Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Ординатура / Хирургия / Библиотека им академика М.И. Перельмана / Книга_49_библиотеки_им_акад_М_И_Перельмана

.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
10.10.2026
Размер:
9 Мб
Скачать
☆


Африканская чума свиней (Pestis Africana suum, болезнь Монтгомери,
восточно- африканская лихорадка) –
особо опасная высококонтагиозная
болезнь свиней, характеризующаяся лихорадкой, обширными геморра-
гиями ицианозом кожи, тяжелыми дистрофическими инекротически-
ми поражениями клеток ретикулоэндотелиальной системы, внутренних
органов ивысокой летальностью [4; 9].
Возбудитель – ДНК-содержащий кубической формы вирус семейства
Asfarviridae размером 130–225 нм. Вирус культивируют спроявлением
цитопатического действия вкультуре клеток костного мозга, лейкоци-
тов, вперевиваемых культурах. Ворганизме вирус размножается всисте-
ме мононуклеарных фагоцитов, индуцирует синтез антител. Установле-
ны сложная антигенная структура иналичие комплементфиксирующих,
преципитирующих игемадсорбирующих антигенов.
Для серологического исследования направляют кровь или сыворотку
впробирках, без признаков гемолиза ибактериальной контаминации.
Допускается однократное замораживание сыворотки крови. Также мож-
но присылать печень, подчелюстные имезентериальные лимфатические
узлы, селезенку, трубчатую кость.
 

https://t.me/medicina_free

Используют тест-систему для выявления антител при африканской
чуме свиней твердофазным иммуноферментным анализом.
Из печени, селезенки, лимфатических узлов, трубчатой кости (кост-
ный мозг) готовится 10-процентная суспензия на физиологическом рас-
творе. Делается навеска из исследуемого материала 10г, измельчается
вступке, добавляется 100 мл 0,9-процентного NaCl (физиологического
раствора) и раствор антибиотиков (пенициллин + стрептомицин) для
подавления патогенных бактерий. Суспензия откручивается на центри-
фуге при 2000 об/мин либо настаивается при комнатной температуре
втечение 1 часа.
1.
Влунки планшетов вносим по 100 мкл натрия дезинтрифосфат
содержащего специфические иммуноглобулины. Планшет закры-
ваем липкой лентой иинкубируем при температуре 4°C втечение
ночи.
2. Планшет 2 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
3.
Вкаждую лунку вносим по 300 мкл рабочего раствора для забивки
активных сайтов иразведение исследуемых проб (концентрат мо-
лочного белка). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем
при температуре +37°C втечение 30 мин.
4.
Планшет 1 раз промываем рабочим раствором ЗФР на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
5.
Испытуемые сыворотки разводим в50 раз буфером для разведения
проб (БР). Для приготовления 500 мкл пробы к490 мкл БР добав-
ляем 10 мкл сыворотки.
6. Влунки А1–В1 вносим 100 мкл K
+
.
Влунки С1–D1 вносим 100 мкл K
–
.
Востальные вносим по 100 мкл испытуемых проб (по2 лунки на каж-
дый образец). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре +37°C.
7. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
https://t.me/medicina_free

выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
8. Вкаждую лунку вносим по 100 мкл рабочего раствора специфи-
ческого иммунопероксидазного конъюгата. Планшет закрываем
липкой лентой иинкубируем 1 час при температуре +37°C.
9. Планшет 6 раз промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
10.
Вкаждую лунку вносим по 100 мкл хромоген- субстратного раство-
ра. Планшет инкубируют 20–30 мин. при комнатной температуре.
11.
Измеряем величину оптической плотности содержимого лунок
планшета на фотометре Sunrise Tecan вертикального сканирова-
ния при длине волны 405 нм.

1. Какой материал предназначен для исследования АЧС?
2.
Для чего добавляют раствор антибиотиков при приготовлении
суспензии из органов?
3. При какой температуре инкубируют планшет?
https://t.me/medicina_free



Вирусный гастроэнтерит (трансмиссивный) свиней (Gastroenteritis
infectiosa suum, ВГЭС, ТГС, болезнь Дойла иХатчингса) – высококонтагиоз-
ная болезнь свиней, характеризующаяся катарально- геморрагическим
гастроэнтеритом ипроявляющаяся рвотой, диареей, дегидратацией ор-
ганизма ивысокой летальностью поросят впервые 2 недели жизни [1].
 

