ЗАНЯТИЕ № 28 ТЕМА: ОСТРЫЕ РЕСПИРАТОРНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ОРВИ). ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Острые респираторные заболевания. Этиология. Таксономия основных возбудителей ОРВИ.
2. Ортомиксовирусы. Классификация и общая характеристика семейства. Вирусы гриппа. Ультраструктура. Биологические особенности. Репродукция. Антигенная структура. Типы и подтипы вируса гриппа. Изменчивость - антигенный дрейф, антигенный шифт, следствия.
3. Методы лабораторной диагностики гриппа: экспресс-диагностика, вирусологический метод, серодиагностика.
4. Иммунитет. Специфическая профилактика и лечение гриппа.
5. Парамиксовирусы. Общая характеристика и классификация семейства. Ультраструктура, биологические особенности парамиксовирусов.
6. Эпидемиология и клиника основных заболеваний, вызываемых парамиксовирусами.
7. Методы лабораторной диагностики парагриппозных инфекций. Иммунитет. Специфическая профилактика и лечение.
8. Коронавирусы: классификация, свойства, роль в патологии человека, вирусологическая диагностика коронавирусной инфекции.
9. Реовирусы: классификация и характеристика семейства. Роль вирусов рода Reovirus в патологии человека, вирусологическая диагностика.
10. Вирус краснухи. Таксономия. Биологические свойства. Патогенез и клиника заболевания. Тератогенное действие вируса. Врожденная краснуха. Вирусологическая диагностика краснухи. Профилактика.
11. Герпесвирусы: состав и характеристика семейства. Резистентность к физическим и химическим факторам. Вирусы простого герпеса 1 и 2 серотипов. Свойства. Патогенез герпетических инфекций. Варицеллавирус: сходства и отличие от ВПГ, взаимодействие с организмом человека. Ветряная оспа, опоясывающий герпес. Вирусологическая диагностика инфекций.
12. Цитомегаловирус (бета-герпесвирусы). Свойства. Формы инфекции. Вирус Эпштейна-Барр (гамма-герпесвирусы). Лабораторная диагностика инфекционного мононуклеоза. Герпесвирус человека 6, роль в патологии человека ГВЧ-6, -7, -8 (синдром хронической усталости, саркома Капоши).
ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
Этиология острых респираторных вирусных инфекций (заполнить таблицу)
|
Семейство |
Род |
Вызываемые заболевания |
|
Orthomyxoviridae Суперкап, спиральный сегм. РНК- |
1.Influenzavirus 2.Influenzavirus C |
грипп А, грипп В, грипп С вакцина содержит антигены штаммов вирусов А (H3N2), А (H1 N1) и вируса типа В;шифт полн. замещ., дрейф незначит. |
|
Paramyxoviridae Суперкап., спираль. лин. РНК-, |
1.Paramyxovirus 2.Pneumovirus 3.Morbillivirus 4.Rubulavirus |
парагрипп (вирусы парагриппа 1-го и 3-го типов) RS-инфекция корь эпидемический паротит, парагрипп (вирусы парагриппа 2-го и 4-го типов) |
|
Reoviridae Прост., куб. две РНК- |
Reovirus |
риниты и другие формы ОРЗ |
|
Picornaviridae Простой, кубический РНК+ |
Enterovirus |
ЭКХО, КОКСАКИ-инфекция |
|
Rhinovirus |
Риниты |
|
|
Coronaviridae Суперкапс, спирал. РНК+ |
Coronavirus |
ОРЗ с поликлиническим течением, тяжелая (атипичная пневмония) |
|
Togaviridae Суперкапсид, куб. РНК+ |
1.Rubilvirus |
Краснуха, Лихорадка, припухание заднешейных, затылочных, околоушных и других лимфоузлов; сыпь |
Характеристика ортомиксо- и парамиксовирусов (заполнить таблицу)
|
Характеристика семейства |
ОРТОМИКCОВИРУСЫ |
ПАРАМИКСОВИРУСЫ |
|
Таксономия и классификация |
РНК, нуклеокапсид спиральный, диаметр 80-120 нм, нуклеиновая кислота из восьми фрагментов, минусовая нить РНК |
РНК, нуклеокапсид спиральный, диаметр 150-300 нм, линейная, минусовая нить РНК |
|
Форма и размер |
Сферическая 80-120 нм |
Сферическая 150-300нм |
|
Наличие суперкапсида |
Да |
Да |
|
Тип НК (особенности) |
нуклеиновая кислота из восьми фрагментов минусовая |
нуклеиновая кислота линейная нефрагментированая |
|
Тип симметрии нуклеокапсида |
Спиральный |
Спиральный |
|
Антигены |
H N - вирусов гриппа |
HN - вирусов парагриппа и паротита; Н – вируса кори; G- РСВ |
|
Методы культивирования |
Куриный эмбрион, клетки, белые мыши |
Куриный эмбрион, клетки, |
|
Источник инфекции |
человек |
человек |
|
Пути передачи |
Воздушно-капельный |
Воздушно-капельный, контактный |
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГРИППА
(Леч. арбидол –индуктор интерферона, ремантадин замедляет. репродукцию, терафлю-ингибитор нерамидазы)
Экспресс-диагностика РИФ прямой или непрямой метод – обнаружение антигена вируса в исследуемом материале. Диагностически признаком является обнаружение не менее 3 клеток цилиндрического эпителия с отчетливо видимым зеленоватым специфическим свечением, яркость которого оценивается на один крест и более.
Исследуемый материал мазок- отпечаток из носоглотки получают введением тампона по наружной стенке носа поочередно в обе полости носа на глубину 2-3 см. Затем тампон слегка опускают книзу, вводят внижний носовой ход, прижимают наружную стенку носа и вращательными движениями тщательно снимают десквамированный эпителий. Тампоны погружают в пробирку с 2 мл ФБР. Взятые материалы быстро (в течение 1-4 ч) доставляют в лабораторию.
