filoviridae ( болезнь Maрбурга, лихорадка Эбола ;7) Arenaviridae (род Arenavirus- лихорадка ЛАССА)

Арбовирусные инфекции - природно-очаговые зоонозы с трансмиссивным механизмом передачи и эндемическим распространением. Возбудитель при укусе членистоногого проникает в кровь, вызывая вирусемию, а в ряде случаев способен проходить через гематоэнцефалический барьер и поражать ЦНС.

Клинические формы арбовирусных инфекций различны: лихорадки, геморрагические лихорадки, менингоэнцефалиты, энцефаломиелиты, медленные инфекции.

Состав семейства	Тогавирусы	Филавивирусы
	роды Alphavirus, Rubivirus (краснуха)	роды Flavivirus (клещевые и комариные лихорадки), Pestivirus (диареи крупного рогатого скота и свиней), Hepacivirus (гепатит С)
Форма, размер вириона	сферический 50-70 нм , капсид икосаэдр окружен оболочкой со встроенными гликопротеиновыми шипами Е1 -гемагглютинин, Е2 участвует в адсорбции к клетке и вызывает образование вируснейтрализующих антител. Нуклеокапсидный белок С. скрепляет оболочку и нуклеокапсид	Такой же сферический ,но меньше 40-60 нм. Шипы оболочки также состоят из двух белков, из них (Е1) является гемагглютинином. Нуклеокапсидный белок имеет меньшую мол. массу, чем у тогавирусов.
Наличие суперкапсида	есть	есть
Геном	одно нитевая линейная плюс РНК	одно нитевая линейная плюс РНК
Наличие сероваров	2-3 антигена	нет
Методы культивирования	куриный эмбрион, фибробласты, в мозг мышей сосунков РТГА, РСК, РН.	фибробласты, в мозг мышей сосунков РТГА, РСК, РН, РИФ.
Заболевания	Западный энцефаломиелит лошадей Восточный энцефаломиелит лошадей Венесуэльский энцефаломиелит лошадей Комплекс вирусов леса Семлики Лихорадка О'Ньонг-О'Ньонг Карельская лихорадка Лихорадка Чикунгунья	Клещевой энцефалит Японский энцефалит Желтая лихорадка Лихорадка Денге Кьясанурская геморрагическая лихорадка Омская геморрагическая лихорадка Повассан Энцефалиты Ильеус, Сент-Луис

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

Исследуемый материал: кровь, ликвор, реже - носоглоточный смыв, испражнения и моча. В летальных случаях ткани из различных отделов головного мозга (коры, аммонова рога, зрительных бугров, продолговатого мозга).

1.Обнаружение антигена вируса клещевого энцефалита в рнга

Исследуемый материал: Кровь Диагностический препарат: эритроцитарный антительный диагностикум

(эритроциты + гемагглютинин вируса клещевого энцефалита , из мозговой ткани мышей-сосунков)

Сыворотка крови	Разведения сыворотки							Контроль эритроцитарного антительного диагностикума
	1/2	1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	1/128
больного
контрольная (АГ+)

Результат: у обследуемого обнаружены антигены вируса клещевого энцефалита в титре ¼, титр контрольного антигена 1/16, Вывод: обследуемый болен клещевым энцефалитом

2. Вирусологический метод

Материал для исследования: кровь, ликвор, реже - носоглоточный смыв, испражнения и моча. В летальных случаях ткани из отделов головного мозга (коры, аммонова рога, зрительных бугров, продолговатого мозга).

Размножение вируса в системах культур клеток (фибробласты куриного эмбриона и BHK-21).

Индикация вируса по ЦПД в культурах клеток через 4-6 дней после заражения в виде круглоклеточной дегенерации с отслоением клеток от стекла

Идентификация вируса с помощью серологических реакций с диагностическими сыворотками: РН на мышах, РТГА, РСК и ИФА.

