- •Лабораторная работа № 1
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Лабораторная работа №2
- •Теоретическая часть Стерилизация стеклянной посуды
- •Стерилизация инструментов и приборов
- •Лабораторная работа № 3 Тема: Питательные среды и техника их приготовления.
- •Стерилизация питательных сред
- •Техника приготовления основных питательных сред
- •Стандартные питательные среды
- •Специальные (элективные) питательные среды
- •Дифференциально-диагностические (цветные) питательные среды
- •Определение рН питательных сред
- •Лабораторная работа № 4 Тема: Методы посева и культивирование продуцентов.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 5 Тема: Изучение роста микроорганизмов и влияние на него рН и температуры культивирования.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 6 Тема: Выделение чистых культур бактерий. Количественный учет микроорганизмов.
- •Метод выделения чистых культур с помощью химических веществ.
- •Методы обогащения.
- •Количественный учет микроорганизмов путем счета колоний(чашечный метод Коха)
- •Практическая часть
- •3. Определение микробного числа почвы
- •4.Определение микробного числа воздуха
- •5. Определение микробного числа воды
- •6. Определение микробной загрязненности предметов обихода и рук
- •Лабораторная работа № 7 Тема: Отделение биомассы микробов от культуральной жидкости.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 8 Тема: Изучение ферментативной активности (бродильной, протеолитической, целлюлозолитической) микроорганизмов.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 9 Тема: Исследование хлебопекарных дрожжей.
- •Практическая часть
- •3. Определить процентное содержание сахаромицетов и посторонних микроорганизмов
- •4. Качество прессованных дрожжей.
- •Лабораторная работа № 10 Тема: Методы получения аминокислот из микробной массы.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 11 Тема: Методы экстрагирования из микробной массы ферментов, витаминов и липидов.
- •Практическая часть
- •1 Метод.
- •Лабораторная работа № 12 Тема: Микрофлора молочнокислых продуктов. Бактериальные препараты, используемые в пищевой промышленности (закваски, бифидумбактерии, лактобактерии).
- •Микрофлора молочнокислых продуктов
- •Бактериальные препараты, используемые в пищевой промышленности
- •Практическая часть
Дифференциально-диагностические (цветные) питательные среды
Среда Эндо. К 100 мл нейтрального расплавленного 3%-ного мясопептонного агара прибавляют 1 мл 10%-ного водного раствора кристаллического углекислого натрия, выдерживают в текучепаровом аппарате в течение 10 мин при температуре 100° С, охлаждают до 60° и стерильно прибавляют 1 г химически чистой лактозы, растворенной в 5 мл стерильной воды, и смесь фуксина с безводным сульфитом натрия. Смесь готовят следующим образом. Растворяют 0,5 г сульфита натрия в 5 мл стерильной воды и добавляют к 1 мл насыщенного спиртового раствора основного кристаллического фуксина до тех пор, пока жидкость не станет бесцветной или слегка розоватой. Обесцвеченную смесь фуксина с сульфитом добавляют к расплавленному агару, и последний принимает розоватый цвет. После тщательного перемешивания (следят за тем, чтобы не образовывалась пена) среду разливают по чашкам. При остывании среда делается цветной, в толстых слоях имеет розоватый оттенок. На этой среде можно легко отличить кишечную палочку, паратифозных бактерий.
Готовят среду перед посевом. Во избежание покраснения ее защищают от света. Выпускается в виде сухого порошка. Способ приготовления указывается на этикетке.
Среда Гисса. Для изготовления индикатораАндредэ берут 100 мл дистиллированной воды, 0,5 г фуксина кислого и 16 мл 4%-ного водного раствора едкого натра. Выдерживают на водяной бане 10 мин. Хранят в темном месте.
Среду с индикатором Андредэ приготовляют следующим образом. Готовят пептонную воду. Для этого берут 1% пептона и 0,5% поваренной соли на определенный объем дистиллированной воды. Кипятят до растворения пептона, фильтруют через бумажный складчатый фильтр, устанавливают рН 7,0—7,2. После подщелачивания 10%-ным раствором NаОН снова кипятят в течение 10 мин, фильтруют и к готовой 1%-ной пептонной воде (рН 7,0—7,2) добавляют 1% индикатора Андредэ. К среде с индикатором добавляют требуемые углеводы или многоатомные спирты в количестве 0,5% — 1% (лактозу, глюкозу, сахарозу, маннит, дульцит и др.). Среды разливают по пробиркам, снабженным для учета образования газа бродильными трубочками. Вместо трубочек иногда помещают кусочки ваты — 0,02 г на пробирку. Проводят дробную стерилизацию при температуре 100° С в течение 20 мин три дня подряд.
Правильно приготовленная среда имеет соломенно-желтый цвет.
Среда Кесслера. В 1 л водопроводной воды вносят 50 мл свежей бычьей желчи и 10 г пептона. Кипятят на водяной бане 15 мин, постоянно взбалтывая. После полного растворения среду фильтруют через вату и добавляют 10 г лактозы. Доводят рН до 7,7. К 1 л среды добавляют 4 мл 1 %-ного водного раствора генцианвиолета и разливают в пробирки с поплавками. Стерилизуют в автоклаве при избыточном давлении 0,1 МПа в течение 15 мин.
Определение рН питательных сред
Для культивирования микробов на искусственных питательных средах особое значение имеет концентрация водородных ионов, так как каждый вид микроба может развиваться только при определенной кислотности или щелочности. Большинство бактерий приспособлено к росту и размножению в нейтральной или слабощелочной среде (рН 7,0—7,6).
Для определения реакции питательной среды применяют два метода: электрометрический (с помощью рН-метра) и колориметрический. В лабораторной практике чаще всего используется наиболее простой колориметрический метод по Михаэлису, основанный на изменении цвета индикатора вследствие диссоциации его в зависимости от концентрации водородных ионов в среде. При определении рН по Михаэлису применяют индикаторы нитрофенолового ряда. Ввиду того, что для выращивания микробов готовят среды слабощелочной реакции, при определении рН среды в качестве индикатора используют метаннитрофенол, который позволяет определять рН в пределах от 6,8 до 8,4. Растворы индикатора готовят на дистиллированной воде и хранят во флаконах из темного стекла с притертой пробкой.
Контрольные вопросы:
Состав питательных сред.
Как культивируют в лабораторных условиях микроорганизмы?
Какие бывают питательные среды по консистенции?
Как различают питательные среды по происхождению?
Плотные питательные среды и их характеристика.
Сухие питательные среды и их характеристика.
Углеводные питательные среды, их характеристика.
Автоклавирование.
Стерилизация текучим паром.
Пастеризация.
Стерилизация фильтрованием.
Как готовят МПБ, МПЖ, МПА?