Диагностический препарат флюоресцирующие сыворотки, содержащие антитела к вирусам гриппа А
(H1N1), А (H3N2), В, парагриппа 1, 2 и 3 типов, РС-вирусу и аденовирусам
2. Вирусологический метод (целесообразно проводить в первые 3 дня заболевания)
Исследуемый материал: отделяемое носа, зева, конъюнктивы, а также секционный материал (ткани легкого, кусочки бронхов и др.).
1 этап. Подготовка исследуемого материала Материал отбирают с помощью стерильного тампона, который погружают затем в пробирки с 5,0 мл среды Игла или среды 199 с антибиотиками и немедленно направляют в лабораторию, где тампоны с вирусным материалом отжимают в среду, материал центрифугируют в течение 20 мин при 2000-3000 об/мин и температуре 4°С или используют в неосветленном виде.
2 этап. Заражение Для выделения вирусов гриппа исследуемые материалы после их первичной обработки вводят по 0,1 мл в амниотическую полость и по 0,2 мл в аллантоисную полость 10-дневных куриных эмбрионов. Эмбрионы инкубируются 48-72 часа при t 33-35°C.
3 этап. Вскрытие эмбрионов, отсасывание амниотической или аллантоисной жидкости в пробирку. Выявление вируса в РГА.
РГА с целью выявления вируса гриппа
Исследуемый материал: вирусосодержащий материал ( амниотичекая или аллантоисная жидкость) Диагностический препарат: 1% суспензия отмытых эритроцитов кур
Принцип метода: способность вируса гриппа (тропизм) агглютинировать эритоциты кур
|
РГА |
положительная |
отрицательная |
Контроль эритроцитов |
|
Результат |
|
|
|
Вывод: положительная РГА указывает на присутствие (индикацию) вируса гриппа в исследуемом материале
4 этап. Титрование вируса в РГА (для определения рабочей дозы перед постановкой РТГА с целью идентификации вируса).
|
Разведение вируса |
1/2 |
1/4 |
1/8 |
1/16 |
1/16 |
1/64 |
Контроль эритроцитов |
|
1 кап. взвеси КЭ |
|||||||
|
Результат |
|
|
|
|
|
|
|
Титр вируса - 1/2 Рабочая доза для РТГА 4 ГЕ/0,1 мл.=4*0,5/0,1=2мл
5 Этап. Идентификация (серотипирование) вируса в рск и/или в ртга.
С помощью РСК можно идентифицировать NP-Aг и определить тип вируса, с помощью РТГА можно идентифицировать H-Аг и N-Аг, определить подтип вируса.
Идентификация вируса в РТГА
Исследуемый материал: вирусосодержащий материал ( амниотичекая или аллантоисная жидкость) Диагностический препарат: типоспецифические иммунные сыворотоки (см.таблицу)
Дополнительные ингредиенты реакции: физиологический раствор, 1% суспензия эритроцитов кур
Принцип метода: РТГА основан на способности специфических антител, содержащихся в сыворотке крови, тормозить гемагглютинирующую активность вируса гриппа соответствующего антигенного подтипа, что визуально определяется по оседанию или склеиванию эритроцитов.
Для проведения РТГА к 0,2 мл последовательных разведений типоспецифических иммунных сывороток добавляют по 0,2 мл рабочей дозы вируса в количестве 4 гемагглютинирующих единиц (ГЕ). Одной ГЕ считают последнее разведение вируса, дающее отчетливую гемагглютинацию. После 1-часового контакта сыворотки с вирусом при комнатной температуре в каждую лунку добавляют по 0,4 мл 1% взвести куриных эритроцитов. Титром сывороток считают ее последнее разведение, блокирующее 4 ГЕ вируса.
|
Диагностическая сыворотка |
Разведения сыворотки |
Контроли |
||||||
|
1/10 |
1/20 |
1/40 |
1/80 |
1/160 |
сыв. |
вируса |
эритр. |
|
|
Анти - Н1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Анти - Н2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Анти - Н3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Анти - B |
|
|
|
|
|
|
|
|
Результат: сыворотка Н1N1 тормозитгемагглютинацию в титре 1/20, Н2N2 не тормозит,
Н3N2 не тормозит, В не ингибирует . Вывод: выделен вирус гриппа Н1N1
3. Серодиагностика гриппа с помощью ртга
Исследуемый материал: сыворотка крови больного Диагностический препарат: диагностикумы сухие содержащие антигены вирусов (см. таблицу)
Дополнительные ингредиенты реакции: физиологический раствор, 1% суспензия эритроцитов кур
1-я сыворотка (взята в острый период заболевания)
|
Диагностикумы |
Разведения сыворотки |
Контроли |
||||||
|
1/10 |
1/20 |
1/40 |
1/80 |
1/160 |
1/320 |
сывор |
диагностикума |
|
|
Н1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Н2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Н3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
2-я сыворотка (взята в период реконвалесценции)
|
Диагностикумы |
Разведения сыворотки |
Контроли |
||||||
|
1/10 |
1/20 |
1/40 |
1/80 |
1/160 |
1/320 |
сыворотки |
диагностикума |
|
|
Н1N1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Н2N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Н3N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
B |
|
|
|
|
|
|
|
|
Результат: титр антител к вирусу гриппа В и H1N1 первой сыворотки 1/20, второй - к вирусу гриппа В увеличился до 1/80, к H1N1=1/20 и не изменился
Вывод: увеличение титра антител в 4 раза к свидетельствует о том , что обследуемый пациент переболел гриппом серотипа В