Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Физиология системы крови. Учебное пособие
.pdf
31
Контрольные вопросы для самостоятельного изучения
1. Особенности строения эритроцитов.
2. Физиологические функции эритроцитов.
3. Устройство счетной камеры Горяева.
4. Методика подсчета эритроцитов.
5. Нормативная концентрация эритроцитов у мужчин и
женщин, причины понижения и повышения.
6. Автоматизированные методы подсчета эритроцитов.
7. Изменения количества эритроцитов у детей.
Физиологическая желтуха.
Лабораторная работа № 6.2
Подсчет количества лейкоцитов в счетной камере Горяева
Лейкоциты или белые кровяные шарики обладают полной
ядерной структурой. Количество лейкоцитов в периферической
крови взрослого человека колеблется в пределах 4,0–9,0х109 /л, или
4000–9000 в 1 мкл. Увеличение количества лейкоцитов в крови
называется лейкоцитозом, а уменьшение – лейкопенией. В клинике
имеет значение не только общее количество лейкоцитов, но и
процентное соотношение всех видов лейкоцитов, получившее
название лейкоцитарной формулы, или лейкограммы.
Врачи следят за количеством лейкоцитов, поскольку любое его
изменение зачастую является признаком болезни или инфекции.
Лейкоциты - это пехота, защищающая организм от инфекции. Эти
клетки защищают организм путем фагоцитоза (поедания) бактерий
или же посредством иммунных процессов - выработки особых
веществ, которые разрушают возбудителей инфекций. Лейкоциты
действуют в основном вне кровеносной системы, но в участки
инфекции они попадают именно с кровью.
Осуществление защитной функции различными видами
лейкоцитов происходит по-разному.
Нейтрофилы являются самой многочисленной группой.
Основная их функция – фагоцитоз бактерий и продуктов распада
тканей с последующим перевариванием их при помощи лизосомных
ферментов (протеазы, пептидазы, оксидазы, дезоксирибонуклеазы).
Эозинофилы также обладают способностью к фагоцитозу, но
это не имеет серьезного значения из-за их небольшого количества в
крови. Основной функцией эозинофилов является обезвреживание и
32
разрушение токсинов белкового происхождения, чужеродных
белков, а также комплекса антиген-антитело. Эозинофилы
продуцируют фермент гистаминазу, который разрушает гистамин,
освобождающийся из поврежденных базофилов и тучных клеток
при различных аллергических состояниях, глистных инвазиях,
аутоиммунных заболеваниях. Эозинофилы осуществляют
противоглистный иммунитет, оказывая на личинку цитотоксическое
действие. Эозинофилы продуцируют плазминоген, который
является предшественником плазмина – главного фактора
фибринолитической системы крови.
Базофилы продуцируют и содержат биологически активные
вещества (гепарин, гистамин и др.), чем и обусловлена их функция в
организме. Гепарин препятствует свертыванию крови в очаге
воспаления. Гистамин расширяет капилляры, что способствует
рассасыванию и заживлению. В базофилах содержатся также
гиалуроновая кислота, влияющая на проницаемость сосудистой
стенки; фактор активации тромбоцитов (ФАТ); тромбоксаны,
способствующие агрегации тромбоцитов; лейкотриены и
простагландины. При аллергических реакциях (крапивница,
бронхиальная астма, лекарственная болезнь) под влиянием
комплекса антиген-антитело происходит дегрануляция базофилов и
выход в кровь биологически активных веществ, в том числе
гистамина, что определяет клиническую картину заболеваний.
Моноциты обладают выраженной фагоцитарной функцией.
Это самые крупные клетки периферической крови и их называют
макрофагами. Моноциты находятся в крови 2-3 дня, затем они
выходят в окружающие ткани, где, достигнув зрелости,
превращаются в тканевые макрофаги (гистиоциты). Моноциты
способны фагоцитировать микробы в кислой среде, когда
нейтрофилы не активны. Фагоцитируя микробы, погибшие
лейкоциты, поврежденные клетки тканей, моноциты очищают место
воспаления и подготавливают его для регенерации. Моноциты
синтезируют отдельные компоненты системы комплемента.
