Хід досліджень при виявленні збудника ботулізму.

1 день дослідження

2 день дослідження

3 день дослідження

Матеріал хворого: - промивні води (розтирають);

- блювотні маси (розтирають);

- кров (розводять

цитратом Na 1:3)

↓

приготування мазків з дослідного матеріалу

- забарвлення по Граму;

- виявлення капсул методом Йоне

↓

I. Посів на Кітта-Тароцці; стерильне лакмусове молоко; середовище Вільсона-Блера; середовище Врублевського; жовткове середовище, 5% кров'яний МПА і культивування в умовах анаеростата.

II. Виявлення ботулінічного токсину. Матеріал

хворого екстрагують в 0,9% р-ні Nacl, фільтрують, центрифугують. Підготовлений матеріал розливають по 1 мл в 5 пробірок.

A B E F нормальна

В пробірки додають по 1 мл протиботулінічних сироваток різних сероваріантів.

↓

Проводять зараження п'яти лабораторних тварин (білих мишей). Вводять по 0,5-1,0 мл кожної суміші внутрішньочеревно або підшкірно.

I. Облік і опис результатів росту мікроорганізмів на рідких і щільних живильних середовищах:

- середовище Кітта-Тароцці, стерильне лакмусове молоко; середовище Вільсона-Блера; середовище Врублевського; жовткове середовище; анаеробний кров'яний агар.

↓

приготування мазків з колоній, що виросли, забарвлення по Граму .

↓

Виявлення типових “тенісних ракеток” із спорами.

↓

Висів чистої культури на середовище Врублевського

I. Вивчення росту мікроорганізмів

на середовищі Врублевського.

↓

Забарвлення колоній по методу Грама.

↓

Ідентифікація збудника:

- По морфології (рухливість);

- у РНГА;

- визначення біохімічної активності (розкладання глюкози; гідроліз желатину; ферментація ліпази; пептонізація молока);

- по антигенній структурі в РА на склі.

II. Облік виявлення ботулінічного токсину. Якщо в дослідному матеріалі був ботулінічний токсин, виживе лише тварина, якій ввели токсин, нейтралізований відповідною сироваткою. У останніх тварин розвивається парез кінцівок, ураження внутрішніх органів.

1 день дослідження

2-3 день дослідження

4-5 день дослідження

Матеріал хворого: - раньове відокремлюване;

- шматочки

тканин

↓

приготування мазків з дослідного матеріалу

↓

- забарвлення по Граму;

- виявлення спор методом

Циля-Нільсена

↓

I. Посів на середовище Кітта-Тароцці, 5% кров'яний МПА і культивування в умовах

анаеростату.

II. Матеріал хворого екстрагують в 9% розчині NaCl. З метою ідентифікації токсину вводять екстрагований матеріал експериментальним тваринам (білим мишам).

I. Облік і опис результатів росту

мікроорганізмів на живильних

середовищах:

- характеристика колоній;

- приготування мазків з тих,

колоній, що виросли та

забарвлення по Граму

↓

висів чистої культури на середовище Врублевського

II. Облік ідентифікації токсину на

лаборатоних тваринах. У експери-

менті розвивається клінічна

картина правця.

III. Постановка реакції

нейтралізації.

Культуру, вирощену на середовищі Кітта-Тароцці центрифугують. Надосадову рідину змішують з антитоксичною протиправцевою сироваткою (і з NaCl 9% для позитивного контролю). Вводять двом білим мишам внутріш-ньом'язево біля кореня хвоста.

I. Вивчення зростання мікроорганізмів на

середовищі Врублевського

↓

забарвлення колоній по методу Грама.

III. Облік реакції нейтралізації.

У першої тварини в результаті нейтралізації токсину антитоксином візуальні прояви відсутні. У другого – розвивається регідність хвоста і м'язів в місці введення токсину, тварина гине.

1 день дослідження↓

2-3 день дослідження

4-5 день дослідження

Матеріал хворого: - ексудат;

- відокремлюване гнійних

ран;

- шматочки некротизо-

ваних тканин

↓

I. Приготування мазків з досліджуваного матеріалу → забарвлення по Граму; →

виявлення капсул методом Йоне

а) посів на стерильне лакмусове молоко;

середовище Вільсона-блера; середовище

Врублевського

б) висів на середовище Кітта-Тароцці

жовткове середовище, 5% кров'яний МПА

і культивування в умовах анаеростата.

II. Постановка реакції нейтралізації з

екзотоксином:

Для постановки реакції беруть ряд пробірок, в кожну вносять по 0,9 мл вирощеної культури і 0,6 мл відомих полівалентних або моновалентних антитоксичних сироваток (C.perfringens; C.novyi A і B; C. septicum; C.bifermentans).

Суміш в кількості 0,5 мл вводять внутрішньочеревно лабораторним тваринам (білим мишам).

I. Облік і опис результатів росту мікроорганізмів на рідких і щільних живильних середовищах:

• стерильне лакмусове молоко; середовище Вільсона-Блера; середовище Врублевського;

• Середовище Кітта-Тароцці; жовткове

середовище; анаеробний кров'яний агар.

↓

приготування мазків з колоній, що виросли, забарвлення по Граму

↓

висів чистої культури на середовище Врублевського

I. Вивчення росту мікроорганізмів на середовищі Врублевського

↓

забарвлення колоній по методу Грама.

II. Облік реакції нейтралізації.

У разі нейтралізації токсину антитоксином тварина виживає (позитивний результат); у разі невідповідності сироватки і типу токсину – гине.