Добавил:

Sekretar kiopkiopkiop18@yandex.ru t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Ростовский Государственный Медицинский Университет

Предмет:

Медицина общая

Файл:

Книга_49_библиотеки_им_акад_М_И_Перельмана

.pdf

Скачиваний:

Добавлен:

10.10.2026

Размер:

9 Мб

Скачать

☆

<<< < Предыдущая 12 / 122 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 > Следующая >>>







Бактериологические исследования используются для выделения ииден-

тификации бактерий из материала, отправляемого на анализ. Для ми-

кробиологического исследования свиней отбираются следующие образ-

цы: мазки из носа, миндалин ивлагалища, мазки из раны, абсцессные

мазки, фрагменты тканей иорганов ицелые органы, пункции из поло-

стей тела, атакже образцы крови, фекалий имочи.

Тип образца каждый раз связан спроблемами, наблюдаемыми ужи-

вотного.

Очень важно, чтобы образцы для бактериологического исследова-

ния отбирались до начала химиотерапии. Кроме того, важно выбрать

подходящий участок сбора образца (место, вкотором проходит процесс

заболевания), время сбора образца, количество собранного материала,

атакже соблюдать принципы асептики для предотвращения заражения

собранного материала другими патогенами, не связанными синфекци-

ей. Необходимо обеспечить надлежащие условия хранения итранспор-

тировки отобранных образцов, доставить их вкак можно более сжатые

сроки (неболее 24 часов). Самое главное: образцы должны быть охлажде-

ны перед отправкой ипредпочтительно транспортироваться вупаковке

сохлаждающей жидкостью.

Методы культивирования микроорганизмов всочетании сизоляцией

иидентификацией микроорганизмов (обычно до вида) называются тра-

диционными (классическими) методами. Помимо определения этиоло-

гического фактора, эти исследования также позволяют проводить тесты

на чувствительность кхимиотерапии иподбирать наиболее оптималь-

ный терапевтический препарат.

Вобычных исследованиях используются различные среды, например,

для выращивания только определенных микроорганизмов или для пре-

дотвращения роста других (рис.1).

https://t.me/medicina_free



Salmonella spp 



После изоляции микроорганизмов можно определить их вид. Иден-

тификация производится на основе характерного роста на средах (т. е.

морфология колонии) или на основании микроскопического изображе-

ния или биохимических тестов, определяющих способность микроорга-

низмов расщеплять различные вещества или вырабатывать ферменты.

Каждый раз условия среды икультуры подбираются кмикроорга-

низму, который мы хотим изолировать, поэтому, как уже было ранее

подчеркнуто, необходимо предоставить как можно больше информации

от местного врача, заказавшего проведение лабораторного теста, отом,

какой патоген или патогены его интересуют. Для персонала лаборато-

рии необходимо правильно подготовленное сопроводительное письмо.

Посев

–

это длительный процесс (средняя продолжительность

–

2–7 дней

иболее), требующий обширных знаний имикробиологического опыта

от диагноста. Кмикроорганизмам, относительно легко изолируемым из

клинического материала, относятся Pasteurella multocida, Actinobacillus

pleuropneumoniae, Escherichia coli ит. д. Изоляция некоторых микроор-

ганизмов, например Brachyspira hyodysenteriae, Lawsonia intracellularis

иMycoplasma hyopneumoniae, из клинического материала особенно за-

труднена, как ипоследующий посев. Бактериологические исследования

используются при диагностике большинства бактериальных заболева-

ний свиней и являются важным этапом впроцессе подбора средства

вакцинопрофилактики, поскольку одним из условий успеха является

идентичность полевых ивакцинных антигенов, ответственных за ин-

фекцию вданном свинарнике.

Вирусологические исследования основаны на изоляции иидентифи-

кации вируса висследуемом материале. Вэтих исследованиях исполь-

https://t.me/medicina_free



зуются различные типы клеточных линий, обычно это непрерывные

линии, пассаж которых часто может быть бесконечным. Такие линии

инфицируются надлежащим образом подготовленным материалом,

иналичие вируса может быть определено морфологическими идегене-

ративными изменениями (например, цитопатическим эффектом) вре-

зультате его репликации вклетках.

