Микра / Занятия / 23. Анаэробы

ЗАНЯТИЕ № 23 ТЕМА: АНАЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Клостридии. Классификация. Среда обитания. Факторы патогенности. Клостридии столбняка. Таксономия. Свойства. Столбнячный экзотоксин. Структура, фракции. Патогенез столбняка. Иммунитет. Пассивная и активная иммунопрофилактика. Методы установления иммунной прослойки. Иммунотерапия.

2. Клостридии анаэробной газовой инфекции. Таксономия. Свойства. Токсины. Патогенез заболевания. Препараты для иммунопрофилактики и серотерапии.

3. Клостридии диффициле и их роль в патологии человека.

4. Клостридии ботулизма. Таксономия. Свойства. Патогенез ботулизма. Токсин: серотипы, свойства (термо-, кислото- и ферментоустойчивость). Признаки отравления. Серотерапия.

5. Микробиологическая диагностика клостридиальных инфекций.

6. Аспорогенные анаэробы: бактероиды, порфиромонады, превотеллы, фузобактерии, лептотрихии, пептококки, пептострептококки; их роль в патологии человека. Принципы микробиологической диагностики болезней, вызываемых аспорогенными анаэробами.

При подготовке к занятию повторить тему "Методы культивирования анаэробов".

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГАЗОВОЙ ГАНГРЕНЫ

Газовая гангрена (греч. "разъедающая язва") – раневая инфекция, вызываяемая клостридиями сопровождающаяся некрозом (омертвением тканей), газообразованием, тяжелой интоксикацией, при отсутствии воспаления.

Возбудители газовой гангрены - C. perfringens, C. Novyi, C. septicum ,C. histolyticum

Клинические формы Газовая гангрена конечностей, сепсис, перитониты , пищевые отравления – интоксикации 95% C. Perfringens Чаще всего это наблюдается при боевых ранениях ("болезнь войн"), а в мирное время -- при травмах, полученных в автомобильных и иных катастрофах, после оперативных вмешательств (особенно лапаротомии) и даже обычных инъекций, при кишечной непроходимости и пролежнях. В целом, это оправдывает определение газовой гангрены как "раневой инфекции". Преобладание C. perfringens объясняется несколькими причинами:

1) они чаще других клостридий представлены в почве и микрофлоре человека,

2) обладают одним из самых мощных некротизирующих токсинов -- альфа-токсином,

3) относительно аэротолерантны, а потому менее требовательны к ишемизации тканей,

4) обладают капсулой, усиливающей инвазивность

Исследуемый материал: Раневое отделяемое, кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты

Бактериоскопический метод

Мазок раневого содержимого Окраска по Граму Увеличение 100х10=1000 раз Нет нейтрофилов

Мазок чистой культуры C. perfringens Окраска по Граму 100х10=1000 раз

Бактериологический метод

Питательные среды и условия культивирования: плотные ( глюкозо –кровяной агар Цейслера, Вильсона – Блера среда), полужидкие Кита-Тароцци, Вильсона Блера, жидкие -Тиогликолевая среда (СКС)

Характер и скорость роста быстрый рост 8-12 часов с гемолизом и газообразованием

Морфолого-культуральные и биохимические свойства возбудителей анаэробной инфекции

Признак	Вид возбудителя
	C. perfringens	C. novyi	C. septicum	C. histolyticum
Форма	Короткие, толстые, диплобактерии	Длинные палочки, цепочки Короткие и длинные	Короткие и длинные Палочки, нити	Мелкие палочки
Подвижность	-	+	+	+
Капсула	+	-	-	-
Рост на жидкой среде	Вспенившаяся муть	Слабая муть	Выраженная муть, газ	Муть без газа
Рост на плотных средах	Круглые с зеленеющей зоной гемолиза	Шероховатые с зоной гемолиза	Кружевное сплетение с гемолизом	Круглые, гладкие с зоной гемолиза
Гемолиз	+	+	+	+
Ферментация углеводов	Да, газ	Да, газ	Да, газ	нет
Ферментация белков (протеазы)	+	+	+	++++

Для обнаружения токсинов применяют методы: Биологический – реакция нейтрализации на мышах, Иммуноферментный анализ, или метод (ИФА) — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител,

Препараты для специфической терапии газовой гангрены:

Противогангренозные сыворотки содержат антитоксические антитела, получены иммунизацией лошадей анатоксинами возбудителей

Препараты для специфической профилактики газовой гангрены:

Секстаанатоксин содержит анатоксины C. perfringens, С. aedematiens, C. tetani, C. botulinum A,B,E.

Гангренозные анатоксины получают обезвреживая токсины формалином и нагреванием, очищая и адсорбируя на гидроокиси алюминия

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СТОЛБНЯКА

Возбудитель C. tetani (барабанные палочки) –тетаноспазмин, тетанолизин

Исследуемый материал от больных - кровь, гнойное отделяемое, шовный, хирургический материал, почва

Бактериоскопический метод

C.tetani. Окраска по Граму Увеличение 100х10=1000 раз

Бактериологический метод

Питательные среды и условия культивирования

плотные ( глюкозо –кровяной агар Цейслера, Вильсона – Блера среда), полужидкие Кита-Тароцци, Вильсона Блера, жидкие -Тиогликолевая среда (СКС)

Характер и скорость роста растут медленно часов 48-36 колонии росинки напоминают сети паука

Препараты для специфической терапии столбняка:

Специфическая терапия проводится противостолбнячной сывороткой содержит антитоксические антитела, получены иммунизацией лошадей анатоксином возбудителя

Препараты для специфической профилактики столбняка:

Активная плановая профилактика проводится вакциной АКДС с 3 месяцев

Столбнячный анатоксин это токсин возбудителя столбняка, обезвреженный воздействием формалина и нагреванием, входит в состав комплексных препаратов: секстаанатоксина, АДС, АКДС.