3. Серодиагностика клещевого энцефалита в ртга

Исследуемый материал: сыворотка крови_ Диагностический препарат: гемагглютинин вируса клещевого энцефалита ,полученный из мозговой ткани мышей-сосунков Дополнительные компоненты реакции: 1% взвесь гусиных эритроцитов, физ.раствор

Принцип метода: способность вируса клещевого энцефалита агглютинировать эритроциты гусей

Сыворотка	Разведения сыворотки						Контроли
	1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	сывороток	эритроцитов
больного на 5 день
больного на 20 день
«нормальная»(Ат-)
гипериммунная

Результат: титр антител на 5-й день1/20, на 20-й день1/80, нормальной сыворотки 0, гипериммунной 1/320

Вывод: обследуемый переболел клещевым энцефалитом

ГЕМОРРАГИЧЕСКИЕ ЛИХОРАДКИ - группа острых арбовирусных инфекций, общей чертой которых является вазотропность возбудителя. Патогенез - васкулит с последующим поражением различных органов и систем. Клинически - лихорадка и интоксикация, на фоне которых развивается геморрагический синдром. ГЛ -природно-очаговые заболеваниями. Резервуар вирусов в природе различные млекопитающие, в основном грызуны.

Возбудители геморрагических лихорадок входят в состав 5 семейств: Arena-, Bunya-, Filo-, Flavi- и Togaviridae.

	Буньявирусы более 200 вирусов	Аренавирусы
Состав семейства	род Bunyavirus тропическая лихорадка, род Nairovirus конго-крымская геморрагическая, род Phlebovirus - москитная лихорадка или паппатачи, род Hantavirus -ГЛПС	род Arenavirus Аренавирусы (от греч. arenosa- песчаный из-за рибосом в вирионе, похожих на песчинки)
Форма, размер вириона	Сферический (80-120 нм) с оболочкой и однонитевой фраментированной (З сегмента) минус РНК. Капсид - спиральный. Имеют транскриптазу. Репродукция – в цитоплазме. Сборка – почкование через мембрану	Сферический или овальный 120 нм. Суперкапсид с булавовидными гликопротеиновыми шипами GP1 и GP2. Под оболочкой расположены 12-15 клеточных рибосом, похожих на песчинки, что отражено в названии семейства. Капсид - спиральный. Геном представлен 2 сегментами (L, 5) однонитевой минус-РНК ; кодирует 5 белков L-, Z-, N-, G ; содержит транскриптазу -РНК-полимеразу) . Репродукция - в цитоплазме; после сборки и включения в вирион рибосомоподобных частиц почкование через плазматическую мембрану.
Наличие суперкапсида	есть	есть
Геном	фраментированная (З сегмента) однонитевая минус РНК	фраментированная (2 сегмента) однонитевая минус РНК
Методы культивирования	Внутримозговое заражения новорожденных белых мышей, крыс и хомячков.	Культуры клеток, внутримозговое заражения новорожденных белых мышей, крыс и хомячков.
Источник инфекции	млекопитающие, в основном грызуны
Путь передачи	Контактный, трансмиссивный (клещи, комары)
Заболевания	Возбудители тропической, конго-крымской, москитной лихорадки и геморрагической лихорадки с почечным синдромом	Возбудители лихорадки Ласса, Аргентинской, Боливийской, Венесуэльской и Бразильской;
Методы лабораторной диагностики	Вирусологический метод: выделяют из крови, отделяемого глотки, из плевральной, цереброспинальной жидкости, мочи заражая культуры клеток и мышей - сосунков, хомячков. Идентифицируют в РСК, РН, РИФ, ИФА;ПЦР . Серологический метод: выявляют антитела в сыворотке крови в РСК, РИФ, ИФА .

Филовирусы

Состав семейства входят вирусы Марбурга и Эбола сходные по своей морфологии, но отличающиеся по антигенной структуре

Форма и размер вириона Характерен полиморфизм, вирионы могут быть червеобразной, спиралевидной и округлой формы. Длина их колеблется от 665 до 1200 нм, диаметр поперечного сечения — 70—80 нм. По ультраструктуре и антигенному составу отличаются от всех известных вирусов

Наличие суперкапсида: да липопротеиновая оболочка

Геном: линейная минус-цепь РНК, содержит около 19000 нуклеотидов и кодирует 7 белков

Методы культивирования клетки Vero(почки зеленой мартышки ).

Заболевания, вызываемые филовирусами геморрагические лихорадки Эбола и Марбург

Источник инфекции: Полагают, что это зоонозы, однако резервуар инфекции, несмотря на активные поиски, не установлен. Путь передачи: контактный