Цитопатический эффект заключается визменении формы, размера

итипичной структуры клеток, внутриклеточных изменениях (измене-

ние цвета итипичной морфологии клеточных структур, внутриядерные

ивнутриплазменные вкрапления, вакуолизация ядра ицитоплазмы),

образовании клеточных комплексов. Кроме того, куриные эмбрионы

могут быть использованы для изоляции вирусов, как вслучае сизоля-

цией вируса гриппа.

Изоляция вирусов вклеточных культурах или куриных эмбрионах

традиционно считается «золотым стандартом» вирусологической диа-

гностики. Однако она имеет ограниченное применение вклинической

практике всвязи сее низкой доступностью иотносительно длительным

периодом времени от сбора материала до получения результата. Поэтому

другие прямые методы (восновном методы молекулярной биологии)

или серологические методы, которые могут косвенно указывать на кон-

такт животного свирусом, чаще всего используются вповседневной,

массовой диагностике. Описание серологических методов представлено

вследующей части.

Техника ПЦР. Методы молекулярной биологии все чаще заменяют

традиционные лабораторные методы. Методы, использующие амплифи-

кацию нуклеиновых кислот, характеризуются высокой чувствительно-

стью, специфичностью именее строгими требованиями кисследуемому

биологическому материалу. Одним из все более популярных молекуляр-

ных методов является полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Техника ПЦР заключается ввоспроизведении конкретных фрагмен-

тов нуклеиновых кислот до тех пор, пока количество генетического ма-

териала, произведенного таким образом, можно измерить или визуали-

зировать, например, ввиде полосы на геле.

Амплификация нуклеиновых кислот позволяет обнаружить генети-

ческий материал микроорганизма до того, как количество антигенов

достигнет уровня обнаружения других методов. Эта техника позволяет

получить надежный результат за короткий промежуток времени. Она

широко используется при диагностике заболеваний свиней иможет

https://t.me/medicina_free



быть использована для обнаружения генетического материала многих

патогенов свиней вклиническом материале, вчастности, вируса свиного

гриппа, РРСС, Mycoplasma hyopneumoniae, Pasteurella multocida, Borde-

tella bronchiseptica, Brachyspira hyopneumoniae, Actinobacillus pleuropneu-

moniae, Lawsonia intracellularis имногих других.

Более новая разновидность ПЦР, так называемая ПЦР вреальном вре-

мени (Real-time PCR), помимо качественных результатов (т. е. наличия

или отсутствия генетического материала исследуемого патогена), позво-

ляет определить количество материала, которое ищется висследуемом

образце. ВReal-time PCR используются флуоресцентные методы, что по-

зволяет контролировать количество продукта реакции вкаждом цикле

и,следовательно, наблюдать динамику роста дублированного фрагмента

ДНК в режиме реального времени, что еще больше сокращает время

проведения анализа. Помимо несомненных преимуществ, которые

заключаются вотличных параметрах валидации икоротком времени

ожидания результата, кнедостаткам этих исследований относятся от-

носительно высокая стоимость, необходимость наличия специализиро-

ванного оборудования влаборатории исоответствующих условий для

проведения анализа. Все это означает, что такие исследования могут

проводиться только вспециализированных учреждениях.

Таким образом, общей чертой прямых методов является демонстра-

ция патогенов или их фрагментов висследуемом материале, что является

неопровержимым доказательством их присутствия ворганизме живот-

ного. Лабораторные методы, используемые для подтверждения наличия

патогена или его генетического материала висследуемом материале,

описаны выше.

Вследующей части описываются так называемые косвенные методы,

т. е. те, которые косвенно указывают на контакт животного спатогеном.

