Добавил:
Sekretar
kiopkiopkiop18@yandex.ru
t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Ординатура / Хирургия / Библиотека им академика М.И. Перельмана / Книга_49_библиотеки_им_акад_М_И_Перельмана
.pdf
Африканская чума свиней (Pestis Africana suum, болезнь Монтгомери,
восточно- африканская лихорадка) –
особо опасная высококонтагиозная
болезнь свиней, характеризующаяся лихорадкой, обширными геморра-
гиями ицианозом кожи, тяжелыми дистрофическими инекротически-
ми поражениями клеток ретикулоэндотелиальной системы, внутренних
органов ивысокой летальностью [4; 9].
Возбудитель – ДНК-содержащий кубической формы вирус семейства
Asfarviridae размером 130–225 нм. Вирус культивируют спроявлением
цитопатического действия вкультуре клеток костного мозга, лейкоци-
тов, вперевиваемых культурах. Ворганизме вирус размножается всисте-
ме мононуклеарных фагоцитов, индуцирует синтез антител. Установле-
ны сложная антигенная структура иналичие комплементфиксирующих,
преципитирующих игемадсорбирующих антигенов.
Для серологического исследования направляют кровь или сыворотку
впробирках, без признаков гемолиза ибактериальной контаминации.
Допускается однократное замораживание сыворотки крови. Также мож-
но присылать печень, подчелюстные имезентериальные лимфатические
узлы, селезенку, трубчатую кость.
https://t.me/medicina_free

Используют тест-систему для выявления антител при африканской
чуме свиней твердофазным иммуноферментным анализом.
Из печени, селезенки, лимфатических узлов, трубчатой кости (кост-
ный мозг) готовится 10-процентная суспензия на физиологическом рас-
творе. Делается навеска из исследуемого материала 10г, измельчается
вступке, добавляется 100 мл 0,9-процентного NaCl (физиологического
раствора) и раствор антибиотиков (пенициллин + стрептомицин) для
подавления патогенных бактерий. Суспензия откручивается на центри-
фуге при 2000 об/мин либо настаивается при комнатной температуре
втечение 1 часа.
1.
Влунки планшетов вносим по 100 мкл натрия дезинтрифосфат
содержащего специфические иммуноглобулины. Планшет закры-
ваем липкой лентой иинкубируем при температуре 4°C втечение
ночи.
2. Планшет 2 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
3.
Вкаждую лунку вносим по 300 мкл рабочего раствора для забивки
активных сайтов иразведение исследуемых проб (концентрат мо-
лочного белка). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем
при температуре +37°C втечение 30 мин.
4.
Планшет 1 раз промываем рабочим раствором ЗФР на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
5.
Испытуемые сыворотки разводим в50 раз буфером для разведения
проб (БР). Для приготовления 500 мкл пробы к490 мкл БР добав-
ляем 10 мкл сыворотки.
6. Влунки А1–В1 вносим 100 мкл K
+
.
Влунки С1–D1 вносим 100 мкл K
–
.
Востальные вносим по 100 мкл испытуемых проб (по2 лунки на каж-
дый образец). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре +37°C.
7. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
https://t.me/medicina_free

выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
8. Вкаждую лунку вносим по 100 мкл рабочего раствора специфи-
ческого иммунопероксидазного конъюгата. Планшет закрываем
липкой лентой иинкубируем 1 час при температуре +37°C.
9. Планшет 6 раз промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку), каждый раз
выдерживая лунки сбуфером не менее 30–60 с. Затем жидкость
из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого план-
шета по фильтровальной бумаге.
10.
Вкаждую лунку вносим по 100 мкл хромоген- субстратного раство-
ра. Планшет инкубируют 20–30 мин. при комнатной температуре.
11.
Измеряем величину оптической плотности содержимого лунок
планшета на фотометре Sunrise Tecan вертикального сканирова-
ния при длине волны 405 нм.
1. Какой материал предназначен для исследования АЧС?
2.
Для чего добавляют раствор антибиотиков при приготовлении
суспензии из органов?
3. При какой температуре инкубируют планшет?
https://t.me/medicina_free

