25.Экспресс-методы определения антибиотиков и микроорганизмов в продуктах животного происхождения.

Проведение эксперимента с помощью стрип-систем API Candida

Стрип-система API Candida (от bioMerieux) предназначена для идентификации дрожжевых грибов рода Candida, представляет собой 10 колонок, все обезвоженные, с внесенными индикаторами.

1.Сделать разведение исследуемого штамма. Для этого перевить большую колонию (2-3 мм диаметром) чистой культуры в пробирку со стерильным физическим раствором (NaCl 0,85%). Так, чтобы раствор был однородно окрашенный, без осадка. Интенсивность помутнения сравнить со стандартом мутности.

2.Держа полоску под небольшим углом от поверхности стола, привить разведение в каждую колонку стерильной пипеткой, косаясь концом пипетки стороны колонки, чтобы избежать попадания воздуха в стрип. Каждый хорошо должен быть заполнен - по горло.

3.У основания емкости инкубации есть маленькие углубления в основании, нужно заполнить их стерильной водой. Поместить полоску в эту емкость. Не должно быть такого большого количества воды, чтобы это намочило полоску API. Маркируйте. Поместите полосу в термостат при 37 ^oC в течение 18-24 часов.

Каждый стрип содержит раствор чистой бактериальной культуры, повторно гидратируя высушенный реактив в каждой колонке. Некоторые из колонок должны быть абсолютно заполнены, тогда как другие покрыты стерильным вазелиновым маслом (анаэробные реакции).

Полоска находится в небольшой, пластмассовой емкости с созданной влажностью в течение 18-24 часов при температуре 37°C. Живущие бактерии продуцируют ферменты, меняя рН среды и реагируя с индикаторами. Реактивы в колонках специально предназначены, чтобы проверить на присутствие продуктов бактериального метаболизма, определенного для определенных видов бактерий. Способность к ферментации углеводов оценивают по изменению окраски среды вследствие образования органических кислот (соответственно, происходит уменьшение рН), вызывающих изменение окраски индикатора.

Чтение результатов

После инкубации каждый стрип (отдельный тест) имеет определенное цветное изменение, указывающего на присутствие метаболической реакции.Интерпретация этих 10 реакций преобразована в номер, по которому и определяется вид микроорганизма

30.Потенциометрическое титрование. Титрование по Карлу Фишеру.

Потенциометрическое титрование основано на определении эквивалентной точки по изменению потенциала на электродах, опущенных в титруемый раствор. При потенциометрическом титровании используют электроды как неполяризующиеся (без протекания через них тока), так и поляризующиеся (с протеканием через них тока).

Титрование по Карлу Фишеру - классический метод титрования в аналитической химии, используемый для определения малого количества воды в анализируемой пробе. Метод был открыт в 1935 году немецким химиком Карлом Фишером.

В настоящее время используются два варианта метода: кулонометрический и потенциометрический.

Кулонометрический метод

Основная часть ячейки титрования заполнена анодным раствором, в который помещается проба анализируемого вещества. Анодный раствор состоит из спирта, основания, оксида серы и йода . В качестве спирта обычно используют метанол или монометиловый эфир этиленгликоля, а в качестве основания — имидазол или пиридин.

Ячейка титрования также включает в себя анодную часть с анодным раствором, погруженную в анодный раствор. Эти две зоны разделены ион-проницаемой мембраной. Титрование проводится йодом I₂, который восстанавливается на платиновом аноде при прохождении через него электрического тока. В присутствии воды йод окисляет SO₂, при этом один моль I₂ взаимодействует с 1 моль H₂O. Другими словами, 2 моль электронов реагируют с 1 моль воды:

B·I₂ + B·SO₂ + B + H₂O → 2BHI + BSO₃

BSO₃ + ROH → BHROSO₃

Точка эквивалентности, как правило, определяется бипотенциометрическим методом. В анодный раствор погружена пара контрольных платиновых электродов, между которыми пущен постоянный ток. Вблизи точки эквивалентности раствор содержит в основном I и мало I₂. В точке эквивалентности появляется избыток I₂, что приводит к резкому падению напряжения между контрольными электродами и служит сигналом окончания титрования.

Суммарный заряд, пошедший на выделение йода, пропорционален содержанию воды в образце.

2. Объемный метод

Аналогичен кулонометрическому, но в качестве титранта используется анодный раствор, основание, SO₂ и известная добавка I₂). Один моль I₂ потребляется для каждого моля Н₂О. Точка эквивалентности также детектируется бипотенциометрическим методом.