На практике эти методы сводятся кразличным типам серологических те-

стов. Впринципе, серологические тесты ограничиваются обнаружением

специфических антител висследуемом материале, которые образовались

ворганизме животного либо врезультате контакта спатогеном вокру-

жающей среде, либо врезультате введения антигена ввиде вакцины.

https://t.me/medicina_free





Изоляция «живого» микроорганизма от исследуемых образцов не всегда

возможна по различным причинам, втом числе экономическим. Вэтом

случае можно использовать другие методы прямой диагностики, позво-

ляющие выявить определенные элементы структуры патогенов, напри-

мер, их генетический материал или характерные антигены. Ктаким

методам относятся:

1. Метод иммунофлуоресценции

–

метод, спомощью которого па-

тоген может быть обнаружен непосредственно вклиническом

материале. Как ииммуноферментный анализ, иммунофлуорес-

ценция является иммунохимическим методом. Для визуализации

антигенов в исследуемом материале используются специфиче-

ские маркированные антитела

–

так называемые фторохромы.

Интенсивность излучения, испускаемого фторохромами, про-

порциональна содержанию данного антигена висследуемом об-

разце. Методы иммунофлуоресценции позволяют параллельно

определять несколько антигенов водном образце. Преимущество

метода заключается вего относительно высокой чувствительно-

сти испецифичности, однако интерпретация результатов требует

опыта ивремени иявляется субъективной.

2. Гибридизация in situ. Вданном исследовании происходит опре-

деленная комбинация маркированного зонда, дополняющая ис-

комый фрагмент патогенной нуклеиновой кислоты. Наличие во

фрагменте определенной окраски указывает на присутствие ан-

тигенов. Этот метод используется, вчастности, при диагностике

синдрома послеотъемного мультисистемного истощения свиней.

Вэтом случае поиск вируса производится влимфатических узлах,

собранных от животных.

Иммуногистохимия используется для обнаружения спомощью

маркированных антител антигенов, присутствующих вклетках

и/или тканях. Показ места связывания антител сантигеном, на-

ходящимся вклетке или ткани, возможен только при наличии

соответствующей маркировки антитела. Антитела могут быть

маркированы ферментами (световые иэлектронные микроско-

пические исследования) или металлами (исследования на уровне

электронного микроскопа).

https://t.me/medicina_free



Иммуногистохимические исследования требуют соответствующей

подготовки клинического материала, что является длительным процес-

сом ивто же время необходимым для нормального протекания имму-

ногистохимической реакции. Неправильное обращение способствует

разрушению антигенов, присутствующих вобразце, ипредотвращению

связывания определенных антител. Это может привести кложноотри-

цательным результатам. Несмотря на очень высокую специфичность

иммуноцитохимической реакции, существует вероятность неспеци-

фических взаимодействий между тканями и используемыми антите-

лами. Поэтому каждая иммуногистохимическая реакция должна быть

дополнена правильно спланированным набором контрольных реакций

(положительный иотрицательный контроль). Этот метод используется,

вчастности, при диагностике синдрома послеотъемного мультисистем-

ного истощения свиней.

Вслучае трех вышеупомянутых методов материалом для исследова-

ния служат ткани, собранные от животных. В зависимости от заболе-

вания это могут быть лимфатические узлы (при цирковирусных инфек-

циях) или легкие (при диагностике респираторных заболеваний). На

практике, однако, эти методы обычно используются только для диагно-

стики PCV2-инфекций.



Серологические методы особенно популярны при диагностике

заболеваний животных. Они значительно дешевле прямых методов.

Однако следует помнить, что серологический тест может давать лож

https://t.me/medicina_free



ноположительные или ложноотрицательные результаты. Поэтому для

получения достоверных результатов исследования необходимо отправ-

лять на исследование материал, полученный от большого количества

животных.







https://t.me/medicina_free





При отборе крови необходимо руководствоваться принципом «ненавре-

ди себе, животному, окружающей среде» иобеспечить лабораторию ка-

чественным материалом для постановки достоверного диагноза. Работа

должна выполняться согласно правилам гуманного обращения сживот-

ными всоответствии сруководством по здоровью изащите животных.

Усвиней кровь отбирают из сосудов ушной раковины, кончика хво-

ста, глазного синуса, передней полой вены. Для этого:

свинья должна быть надежно зафиксирована за верхнюю челюсть

спомощью веревочной петли или петли из гибкого тонкого тро-

сика, что обеспечит безопасность берущего кровь ипредохранит

от травмы свинью (рис.4);

2) вся посуда иинструменты должны быть стерильными.