Активированные моноциты и тканевые макрофаги продуцируют
цитотоксины, интерлейкин (ИЛ-1), фактор некроза опухолей (ФНО),
интерферон, тем самым осуществляя противоопухолевый,
противовирусный, противомикробный и противопаразитарный
иммунитет; участвуют в регуляции гемопоэза. Макрофаги
принимают участие в формировании специфического иммунного
33
ответа организма. Они распознают антиген и переводят его в так
называемую иммуногенную форму (презентация антигена).
Моноциты продуцируют как факторы, усиливающие свертывание
крови (тромбоксаны, тромбопластины), так и факторы,
стимулирующие фибринолиз (активаторы плазминогена).
Лимфоциты являются центральным звеном иммунной системы
организма. Они осуществляют формирование специфического
иммунитета, синтез защитных антител, лизис чужеродных клеток,
реакцию отторжения трансплантата, обеспечивают иммунную
память. Лимфоциты, созревание которых происходит в вилочковой
железе, называются Т-лимфоцитами (тимусзависимые). Влимфоциты (бурсозависимые) проходят дифференцировку у
человека в лимфоидной ткани кишечника, небных и глоточных
миндалин.
О-лимфоциты (нулевые) не проходят дифференцировку и
являются как бы резервом Т- и В-лимфоцитов.
Удаление любых чужеродных в генетическом отношении тел и
частиц осуществляется гуморальными и клеточными механизмами.
Гуморальные механизмы представлены такими факторами как
фибронектин, лизоцим, интерфероны, системы комплемента и
другими. Лизоцим разрушает мембраны бактерий, способствуя их
лизису. Интерфероны_ это белки, продуцируемые нейтрофилами и
моноцитами. Они блокируют размножение вирусов. Комплемент –
это система или комплекс, состоящий из примерно 20 белков,
которые относятся к глобулинам плазмы. Известны четыре
основные функции комплемента:
1. Цитолиз – уничтожение чужеродных антигенов клеточного
типа.
2.Опсонизация – подготовка объектов фагоцитоза к
последующему фагоцитозу.
3. Участие в развитии реакции воспаления
4. Участие в модификации иммунных комплексов и их
выведении из организма.
В настоящее время комплементу уделяется большое внимание
и как показателю неспецифического иммунитета.
Цель работы: овладеть техникой подсчета лейкоцитов с
помощью камеры Горяева
В норме количество лейкоцитов в 1 л крови колеблется в
34
пределах 4х109/л – 9х109/л
Оборудование: микроскоп, камера Горяева, покровные стекла,
смеситель для подсчета лейкоцитов, стерильный скарификатор,
штатив, пробирки, палочка, пипетка, стакан с дистиллированной
водой, уксусная кислота 3-5%, подкрашенная метиленовым синим,
спирт, вата.
ХОД РАБОТЫ
1. В пробирку внесите 0,4 мл 3% раствора уксусной кислоты,
подкрашенной метиленовым синим (уксусная кислота лизирует
эритроциты, метиленовый синий окрашивает ядра лейкоцитов).
2. Взятие крови осуществляют с помощью смесителя для
лейкоцитов. В смеситель набрать 0,02 мл капиллярной крови.
3. Рассмотрите камеру Горяева под микроскопом и накройте ее
покровным стеклом также, как и при подсчете эритроцитов.
4. Перед заполнением камеры пробирку с разведенной кровью
тщательно встряхните.
5. Камеру заполняйте также как при подсчете эритроцитов.
6. Содержание в крови лейкоцитов в 600 раз меньшее, чем
эритроцитов. Поэтому лейкоциты подсчитывают в 100 больших
квадратах. Эти квадраты сгруппированы по четыре. Подсчет
начинайте с левой верхней группировки, а затем продвигайте камеру
последовательно от группировки к группировке. При подсчете
лейкоцитов в каждом большом квадрате придерживайтесь правил,
описанных для эритроцитов. Подсчитав число лейкоцитов во всех
100 квадратах, запишите результат, а затем произведите подсчет.
