Практическая часть

1. Выделить чистую культуру методом рассева в глубине среды.

Берут 3-5 пробирок, в которых находится по 5-10 мл питательного желатина или мясо-пептонного агара и расплавляют их содержимое на водяной бане. Пробирки с расплавленной средой охлаждают до 43-45ºC и ставят в теплую воду, чтобы предупредить застудневание среды. В одну из пробирок стерильной пипеткой или петлей вносят исследуемый материал. Затем другой стерильной пипеткой или петлей часть содержимого первой пробирки переносят во вторую, из второй – в третью и т.д. Засеянные пробирки со средой хорошо перемешивают, зажав их между ладонями (вращают несколько раз то в одну, то в другую сторону). Приготовленные таким образом разведения бактерии выливают из пробирок в чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок.

После загустевания среды чашки помещают в термостат и термостатируют 24 часа при температуре 37 ºC. Количество выросших в чашках Петри колоний уменьшается по мере увеличения разведения взятого на посев материала.

2. Выделение чистой культуры по методу Дригальского.

Расплавленную питательную среду разливают в 3 чашки Петри с толщиной слоя не менее 0,5 см. Застывшую среду обязательно подсушивают. В первую чашку петлей вносят небольшое количество исследуемого материала и шпателем Дригальского или шпателем, сделанным из пастеровской пипетки, втирают его в поверхность питательной среды. Затем шпатель (не обжигая и не набирая нового материала) переносят сначала во вторую чашку, а затем в третью. В каждой из них оставшийся на шпателе материал втирают в поверхность питательного агара.

Вместо шпателя можно использовать бактериальную петлю. Для этого ее с небольшим количеством микроорганизмов кладут плашмя на питательную среду и проводят, не повреждая поверхности, штрихи по всей среде или по секторам, разделив дно чашки (если среда прозрачна) на 4 или 8 частей. Штрихи можно проводить в двух взаимно перпендикулярных направлениях. Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые петлей, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет линию посева и дает возможность получить изолированные колонии микробов.

3. Определение микробного числа почвы

Стерильную расплавленную среду МПА (для выявления бактерий) и сусло - агар (для выявления дрожжей и плесневых грибов) разливают каждую в 3 стерильные чашки Петри (всего 6 чашек). Навеску почвы, взятую в асептических условиях, суспендируют 2 мин в 100 мл стерильной водопроводной воды. Дают отстояться частичкам почвы в течение 5-10 мин. Из надосадочной жидкости отбирают 1 мл и переносят в другую пробирку, заполненную 9 мл стерильной водопроводной воды (разведение 1:103). Встряхивают суспензию, отбирают 1 мл надосадочной жидкости и переносят в третью пробирку с 9 мл воды (разведение 1:104). Посев производят из второй или третьей пробирки на выбор: 0,05 мл суспензии соответствующего разведения наносят на поверхность питательного агара в чашке Петри и размазывают стерильным шпателем Дригальского по поверхности плотной питательной среды (МПА и СА). Чашки переворачивают вверх дном, и чашки с МПА инкубируют при 37° С 48 ч, а с СА выдерживают при 24° С 6-7 суток. Подсчет выросших колоний проводится на следующем занятии.