Вирусный гастроэнтерит (трансмиссивный) свиней (Gastroenteritis
infectiosa suum, ВГЭС, ТГС, болезнь Дойла иХатчингса) – высококонтагиоз-
ная болезнь свиней, характеризующаяся катарально- геморрагическим
гастроэнтеритом ипроявляющаяся рвотой, диареей, дегидратацией ор-
ганизма ивысокой летальностью поросят впервые 2 недели жизни [1].
Возбудитель –
РНК-содержащий вирус семейства Coronaviridae. Раз-
мер вирионов
–
70–120 нм, они покрыты гликопротеидным слоем була-
вовидных отростков, напоминающих солнечную корону. Вантигенном
отношении вирус однороден исерологически идентичен независимо от
того, где он выделен. Возбудитель индуцирует образование агглютини-
рующих, вируснейтрализующих, преципитирующих антител.
Для анализа используют фекалии, взятые от животных впервые
6–12 часов после проявления клинических признаков заболевания. От
павших животных можно использовать содержимое тонкого итолстого
отделов кишечника. До исследования материал можно хранить вморо-
зильной камере.
Применяют набор для выявления антигена вируса трансмиссивного
гастроэнтерита (ТГС) иротавируса свиней (РВС) методом иммунофер-
ментного анализа.
https://t.me/medicina_free

Пробы разводим вобъеме физиологического раствора в соотноше-
нии 1 : 10 ицентрифугируем 10 мин. при 2000–3000 об/мин. Надосадоч-
ную жидкость осторожно отливаем встерильную пробирку иисследуем.
1. Влунки планшетов вносим по 100 мкл раствора специфического
иммуноглобулина G кТГС иРВС. Один планшет используется для
определения ТГС, другой
–
для РВС.
2.
Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 18 часов при
температуре 4°C.
3. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
Если количество образцов для исследования не позволяет исполь-
зовать планшет полостью, то неиспользованные стрипы, не промывая,
помещают в полиэтиленовый пакет ихранят при температуре
–20°C.
4. Влунки А1–В1 вносим по 100 мкл специфического антигена ТГС.
Влунки С1–D1 вносим по 100 мкл специфического антигена РВС.
Таким образом, втесте на выявление ТГС вкачестве отрицательного
контроля используется гетерологичный антиген РВС, инаоборот.
Востальные вносим по 100 мкл испытуемых проб (по2 лунки на каж-
дый образец). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре 37°C.
5. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
6. Вкаждую лунку вносим по 100 мкл рабочего раствора конъюгата.
Влунки, сенсибилизированные IgG квирусу ТГС, вносим конъю-
гат ТГС. Планшеты закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре 37°C.
7. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
8.
Вкаждую лунку вносим по 100 мкл хромоген- субстратного рас-
твора. Планшет инкубируем 20 мин. втемноте при комнатной
температуре.
https://t.me/medicina_free

9. Останавливают реакцию добавлением вкаждую лунку по 50 мкл
стоп-раствора.
10.
Измеряем величину оптической плотности содержимого лунок
планшета на фотометре Sunrise Tecan вертикального сканирова-
ния при длине волны 450 нм.
1. Какой материал предназначен для исследования ТГС?
2. Вкаком соотношении разводят фекалии?
3. При какой температуре инкубируют планшет после добавления
хромоген- субстратного раствора?
https://t.me/medicina_free

Ротавирусная диарея поросят (Rotavirosis diarrhea suum, РВИС, РВС) –
высококонтагиозная болезнь, характеризующаяся симптомами острого
энтерита, диареей, дегидратацией организма [5].
Возбудитель – РНК-содержащий безоболочный вирус из семейства
Reoviridae, рода Rotavirus. Различают 4 серогруппы ротавируса свиней (А,
В, С, Е). Упоросят- сосунов основным возбудителем РВИС является ви-
рус серогруппы А. Свиной ротавирус обнаруживает антигенное родство
вРСК иРДП сротавирусами человека, крупного рогатого скота, мышей.
Для анализа используют фекалии, взятые от животных впервые 6–12
часов после проявления клинических признаков заболевания. От павших
животных можно использовать содержимое тонкого итолстого отделов ки-
шечника. До исследования материал можно хранить вморозильной камере.
Применяют набор для выявления антигена вируса трансмиссивного
гастроэнтерита (ТГС) иротавируса свиней (РВС) методом иммунофер-
ментного анализа.
Пробы разводим вобъеме физиологического раствора в соотноше-
нии 1 : 10 ицентрифугируем 10 мин. при 2000–3000 об/мин. Надосадоч-
ную жидкость осторожно отливаем встерильную пробирку иисследуем.
1. Влунки планшетов вносим по 100 мкл раствора специфического
иммуноглобулина G кТГС иРВС. Один планшет используется для
определения ТГС, другой
–
для РВС.
2.
Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем 18 часов при
температуре +4°C.
3. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
https://t.me/medicina_free

кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
Если количество образцов для исследования не позволяет исполь-
зовать планшет полостью, то неиспользованные стрипы, не промывая,
помещают в полиэтиленовый пакет ихранят при температуре
–20°C.
4. Влунки А1–В1 вносим по 100 мкл специфического антигена ТГС.
Влунки С1–D1 вносим по 100 мкл специфического антигена РВС.
Таким образом, втесте на выявление ТГС вкачестве отрицательного
контроля используется гетерологичный антиген РВС, инаоборот.
Востальные лунки вносим по 100 мкл испытуемых проб (по2 лунки
на каждый образец). Планшет закрываем липкой лентой иинкубируем
1 час при температуре +37°C.
5. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
6. Вкаждую лунку вносим по 100 мкл рабочего раствора конъюгата.
Влунки, сенсибилизированные IgG квирусу РВС, вносим конъю-
гат РВС. Планшеты закрываем липкой лентой иинкубируем 1 час
при температуре +37°C.
7. Планшет 4 раза промываем рабочим раствором ФСБТ на автома-
тическом промывочном устройстве (300 мкл/лунку). Затем жид-
кость из лунок полностью удаляем постукиванием перевернутого
планшета по фильтровальной бумаге.
8.
Вкаждую лунку вносим по 100 мкл хромоген- субстратного рас-
твора. Планшет инкубируем 20 мин. втемноте при комнатной
температуре.
9. Останавливают реакцию добавлением вкаждую лунку по 50 мкл
стоп-раствора.
10.
Измеряем величину оптической плотности содержимого лунок
планшета на фотометре Sunrise Tecan вертикального сканирова-
ния при длине волны 450 нм.
1. Какой материал предназначен для исследования РВС?
2. Допускается ли заморозка материала для исследования?
3. При какой температуре хранятся неиспользованные стрипы?
https://t.me/medicina_free

Болезнь Ауески (лат. Morbus Aujeszky, псевдобешенство, инфекционный
бульбарный паралич, инфекционный менингоэнцефалит) – остро протекаю-
щая болезнь многих видов домашних идиких животных, проявляюща-
яся расстройством ЦНС, сильным зудом ирасчесами (увсех животных,
кроме свиней ипушных зверей). Умолодняка сопровождается судоро-
гами, параличами, гибелью животных [2].
Возбудитель – ДНК-содержащий вирус семейства Herpesviridae.
Вирус относится кпантропным, однако у него выражена склонность
кнейротропизму ипневмотропизму. Культивируют его на тканях кури-
ных эмбрионов или на культурах куриных фибробластов, клеток почек
крольчат, свиней. Вклетках больных животных образует специфические
тельца- включения. Полученные от животных разных видов ииз разных
стран вирусы по своим биологическим иантигенным свой ствам не от-
личаются друг от друга.
Для выделения вируса болезни Ауески используют головной мозг,
кусочки легких, печени, селезенки, лимфоузлов, миндалин, полученные
при вскрытии трупов.
Биологическая проба проводится на кролике массой 2–2,5 кг. Из
отделов головного мозга (мозжечка, коры полушарий, продолговато-
го) и легких готовим 10-процентную суспензию на физиологическом
растворе. Делаем навеску из исследуемого материала 10г, измельчаем
вступке, добавляем 100 мл 0,9-процентного физиологического раствора
ираствор антибиотиков (пенициллин + стрептомицин) для подавления
https://t.me/medicina_free

патогенных бактерий. Суспензию откручиваем на центрифуге при 2000
об/мин либо настаиваем при комнатной температуре втечение 1 часа.
Заражение производим взаразном виварии. На месте введения суспен-
зии выстригаем шерсть, обрабатываем 70-процентным спиртом ивво-
дим суспензию внутримышечно вдозе 1 мл (рис.19, 20).
Зараженного кролика помещаем вспециальную клетку. Ее подписы-
ваем маркером, где указываем наименование заболевания, номер экс-
пертизы, дату, вид животного, подвергнутого вскрытию, хозяйство или
наименование района. Максимальный срок наблюдения за зараженным
животным составляет от 10 до 12 дней, ежедневно оно проверяется. Био-
пробу считают положительной, если кролик погибает склиническими
признаками болезни: нервная форма, зуд на месте введения, расчесы
через 2–10 дней (рис.20).
https://t.me/medicina_free
Соседние файлы в папке Библиотека им академика М.И. Перельмана