Рис. 3 – Сетка камеры Горяева
35
СПОСОБ 1.
Рассчитать концентрацию лейкоцитов по приведенной
формуле:
А х 400 х 20
Х = -------------------------
1600
где, Х – количество лейкоцитов в 1 мкл крови;
А – число лейкоцитов, сосчитанных в определенном
количестве больших квадратов;
20 – степень разведения крови,
1600 – кол-во малых квадратов, в которых считались
лейкоциты;
1/400 – объем малых квадратов.
СПОСОБ 2. Для определения количества лейкоцитов в 1 мкл
крови, полученное число умножить на 50 (можно посчитать число
лейкоцитов в 25 больших квадратах, а затем умножить на 200).
При определении количества лейкоцитов камерным методом
неизбежна еще большая ошибка, чем при подсчете эритроцитов; в
среднем она составляет +7%.
Более точным (ошибка не превышает обычно 2-3%) и
совершенным является подсчет лейкоцитов с помощью электронных
аппаратов.
Оформление протокола.
1. Произведите подсчет лейкоцитов в 1 мкл крови с помощью
счетной камеры Горяева.
2. Занесите результаты собственных исследований в таблицу 12.
Таблица 12 - Результаты собственных исследований
Клетки крови
Пол
Количество ед/л
Полученные значения
Норма
Лейкоциты
М
4,0 – 9,0 х10 9/л крови
Ж
4. Сделайте заключение о соответствии полученных результатов
нормативным.
36
Лабораторная работа № 6.3 Исследование пищеварительного
лейкоцитоза
Цель работы - овладеть техникой подсчета лейкоцитов и
выяснить влияние еды с аппетитом на число лейкоцитов.
Оборудование:
Стерильные перчатки, скарификаторы, спирт, вата, камера
Горяева. Объект исследования - человек.
Ход работы:
1.Подготовить для исследований 2 группы студентов (по 5
человек): в состоянии натощак и плотно позавтракавших.
2.Произвести забор капиллярной крови и посчитать число
лейкоцитов в камере Горяева в каждой группе студентов.
Контрольные вопросы для самостоятельного изучения
1. Строение и функции лейкоцитов.
2. Основные виды лейкоцитов.
3. Понятие о лейкоцитарной формуле.
4. Агранулоциты и их функции.
5. Гранулоциты и их функции.
6. Лейкоцитозы и лейкопении.
7. Изменения количества лейкоцитов и особенности
лейкоцитарной формулы у детей.
8. Развитие Т- и В- звеньев специфического иммунитета.
Клиническая интерпретация анализа:
Лейкоцитоз: а) перераспределительный - может возникнуть
при физической нагрузке, шоке, агональном состоянии, вследствие
операции и пр.;
б) реактивный может быть вызван интоксикацией,
воспалительным процессом, инфекционным заболеванием; в)
стойкий наблюдается при лейкозах.
Физиологический лейкоцитоз бывает при мышечной нагрузке,
психическом напряжении, во время процесса пищеварения, приеме
холодных или горячих ванн, а также в предменструальный период,
во время беременности, в период лактации и у новорожденных.
Патологический лейкоцитоз имеет место при острых
37
инфекционных болезнях ( скарлатина, ангина, пневмония, рожа,
менингит, оспа), при воспалительных процессах(аппендицит,
абсцесс легкого, септические процессы, инфаркт миокарда),
интоксикации( уремия, диабетическая кома, печеночная кома,
ионизирующее излучение), от приема лекарственных средств(АКТГ,
адреналин, кортикостероиды); при острой кровопотере, операции,
плеврите, перикардите; при болезнях крови (полицитемия,
лейкемические лейкозы, лимфогранулематоз, злокачественные
лимфомы, злокачественные опухоли. Физиологический лимфоцитоз
встречается у детей до 7 лет (40-50%).