Возбудитель –
РНК-содержащий вирус семейства Coronaviridae. Раз-
мер вирионов
–
70–120 нм, они покрыты гликопротеидным слоем була-
вовидных отростков, напоминающих солнечную корону. Вантигенном
отношении вирус однороден исерологически идентичен независимо от
того, где он выделен. Возбудитель индуцирует образование агглютини-
рующих, вируснейтрализующих, преципитирующих антител.
Для анализа используют фекалии, взятые от животных впервые
6–12 часов после проявления клинических признаков заболевания. От
павших животных можно использовать содержимое тонкого итолстого
отделов кишечника. До исследования материал можно хранить вморо-
зильной камере.
Применяют набор для выявления антигена вируса трансмиссивного
гастроэнтерита (ТГС) иротавируса свиней (РВС) методом иммунофер-
ментного анализа.
https://t.me/medicina_free

Пробы разводим вобъеме физиологического раствора в соотноше-
нии 1 : 10 ицентрифугируем 10 мин. при 2000–3000 об/мин. Надосадоч-
ную жидкость осторожно отливаем встерильную пробирку иисследуем.
1. Влунки планшетов вносим по 100 мкл раствора специфического
иммуноглобулина G кТГС иРВС. Один планшет используется для
определения ТГС, другой
–
для РВС.
2.
Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 18 часов при
температуре 4°C.
3. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
Если количество образцов для исследования не позволяет исполь-
зовать планшет полостью, то неиспользованные стрипы, не промывая,
помещают в полиэтиленовый пакет ихранят при температуре
–20°C.
4. Влунки А1–В1 вносим по 100 мкл специфического антигена ТГС.
Влунки С1–D1 вносим по 100 мкл специфического антигена РВС.
Таким образом, втесте на выявление ТГС вкачестве отрицательного
контроля используется гетерологичный антиген РВС, инаоборот.
Востальные вносим по 100 мкл испытуемых проб (по2 лунки на каж-
дый образец). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре 37°C.
5. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
6. Вкаждую лунку вносим по 100 мкл рабочего раствора конъюгата.
Влунки, сенсибилизированные IgG квирусу ТГС, вносим конъю-
гат ТГС. Планшеты закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре 37°C.
7. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
8.
Вкаждую лунку вносим по 100 мкл хромоген- субстратного рас-
твора. Планшет инкубируем 20 мин. втемноте при комнатной
температуре.
https://t.me/medicina_free

9. Останавливают реакцию добавлением вкаждую лунку по 50 мкл
стоп-раствора.
10.
Измеряем величину оптической плотности содержимого лунок
планшета на фотометре Sunrise Tecan вертикального сканирова-
ния при длине волны 450 нм.

1. Какой материал предназначен для исследования ТГС?
2. Вкаком соотношении разводят фекалии?
3. При какой температуре инкубируют планшет после добавления
хромоген- субстратного раствора?
https://t.me/medicina_free


Ротавирусная диарея поросят (Rotavirosis diarrhea suum, РВИС, РВС) –
высококонтагиозная болезнь, характеризующаяся симптомами острого
энтерита, диареей, дегидратацией организма [5].
 

Возбудитель – РНК-содержащий безоболочный вирус из семейства
Reoviridae, рода Rotavirus. Различают 4 серогруппы ротавируса свиней (А,
В, С, Е). Упоросят- сосунов основным возбудителем РВИС является ви-
рус серогруппы А. Свиной ротавирус обнаруживает антигенное родство
вРСК иРДП сротавирусами человека, крупного рогатого скота, мышей.
Для анализа используют фекалии, взятые от животных впервые 6–12
часов после проявления клинических признаков заболевания. От павших
животных можно использовать содержимое тонкого итолстого отделов ки-
шечника. До исследования материал можно хранить вморозильной камере.
Применяют набор для выявления антигена вируса трансмиссивного
гастроэнтерита (ТГС) иротавируса свиней (РВС) методом иммунофер-
ментного анализа.
Пробы разводим вобъеме физиологического раствора в соотноше-
нии 1 : 10 ицентрифугируем 10 мин. при 2000–3000 об/мин. Надосадоч-
ную жидкость осторожно отливаем встерильную пробирку иисследуем.
1. Влунки планшетов вносим по 100 мкл раствора специфического
иммуноглобулина G кТГС иРВС. Один планшет используется для
определения ТГС, другой
–
для РВС.
2.
Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 18 часов при
температуре +4°C.
3. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
https://t.me/medicina_free

кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
Если количество образцов для исследования не позволяет исполь-
зовать планшет полостью, то неиспользованные стрипы, не промывая,
помещают в полиэтиленовый пакет ихранят при температуре
–20°C.
4. Влунки А1–В1 вносим по 100 мкл специфического антигена ТГС.
Влунки С1–D1 вносим по 100 мкл специфического антигена РВС.
Таким образом, втесте на выявление ТГС вкачестве отрицательного
контроля используется гетерологичный антиген РВС, инаоборот.
Востальные лунки вносим по 100 мкл испытуемых проб (по2 лунки
на каждый образец). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем
1 час при температуре +37°C.
5. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
6. Вкаждую лунку вносим по 100 мкл рабочего раствора конъюгата.
Влунки, сенсибилизированные IgG квирусу РВС, вносим конъю-
гат РВС. Планшеты закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре +37°C.
7. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
8.
Вкаждую лунку вносим по 100 мкл хромоген- субстратного рас-
твора. Планшет инкубируем 20 мин. втемноте при комнатной
температуре.
9. Останавливают реакцию добавлением вкаждую лунку по 50 мкл
стоп-раствора.
10.
Измеряем величину оптической плотности содержимого лунок
планшета на фотометре Sunrise Tecan вертикального сканирова-
ния при длине волны 450 нм.

1. Какой материал предназначен для исследования РВС?
2. Допускается ли заморозка материала для исследования?
3. При какой температуре хранятся неиспользованные стрипы?
https://t.me/medicina_free


Болезнь Ауески (лат. Morbus Aujeszky, псевдобешенство, инфекционный
бульбарный паралич, инфекционный менингоэнцефалит) – остро протекаю-
щая болезнь многих видов домашних идиких животных, проявляюща-
яся расстройством ЦНС, сильным зудом ирасчесами (увсех животных,
кроме свиней ипушных зверей). Умолодняка сопровождается судоро-
гами, параличами, гибелью животных [2].
 

Возбудитель – ДНК-содержащий вирус семейства Herpesviridae.
Вирус относится кпантропным, однако у него выражена склонность
кнейротропизму ипневмотропизму. Культивируют его на тканях кури-
ных эмбрионов или на культурах куриных фибробластов, клеток почек
крольчат, свиней. Вклетках больных животных образует специфические
тельца- включения. Полученные от животных разных видов ииз разных
стран вирусы по своим биологическим иантигенным свой ствам не от-
личаются друг от друга.
Для выделения вируса болезни Ауески используют головной мозг,
кусочки легких, печени, селезенки, лимфоузлов, миндалин, полученные
при вскрытии трупов.
Биологическая проба проводится на кролике массой 2–2,5 кг. Из
отделов головного мозга (мозжечка, коры полушарий, продолговато-
го) и легких готовим 10-процентную суспензию на физиологическом
растворе. Делаем навеску из исследуемого материала 10г, измельчаем
вступке, добавляем 100 мл 0,9-процентного физиологического раствора
ираствор антибиотиков (пенициллин + стрептомицин) для подавления
https://t.me/medicina_free

патогенных бактерий. Суспензию откручиваем на центрифуге при 2000
об/мин либо настаиваем при комнатной температуре втечение 1 часа.
Заражение производим взаразном виварии. На месте введения суспен-
зии выстригаем шерсть, обрабатываем 70-процентным спиртом ивво-
дим суспензию внутримышечно вдозе 1 мл (рис.19, 20).

Зараженного кролика помещаем вспециальную клетку. Ее подписы-
ваем маркером, где указываем наименование заболевания, номер экс-
пертизы, дату, вид животного, подвергнутого вскрытию, хозяйство или
наименование района. Максимальный срок наблюдения за зараженным
животным составляет от 10 до 12 дней, ежедневно оно проверяется. Био-
пробу считают положительной, если кролик погибает склиническими
признаками болезни: нервная форма, зуд на месте введения, расчесы
через 2–10 дней (рис.20).

https://t.me/medicina_free