Врач должен владеть методами отбора крови иисключать контакт

скровью во время взятия ивыделения (приготовления) сыворотки. Нель-

зя допускать попадания крови на пол, на персонал итело свиньи сцелью

предупреждения распространения возможной инфекции. Во избежание

нежелательной контаминации крови микрофлорой кожу на месте взя-

тия крови необходимо очистить от грязи ипродезинфицировать 70-про-

центным спиртом или 5-процентной настойкой йода. Остановить выте-

кание крови прижиганием раны порошком сухого марганцовокислого

калия или наложением лигатуры, которую потом необходимо снять.

Получить качественную сыворотку крови, пригодную для исследования

иполучения достоверного результата.

Кровь отбирают встерильные пробирки, шприцы или специальные

одноразовые шприцы. Для лучшего отстаивания сывороток стенки тра-

диционно используемых пробирок ишприцов до взятия крови необхо-

димо увлажнить стерильным физраствором.

Для взятия крови из ушной вены сначала подготавливают поверх-

ность кожи уха. Для этого удаляют грязь, выстригают щетину идезин-

фицируют место прокола. Вокруг уха накладывают резиновый жгут,

который необходимо снять после завершения процедуры взятия кро-

ви. Для взятия крови иглу №16 вводят ввену, отбирают кровь вшприц

ипереливают встерильную пробирку (рис.5). Отбор крови впробирку

методом разрезания уха применяться не должен.

Для взятия крови из сосудов хвоста кончик хвоста обмывается иде-

зинфицируется 70-процентным раствором спирта или 5-процентным

https://t.me/medicina_free



раствором йода. Кончик хвоста отсекают скальпелем (рис.3)и берут не-

обходимое количество крови впробирку. После окончания процедуры

на хвост накладывают лигатуру, прижигают 5-процентным раствором

йода или сухим порошком марганцовокислого калия. Через 1–2 часа не-

обходимо удалить лигатуру с хвоста для предупреждения возможного

некроза тканей.

 



 



 



 



Образцы крови могут быть получены из глазного синуса свиней

(рис.7). Взрослых свиней надежно фиксируют стоя, апоросят- сосунов

удерживают одной рукой вгоризонтальном положении. Кончик иглы,

соединенной со шприцом, вводят непосредственно вткани мигательной

перепонки. При введении иглу необходимо направлять вниз снеболь-

шим нажимом, наклоняя внутрь. Иглу продвигают вперед на 2–4см,

пока она не попадет ввенозный синус, который примыкает к костной

https://t.me/medicina_free



глазной впадине. Срез иглы должен быть направлен всторону кости.

При прокалывании тканей синуса кровь начнет вытекать из иглы. При

необходимости повторное взятие крови рекомендуется проводить через

10–12 дней.



-





-





-



Отбор крови возможен ииз передней полой вены. Убольших свиней

кровь берут вположении стоя. Для этого иглу длиной 6см направляют

справа или слева от килевидного хряща грудины на линии, проведенной

от месторасположения хряща коснованию уха. Иглу направляют внутрь,

вверх иобратно.

https://t.me/medicina_free

<<< < Предыдущая 12 / 122 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 > Следующая >>>

Соседние файлы в папке Библиотека им академика М.И. Перельмана

#
12.10.20263 Мб0Книга_4823_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.djvu
#
12.10.20263 Мб0Книга_4825_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf
#
12.10.20263 Мб0Книга_4827_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf
#
12.10.20263 Мб0Книга_4828_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf
#
12.10.20263 Мб0Книга_4830_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf
#
10.10.20269 Мб0Книга_49_библиотеки_им_акад_М_И_Перельмана.pdf
#
29.08.2026101 Мб0Книга_498_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf
#
10.10.20269 Мб0Книга_50_библиотеки_им_акад_М_И_Перельмана.pdf
#
29.08.202698 Мб0Книга_500_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf
#
29.08.202697 Мб0Книга_501_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf
#
29.08.202694 Мб0Книга_503_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана.pdf