- •Самостоятельная и лабораторная работа
- •2► 2 Этап бактериологического метода исследования (выделение чистой культуры):
- •Методы создания анаэробиоза:
- •Размножение бактерий на жидких и плотных питательных средах.
- •Энергетический метаболизм бактерий
- •Токсичность кислорода и его форм для анаэробных организмов
- •Выделение чистой культуры анаэробов схематично
- •Дифференциально — диагностические питательные среды
- •Анаэробное и аэробное энергообразование в тканях человека
- •3 Вида анаэробного пути синтеза атф
- •Перечень контрольных вопросов
ЗАНЯТИЕ № 4
ТЕМА: ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ (КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ) МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
-
Питание бактерий. Питательные вещества – источники углерода и азота. Классификация бактерий по типам питания Аутотрофы и хемоорганотрофы
-
Факторы роста и их источники. Источники минеральных элементов.
-
Способы и механизмы переноса питательных веществ через мембрану.
-
Энергетические потребности бактерий. Пути получения энергии у аутотрофов (фотосинтез, хемосинтез). Источники и пути получения энергии у хемоорганотрофов.
-
Аэробный и анаэробный типы биологического окисления у бактерий. Аэробные, анаэробные, факультативно анаэробные и микроаэрофильные бактерии. Способы создания анаэробных условий.
-
Задачи, этапы, преимущества и недостатки бактериологического (культурального) метода исследования.
-
Рост и размножение микроорганизмов. Способы размножения. Бинарное (простое) деление, механизм. Размножение бактериальных популяций.
-
Принципы и методы культивирования бактерий. Питательные потребности микробов.
-
Питательные среды для культивирования бактерий. Требования к питательным средам. Классификация питательных сред.
-
Условия и техника культивирования бактерий. Техника посева на питательные среды. Закономерности и характер роста бактерий на плотных и жидких питательных средах.
-
Способы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.
-
Свойства, используемые для идентификации выделенных культур.
Самостоятельная и лабораторная работа
Бактериологический метод (этапы):
1► 1-й этап выделения чистой культуры аэробных бактерий: А) Микроскопия патологического материала.
Окраска мазков из патологического материала по Граму. Зарисовка препарата.
|
Мазок из патологического материала Окраска по Граму Увеличение 7х90=630 раз |
Посев патологического материала бактериологической петлей на пластинчатый мясопептонный агар (МПА) для получения изолированных колоний.
Классификация питательных сред (указать области применения)
1. По консистенции: жидкие (мясо- пептонный бульон, желчный, сахарный бульон), плотные (2- 3% агара) и полужидкие (0,15- 0,7 % агара) среды.
2. По происхождению: естественные - из молока, мяса. яиц, картофеля, сыворотки крови человека, животных и др продуктов; искусственные – 1)натуральные сбалансированные смеси питательных веществ в концентрациях и сочетаниях, необходимых для роста и размножения микроорганизмов, универсальный источник азота и углерода - пептоны - продукты неполного расщепления белков с помощью пепсина или различные гидролизаты (рыбный, казеиновый, дрожжевой и др.).2) синтетические c точным химическим составом Сотона для микобактерий, 199 для клеток.
3. По составу: простые питательные среды (мясо- пептонный бульон- МПБ, мясо- пептонный агар- МПА) и сложные (КА = МПА +5- 10% крови животных)
4. По назначению:
А) Общего назначения - универсальные , предназначенные для культивирования любых микроорганизмов (МПА,КА )
Б) Специальные для выращивания микроорганизмов не растущих на универсальных средах, дифференциации видов и избирательного выделения отдельных видов микроорганизмов:
-
элективные (селективные) для выделения определенных видов микроорганизмов и подавления роста сопутствующих – (солевой агар для стафилококков).
-
дифференциально-диагностические (ДДС) - среды, позволяющие различать виды бактерий по ферментативной активности; Они содержат: 1) универсальную питательную среду ( МПА, КА); 2)дифферецирующий фактор - химический субстрат (например, углевод), различное отношение к которому является диагностическим признаком для данного микроба.3) Индикатор, изменение цвета которого свидетельствует о биохимической реакции. (среды Эндо, Плоскирева, Гисса и другие).
-
дифференциально-селективные (ДС) - среды, позволяющие выделять бактерии определенного вида по их физиологическим особенностям и дифференцировать от других видов по ферментативной активности Они содержат: 1) МПА 2) элективный химический субстрат, препятствующий росту других видов бактерий. 3)дифферецирующий фактор - субстрат, отношение к которому является диагностическим признаком для данного микроба;) 4.) Индикатор, изменение цвета которого свидетельствует о биохимической реакции. (среды ЖСА для стафилококков, ВСА для сальмонелл, Плоскирева для шигелл и сальмонелл).
В) Обогащения среды для размножения и накопления бактерий определенного вида в клиническом материале (кровь в 20% желчном бульоне =сальмонеллы, отделяемое зева в 10 % сывороточном+ 2 % теллурита = коринебактерии.)
Г) Транспортные среды для забора и доставки (консервации) клинического материала =48 часов (Среда Амиеса –полужидкий агар+уголь активированный).)
Питательные среды (примеры):
Среда Эндо Тип среды дифференциально-диагностическая для энтеробактерий Питательная основа МПА Дифференцирующий фактор лактоза 1% Индикатор основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Е.сoli разлагают лактозу до кислоты –колонии красные с металлическим блеском, патогенные бесцветные;
Солевой агар Тип среды элективная для выделения стафилококков Питательная основа МПА Элективный фактор хлористый натрий 10%
Среда Плоскирева Тип среды дифференциально-селективная для энтеробактерий
Питательная основа МПА Элективный фактор соли желчных кислот Дифференцирующий фактор лактоза
Индикатор нейтральный красный
Желточно-солевой агар Тип среды дифференциально-селективная для S. aureus_
Питательная основа МПА Элективный фактор хлористый натрий 10%
Дифференцирующий фактор яичный желток
Индикатор нет