занятие № 27
ТЕМА: ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ВИРУСОВ С ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ. СПОСОБЫ ИНДИКАЦИИ и идентификации. ПРОТИВОВИРУСНЫЙ ИММУНИТЕТ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Вирусы, природа и происхождение. История открытия. Этапы развития вирусологии. Понятие о вирионе, его структура. Химический состав и свойства вирусов.
2. Принципы классификации вирусов - критерии. Семейства РНК и ДНК-содержащих вирусов (контрольная).
3. Тропизм вирусов. Взаимодействие вирусов с чувствительными клетками - фазы.
4. Культивирование вирусов. Индикация и идентификация вирусов при культивировании их на клеточных культурах и курином эмбрионе. Клеточные культуры, линии клеток, получение, условия культивирования.
5. Классификация вирусных инфекций: а) на уровне клетки; б) на уровне организма.
6. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Прямые методы исследования клинического материала (обнаружение вирусов, вирусных антигенов или вирусных НК). Вирусологический метод диагностики. Серодиагностика вирусных инфекций.
7. Противовирусный иммунитет - факторы. Видовая резистентность. Неспецифические факторы антивирусной защиты (ингибиторы, интерферон, комплемент, фагоцитоз). Приобретенный иммунитет (гуморальные и клеточные механизмы).
8. Принципы специфической профилактики и терапии вирусных инфекций: вакцины, иммунные сыворотки (иммуноглобулины), интерфероны, этиотропная химиотерапия.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
|
Методы |
Принцип |
|
1. Экспресс-диагностика |
Выявление антигена вируса в исследуемом материале с помощью диагностических противовирусных сывороток в реакциях: РИФ, ИФА, РИА, встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.; |
|
2. Вирусологический метод |
Культивирование вирусов в культурах клеток, куриных эмбрионах, лабораторных животных
|
|
3. Серодиагностика |
Выявление антител против вируса в сыворотке крови пациента с помощью диагностикумов, содержащих вирусы или их антигены в реакциях: ИФА, непрямой РИФ или в парных сыворотках в РН, РТГА, РПГА, РСК.
|
1. Для экспресс-диагностики используют:
а) определение вирусного антигена в исследуемом материале с помощью диагностических противовирусных сывороток в реакциях: РИФ, ИФА, РИА, встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.;
|
б) обнаружение включений в пораженных клетках макроорганизма с помощью световой или люминесцентной микроскопии;
|
|
Тельца Бабеша-Негри в срезе гиппокампа. Окраска по Муромцеву. Увеличение х600
Streptococcus pyogenes (чистая культура) Окраска по Граму Увеличение _____________ |
в) обнаружение вирионов в патологическом материале с помощью электронной микроскопии или ИЭМ.
г) обнаружение геномов вируса молекулярно-генетическими методами: ПЦР; молекулярная гибридизация нуклеиновых кислот с помощью меченых зондов.
2. Вирусологический метод
Основные этапы:
1. Забор исследуемого материала.
2.Выбор по принципу цитотропизма и получение чувствительной тест-системы, определение ее жизнеспособности.
3. Заражение выбранной системы.
4.Индикация вируса на основании обнаружения его нуклеиновой кислоты, антигенов, гемагглютинина, ЦПД, включений.
5. Идентификация и титрование вируса проводится на основании:
а) определения антигенов вируса с помощью иммунологических реакций (РИФ, ИФА, РПГА, РСК, РН, ВИЭФ и др.); б) патогистологического исследования органов и тканей; в) ЦПД; г) клинических симптомов, биологических проб (кератоконьюнктивальная и др.).
Вирусологический метод (схема)
Исследуемый
материал (фекалии, носоглоточные смывы,
секционный материал и др.)
Обработка
антибиотиками для подавления бактериальной
и грибковой
микрофлоры,
центрифугирование, фильтрация
Заражение
серии
Куриных
эмбрионов
Культур
клеток
Животных
Индикация
вирусов по следующим феноменам
Отставание
в развитии,
гибель,
изменение
оболочек
эмбриона, РГА
ЦПД,
образование бляшек, РИФ, РГадс,
интерференция
Заболевание,
гибель,
гистологические
изменения
в
тканях, включения
Пассажи
Титрование
выделенного вируса; выбор рабочей дозы.
Титр
вируса
- максимальное разведение вируссодержащего
материала, в котором еще наблюдается
ожидаемый эффект (ЦПД, РГА, гибель
животного).
Идентификация
выделенного вируса
в реакциях нейтрализации, РТГадс, РСК,
подавление бляшкообразования и др. с
диагностическими сыворотками. Вид
(тип) вируса
определяется по нейтрализации
специфического эффекта вируса
соответствующей иммунной сыворотокой.
Примечание: титрование и идентификация вируса проводится с использованием одного и того же феномена.
Культивирование вирусов
Вирусы - облигатные внутриклеточные паразиты, не способные размножаться ни в одной из бесклеточных сред. Для их культивирования используются: 1) куриные эмбрионы; 2) культуры клеток (тканей, органов); 3) лабораторные животные.
