- •Министерство здравоохранения республики беларусь
- •Человек с большим сердцем
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Маскированные опухолевые вирусы
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Влияние качества питания на кислотно-основное состояние
- •Литература
- •Литература
- •Дыхательная гимнастика
- •Литература
- •Литература
- •Некоторые проблемы репродуктивного здоровья девушек
- •Литература
- •Ювенильные маточные кровотечения у девушек-подростков
- •Литература
- •Определение гепарина в биологических объектах
- •Литература
- •Неразвивающаяся беременность
- •Литература
- •Диагностическое значение иридодиагностики
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Этиологические аспекты спаечной болезни
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Оценка модулирующего влияния аргинина
- •В плазме крови животных (самцы 2 мес) в разные сроки после облучения в дозе 2 Гр
- •Литература
- •Партизанское соединение сидора артемьевича ковпака
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Личностная эмоциональность как этиологический фактор
- •Литература
- •Литература
- •Особенности гинекологического анамнеза и наследственной
- •Литература
- •Отдаленные результаты тромболитической терапии
- •Литература
- •Литература
- •Оценка эффективности метода непрерывной регионарной
- •Литература
- •Влияние травматического опыта детства
- •Литература
- •Варианты нарушений развития нижней полой вены
- •Литература
- •Аэробика как оздоровительный вид двигательной активности
- •Литература
- •Литература
- •Клиническая характеристика больных с анемическим
- •Литература
- •Идеи а. П. Доброславина в реализации современных задач
- •Клинические и инструментальные проявления феномена
- •Литература
- •Использование этанола в качестве радиопротектора
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Исследование качества жизни пациентов
- •Литература
- •Клинико-лабораторные и морфологические особенности
- •Литература
- •Особенности клиники менингитов, менингоэнцефалитов
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Изучение функциональных возможностей организма
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Морфологические варианты нефробластомы
- •Литература
- •Применение регулярных физических нагрузок для снятия
- •Литература
- •Литература
- •Сравнительный анализ методов оценки
- •Литература
- •Исследование биологического возраста у студентов г. Гомеля
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Cравнение результатов трансуретральной резекции (тур)
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Комплексная оценка комплаентности и ее роли
- •Литература
- •Литература
- •Особености центральной гемодинамики у детей
- •Литература
- •Оценка чистоты поверхности
- •(Степень увеличения ×100, ×500 и ×5000 соответственно)
- •И полировочных дисков (степень увеличения ×100, ×500 и ×5000 соответственно)
- •Литература
- •Особенности теплообмена и формирования тиреоидного
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Лейкоцитарная формула vs лейкоцитарные индексы
- •* Различие значимо в сравнении с соответствующим показателем контрольной группы (к). Данные представлены в виде (Ме; 25–75%; Min–Max).
- •У пациентов в процессе лечения хронических ран
- •* Различие значимо в сравнении с соответствующим показателем контрольной группы (к). Данные представлены в виде (Ме; 25–75 %; Min–Max).
- •Литература
- •Селективная гемосорбция в комплексном лечении сепсиса
- •Литература
- •Адипоцитокинемия у гипертензивных пациентов
- •Литература
- •Клинико-диагностические и терапевтические параллели
- •Литература
- •Взаимосвязь объема различных видов памяти с симптомами
- •Литература
- •618.396-06:618.4
- •Литература
- •Вариантная анатомия запирательной артерии
- •Литература
- •Параллели вегетативного обеспечения и морфологической
- •Литература
- •Влияние ионизирующего излучения на количество
- •Литература
- •Эндокринная активность семенников крыс
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Риск развития онкопатологии кожи
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •Литература
- •К вопросу о профилактике травматизма
- •Литература
- •Амбулаторные аспекты ведения пациентов с циррозом печени
- •Литература
- •Влияние оральных контрацептивов на организм
- •Литература
- •Литература
- •Варианты экспрессии α3 и α5 субъединиц коллагена IV
- •Литература
- •Эффективность антибиотикотерапии
- •Литература
- •Литература
- •Содержание
- •Медикаментозный аборт — медико-социальный аспект 163
Литература
1. Бакун, О. В. Гормональные и иммунологические изменения у девочек с пубертатными маточными кровотечениями / О. В. Бакун // Бук. мед. вестник. — 2004. — Т. 8, № 2. — С. 18–20.
2. Богданова, Е. А. Особенности гормонального статуса у девочек с маточным кровотечением пубертатного периода / Е. Богданова, Т. Глыбина, Е. Сибирская // Проблемы репродукции. — 2010. —Т. 16, № 3. — С. 35–39.
3. Шевченко, В. Н. Гормонально-метаболический статус девочек с инвертированным пубертатом / В. Н. Шевченко // Педиатрия, акушерство и гинекология. — 2009. — Т. 71, № 2. — С. 74–75.
4. Redmond, J. P. Thyroid dysfunction and women's reproductive health / J. P. Redmond // Thyroid. — 2004. — № 14 (Suppl 1). — Р. 5–15.
5. Strickland, J. L. Abnormal uterine bleeding in adolescents / J. L. Strickland, J. W. Wall // Obstet. Gynecol. Clin. North. Am. — 2003. — Vol. 30, № 2. — P. 321–335.
УДК: 612.015.:514.1+577.1.-574.995.17
Определение гепарина в биологических объектах
Андрияка А. А., Борисенко Е. А., Корж А. В.
