Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
шпоры.docx
Скачиваний:
42
Добавлен:
09.04.2015
Размер:
209.13 Кб
Скачать

29. Иммуноферментный анализ. Гомогенный и гетерогенный ифа. Применение в пищевой промышленности.

ИФА-позволяет опр-ть тот или иной компонент в сыворотке крови, молока,вытяжке из образцов почвы.Но анализируемых компонент должен обладать св-вами антигена,т.е. способностью вызывать в организме чел.или жив.синтез особых белков –антител.Для этого получают чистый антиген,соответствующие антитело и побдирают фермент в кач-ва метки для антитела или антигена.В основе метода лежит принцип взаимодействия между антигеном и соответствующему ему антителом.Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием анти-антитела.обычно это пероксидаза хрена. Антиген –клетки м.о.,вирусов,белки и полисахариды.

Неполноценные антигены – гаптены!

Антитела получают путем иммунизации жив-х соответствующим антигеном. Иммунный ответ тела сопровождается синтезом антител, различных по структуре и предназначению.

Антитела поликлонанальные- гетерогеннты к сродству к антигену.(много их выделяется)

Для их очистки используется аффинная хром-фия.

Многоклональные антитела –одна специфичность.Получают методами клеточной инженерии.Хар-ся постоянством состава и физ-хим св-в.Чтобы связать фермент с антегеном или антителом без его потери активности используют следующие методы:биохимические(сшивка при помощи реакционноспособных групп),иммунологические(антитела и их составляющие прим-ся в кач-ве сшивающих звеньев) и генноинженерные(синтез гибридных белков м.о.).

Разделение: направленное воз-ие на ферментативную активность комплекса. Такой ИФА реализ-ся в однофазной системе – в растворе и наз-ся -гомогенным или жидкофазным.

ELISA опр-е фермента, связанного с иммуносорбентом –физич.разделение с помощью твердой фазы,связывающий меченный реагент. – гетерогенный или твердофазный ИФА.