4.Определение микробного числа воздуха

Методы микробиологического исследования воздуха подразделяют на седиментационные и аспирационные. Наиболее простым является седиментационный метод Коха: стерильные чашки Петри с плотной питательной средой открывают в местах отбора проб воздуха и выдерживают в течение определенного времени (5-30 мин), после чего закрывают и термостатируют.

По количеству выросших колоний подсчитывают микробное число воздуха, пользуясь правилом Омелянского, в соответствии с которым считают, что на поверхность питательной среды площадью 100 см2 в течение 5 мин оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л воздуха. Каждая микробная клетка дает начало одной колонии. Зная количество выросших колоний и время экспозиции, вычисляют количество микробов, содержащихся в 1 м³(1000 л) воздуха.

Для определения микробной загрязненности воздуха расплавляют на водяной бане стерильные среды МПА и СА и разливают каждую в 3 стерильные чашки Петри (всего 6 чашек). Чашки ставят в месте отбора проб и открывают на 5, 10 и 15 мин. Время выдержки отмечают на крышке чашки.

Затем чашки с МПА термостатируют при 37° С 48 ч, а с СА - при 24° С 6-7 суток, перевернув их вверх дном. Подсчет колоний ведут на следующем занятии.

5. Определение микробного числа воды

Микробное число воды - это общее количество микроорганизмов, содержащееся в 1 мл воды. Для санитарно-микробиологического исследования водопроводной воды пробы берут из уличных водоразборов и кранов внутренних водопроводов. Краны обжигают, затем полностью открывают и спускают воду 10 мин., а затем отбирают пробы воды с соблюдением требований асептики, не смачивая пробки, в количестве не менее 0,5 л. Если вода подвергалась хлорированию, то ее собирают в колбы, содержащие 2 мл 1,5%-ого стерильного раствора тиосульфата натрия. При посеве в агаризованную среду 1 мл воды вносят в пустую стерильную чашку Петри, куда затем наливают 10-12 мл расплавленного МПА (45° С) и тщательно перемешивают. После застывания агара посевы инкубируют при 37° С 24 ч. Из одной пробы воды засевают 3 параллельных чашки и не только на МПА, но и на сусло - агар для выявления роста дрожжей и грибов, в этом случае посевы инкубируют 2-З суток при температуре 24° С.

6. Определение микробной загрязненности предметов обихода и рук

Для анализа микробной загрязненности столов, оборудования, полотенец, халатов, рук персонала используют тампонный метод. Для этого готовят ватные тампоны, стерилизуют их, погружают в пробирки с 2 мл стерильной воды или изотонического раствора хлорида натрия, при этом тампон не должен касаться поверхности жидкости, смачивают тампон непосредственно перед взятием проб. Для отбора проб с плоских крупных поверхностей (столы) используют трафареты из проволоки или жести, которые предварительно стерилизуют фламбированием; затем накладывают их на поверхность стола, производят смыв влажным тампоном (салфеткой) с поверхности 100 см2, ограниченной трафаретом; тампон помещают в пробирку, добавляют еще 8 мл жидкости и тщательно прополаскивают тампон (салфетку) с последующим отжимом его.

Общую микробную загрязненность определяют, засевая 1 мл смыва, в глубину расплавленного МПА в чашке Петри, как это описано для определения микробного числа воды. Посевы выращивают сутки при 37° С, подсчитывают количество выросших колоний и определяют общую микробную загрязненность данного объекта. Для выявления дрожжей и грибов делают посев на сусло-агар.

Смывы с рук получают, тщательно протирая ладони, межпальцевые и подногтевые пространства влажным стерильным тампоном на деревянной пилочке. Тампон погружают в ту же пробирку, в которой он смачивался, добавляют еще 8 мл стерильной воды. Смывы с поверхности предметов содержатся в 10 мл стерильной воды (2 мл для увлажнения салфетки, 8 мл доливают к смывам), поэтому исходный смыв уже разведен 1:10. Для приготовления разведения 1:100 1 мл исходного смыва (1:10) помещают в пробирку и доливают к нему 9 мл стерильной водопроводной воды. Берут две стерильные чашки Петри, нумеруют их со стороны дна (№ 1 и 2). В первую чашку вносят 1 мл исходного разведения смыва (1:10), во вторую - 1 мл разведения 1:100. Заливают в каждую чашку 15-30 мл расплавленного и охлажденного до 35° С МПА. После застывания агара посев термостатируют при 37° С сутки. Параллельно ведут посев на 2 чашки со стерильным СА. Этот посев выдерживают при 24° С 4- 5 суток.

В отчете по данной работе указать классификацию и способы стерилизации питательных сред, этапы подготовки микробиологических материалов для количественного учета чашечным методом, схему подготовки разведении и посева, описать конкретную задачу.

Вопросы для самоконтроля

1. Что называется чистой культурой микроорганизмов?

2. Каково назначение чистых культур микроорганизмов?

3. Как выделяют чистые культуры по методу Коха?

4. Как выделяют чистые культуры по методу Дригальского?

5. Какие счетные камеры вам известны?

6. Что из себя представляет счетная камера Горяева?

7. Из каких этапов складывается процесс изготовления исследуемого препарата для проведения количественного учета с помощью счетных камер?

8. Каковы размеры бактериальных клеток?

9. Способы измерения микроорганизмов.

10. Как определить цену окуляр-микрометра?