Научный руководитель: д. м. н., проф. С. В. Выдыборец
Национальная медицинская академия
последипломного образования им. П. Л. Шупика,
Киевский областной онкологический диспансер,
г. Киев, Украина
Черниговская областная станция переливания крови
г. Чернигов, Украина
Введение
В последнее время в клинической практике особое внимание уделяется изучению физиологически активных веществ (ФАВ) при различных состояниях [3]. Это обусловлено, прежде всего, их значительной биологической активностью, влиянием на возникновение, развитие и течение биохимических изменений в организме. Наше внимание привлекло такое ФАВ как гепарин. Учитывая значительную физиологическую активность гепарина, его участие во многих патофизиологических процессах, нами была поставлена цель— применить электрофоретический метод определения количественного содержания гепарина в пробах биологических субстратов, который позволял бы из смеси мукополисахаридов плазмы крови виделять только гепарин.
Материалы и методы исследования
1. Полиакриламидный гель, в состав которого входит 22 %-ный раствор 0,1 М солевой фосфатсодержащей буферной смеси рН 7,4–7,6.
2. 0,06 М натрий-барбитуратный буфер рН 8,6.
3. 0,1 М солевая фосфатсодержащая буферная смесь рН 7,6.
4. 5 % раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 Н соляной кислоте.
5. 0,1 Н раствор NаОН.
6. Фиксирующая смесь: метанол : вода : уксусная кислота = 10:10:1.
7. Краситель: 0,1 %-ный раствор толуидинового синего в 3 % уксусной кислоте.
8. 3 % раствор уксусной кислоты.
9. Стандарт коммерческого препарата гепарина 50 ЕД/мл.
10. Эллюирующий раствор: смесь 0,1 М СаСl2: этанол (0,3 мл : 0,7 мл).
11. Аппарат для горизонтального гельэлектрофореза «АГГЭ-3».
12. Фотоэлектроколориметр ФЭК-56 М.
13. Центрифуга лабораторная на 3000 об/мин.
Ход определения. Берут биологический образец, в котором необходимо определить содержание гепарина, например, плазму, сыворотку, биологическую ткань, высушивают при температуре 60 °С, а затем измельчают. Навеску пробы 50 мг экстрагируют 3 мл солевой буферной фосфатной смесью при рН 7,6 на протяжении 2-х часов при температуре 60 °С. Два мл экстракта смешивают с равным объемом 5 %-ного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты для осаждения мукополисахаридов. После преципитации последних пробу центрифугируют. Полученный осадок мукополисахаридов растворяют несколькими каплями 0,1 Н раствора NаОH и доводят объем до 1 мл барбитуратным буфером рН 8,6. Далее 0,02 мл этого раствора вносят в лунки, содержащие полиакриламидный гель.
Проводят электрофорез, используя барбитуратный буфер рН 8,6 при напряжении 140–180 В и силе тока 20–40 мА на протяжении 30–40 мин. В качестве стандарта используют 0,5 ЕД гепарина (0,00385 мг), которые проводят через все этапы исследований. После окончания электрофоретического выделения гепарина, гелевую пластину помещают в фиксирующий раствор на 10–15 мин., а далее на 15–20 мин. — в раствор красителя. При этом на синем фоне окрашенной гелевой пластины проявляются пурпурного цвета зоны локализации гепарина. Затем гелевые пластины отмывают в 3 %-ном растворе уксусной кислоты, вследствие чего происходит изменение цвета этих пятен на сине-фиолетовый. Выделенный таким образом гепарин подлежит количественной оценке денситометрически, или путем колориметрической процедуры, которая нами и применялась. Соответственно уровню электрофоретической миграции пятна гепарина-стандарта и исследуемые зоны вырезали и экстрагировали, помещая их в 3 мл эллюирующего раствора. Полученные эллюаты фотоколориметрировали на ФЭК-56 М в кюветах с толщиной слоя 0,5 см при длине волны 597 ± 10 нм. Количество гепарина в пробе оценивали относительно стандарта (мкг/г).
Результаты и их обсуждение
Гепарин как ФАВ является высокосульфатированным мукополисахаридом и содержится почти у всех тканях и жидкостях человека. Для его экстракции мы использовали солевую буферную смесь с физиологическим значением рН, что позволило экстрагировать физиологически активные формы ФАВ. Смешивание экстракта с фосфорно-вольфрамовой кислотой приводит к осаждению всех мукополисахаридов и белков. Примененная электрофоретическая процедура выделения гепарина из раствора биосубстрата позволяет выделять его из всех мукополисахаридов, которые есть в наличии в биологическом образце. Данные об этом приведены в таблица 1.
Таблица 1 — Содержание гепарина в некоторых биологических субстратах (М ± m) (мкг/г)
Объект исследования |
Количество исследований (n) |
Содержание гепарина |
Кожа морской свинки |
30 |
45,4 ± 0,04 |
Кожа человека |
88 |
20,7 ± 0,2 |
Сыворотка крови человека |
10 |
30,7 ± 3,12 |
Плазма крови человека |
10 |
23,4 ± 0,79 |
Эритроциты человека |
10 |
21,7 ± 2,03 |
Выводы
Выделенное из биологического субстрата вещество является гепарином, который имеет высокую электрофоретическую миграционную способность, что позволяет выделять его из смеси мукополисахаридов. Чувствительность метода составляет 0,05 ЕД (не менее 0,3 мкг). Метод количественного определения гепарина может быть использован в клинической практике для изучения изменений его содержания при различных патологических состояниях, а полученные результаты можно использовать для сравнительной характеристики при изучении показателей в динамике.