Экстренная активно-пассивная профилактика проводится в случаях травм, родов в домашних условиях, внебольничных абортах препаратами противостолбнячной сывороткой 3000 МЕ и 0,5 мл анатоксина

Экстренная активная профилактика проводится в случаях травм у привитых препаратами 0,5 мл анатоксина

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БОТУЛИЗМА

Возбудитель C.botulinum это палочки с закругленными концами, имеют жгутики, хотя считаются слабоподвижным микроорганизмом (теннисные ракетки) –у человека А,В,Е и F Токсин ботулинических клостридий тоже относительно стабилен: при 80° С он разрушается через 30-40 минут, а при 100° С -- через 10 минут.

	C.botulinum Окраска по Граму Увеличение 100х10=1000 раз
Бактериоскопический метод

Исследуемый материал кровь, ткани, пищевые продукты

Бактериологический метод

Подготовка патологического материала прогревают на водяной бане 80ºC 30 минут

Питательные среды и условия культивирования плотные ( глюкозо –кровяной агар Цейслера, Вильсона – Блера среда), полужидкие Кита-Тароцци, Вильсона Блера, жидкие -Тиогликолевая среда (СКС)

Характер и скорость роста растут медленно 36 48-часов. На глюкозо-кровяном агаре образуют мелкие сероватые или желтоватые мутные колонии неправильной формы с зоной гемолиза. В бульоне клостридии ботулизма образуют равномерное помутнение, затем появляется осадок на дне и бульон просветляется.

Идентификация типа токсина в реакциях: 1. Реакция нейтрализации на мышах 2. РНГА с антительным диагностикумом (на эритроцитах атитоксические антитела)

	1-ой мыши введено 0,5 мл исслед. материала+ 0,5 мл антитоксической сыворотки типа А
	2-ой мыши введено 0,5 мл исслед. материала+ 0,5 мл антитокс типа В
	3-ой мыши введено 0,5 мл исслед. материала+ 0,5 мл антитокс типа Е
	4-ой мыши введено 0,5 мл исслед. материала+ 0,5 мл антитокс типа F
	Результат: 1-я мышь –жива, 2,3,4 -погибли
	Вывод: В исследуемом материале содержится ботулотоксин типа А

Характеристика некоторых неспорообразующих облигатных анаэробов^*

Роды	Виды	Морфологические, культуральные, биохимические свойства	Вызываемые заболевания	Микробиологическая диагностика
Род Bacteroides	B. fragilis B. ureolyticus B. gracilis	Бактероиды - палочковидные грамотрицательные плеоморфные бактерии, варьирующие по размерам, большинство неподвижны. B. fragilis аэротолерантен образует капсулы. Природно устойчивы к амино-гликозидам (гентамицину, канамицину, стрепто-мицину). Чувствительны к метронидазолу (трихополу)	Нормофлора кишечника, гнойные перитониты, апендициты и т.д	1. бактериологический 2.газовая хроматография
Род Porphyromonas	P.asaccharolytica P. endodontalis P. gingivalis	короткие палочrки, грамотрицательные бактерии, неподвижны. На кровяном агаре образуют темнопигментированные колонии из-за образования протогема	Инфекции полости рта и канала зуба, гнойно-воспалительные заболевания челюстно-лицевой области.	1. бактериологический 2. ИФМ при облучении ультафиолетом светятся красным цветом
Род Prevotella	P.melaninogenica P. denticola P. intermedia P. bivia P. disiens	Превотеллы - полиморфные грамотрицательные палочки, неподвижны	Превотеллы вызывают гнойно-воспалительные заболевания челюстно-лицевой области, органов брюшной полости и мочеполового тракта	1. бактериологический 2. ИФМ при облучении ультафиолетом светятся зеленым цветом 3.газовая хроматография
Род Fusobacterium	F. necrophorum F. nucleatum	Фузобактерии - палочковидные, грамотрицательные плеоморфные бактерии, неподвижны. Имеют типичную форму тонких веретенообразных палочек или полиморфные палочки с закругленными или заостренными концами различной длины. Обитают во рту (десневые карманы), в кишечнике и в половых путях.	вызывают гнойно-воспалительные заболевания челюстно-лицевой области, тонзиллит, перитонзиллярные абсцессы, абсцессы легкого, мозга, печени, внутрибрюшной полости, аспирационную пневмонию, эмпиему, эндокардит и др.). Могут вызывать тяжелый сепсис с метастазами.	1. бактериоскопический Ангина Симановского Венсана F. nucleatum + Treponema Vincenti 2. бактериологический

^*Заполняется самостоятельно

ДЕМОНСТРАЦИИ 1. Иммунопрепараты: противогангренозная, противостолбнячная и антиботулиническая сыворотки, столбнячный анатоксин, дифтерийно-столбнячный анатоксин, АКДС, секстаанатоксин. 2. Анаэростаты, газогенераторные пакеты.

27