Лейкопения: а) функциональная может иметь место при
брюшном тифе. Вирусных заболеваниях, голодании, анафилактических состояниях. После приема амидопирина, сульфаниламидных
препаратов, после воздействия ионизирующего излучения и др.; б)
органическая возникает при остром лейкозе, апластическом
состоянии костного мозга (апластическая анемия) и др.
Физиологическая лейкопения встречается намного реже, чем
лейкоцитоз, она кратковременна и ее вызывают: купание в горячей
воде, сильные эмоции и в старом возрасте.
Патологическую лейкопению вызывают –ионизирующее
излучение, лекарственные средства (амидопирин, лейкомицетин,
препараты золота, мышьяк, бензол); инфекционные болезни (грипп,
корь, краснуха, реже –бруцеллез, малярия, СПИД, лейшманиоз);
болезни крови (В-12 –дефицитная анемия, гипо и апластические
анемии, острый лейкоз); эндокринные болезни (акромегалия,
тиреотоксикоз, болезнь Аддисона); голодание, психогенная
анорексия, дефицит меди), лимфогранулематоз и злокачественные
лимфозы.
Автоматизированные методы подсчета форменных
элементов крови:
1. Фототметрический метод широко используется в
современных лабораториях. Основан на измерении степени
погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов в
приборе фотоэлектроколориметре (ФЭК – 1). Процент задержанного
света прямо пропорционален числу эритроцитов. Снимают
показания прибора и определяют количество эритроцитов по
специальной таблице.
38
2. Электронно-автоматический метод. В основе лежат два
принципа:
-Импульсивный принцип – основан на разнице электропро-
водности частиц крови и жидкости, используемой для разбавления
(«Целлоскоп» и «Кальтер»). Эритроциты, взвешенные в изотоническом растворе хлорида натрия, всасываются в специальный
капилляр с платиновыми электродами. Скачкообразные повышения
сопротивления, возникающие при прохождении частиц крови через
капилляр, вызывают электрические импульсы, амплитуда которых
пропорциональна количеству частиц.
- электронно-автоматический метод. Подсчет лейкоцитов в
современных счетчиках частиц производят по тому же принципу,
что и эритроцитов. Предварительно кровь размешивают и
смешивают с каким –либо лизирующим эритроциты реактивом. В
автоанализаторе «Техникон» в качестве такового применяют
раствор уксусной кислоты, а в аппаратах «Кальтер» и «Целлоскоп»
- сапонин и сапоглобин.
Лабораторная работа № 6.4 Определение количества
гемоглобина
Цель работы: освоить калориметрический способ
определения гемоглобина с помощью гемометра Сали
Гемоглобин является дыхательным пигментом эритроцитов,
составляя до 90% их сухой массы. Гемоглобин – сложный белок,
состоящий из собственно белковой части (глобин) и небелковой
части - простетической группы (гем), содержащей двухвалентное
железо. Важнейшая функция гемоглобина – связывание, перенос и
высвобождение кислорода и углекислого газа. Кроме того,
гемоглобин является главным внутриклеточным буфером,
поддерживающим оптимальное для метаболизма рН. Содержание
гемоглобина в норме приведено в табл.13
Таблица 13 - Содержание гемоглобина в норме
Показатели
Пол
Система
Среднее значение
г%
г/л
Ед.
г%
г/л
Гемоглобин
(Hb)
М
13,3 –
18,0
133,0 -
180,0
80-
108
15,8
158
Ж
11,7 –
15,8
117,0 -
158,0
70-95
13,7
137
39
А). Гематиновый метод (метод Сали).
Основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови
хлористоводородной кислоты в хлорид гематина коричневого цвета.
В учебных целях используют гемометр Сали, состоящий из трех
пробирок одинакового диаметра (рис.4). Одна (средняя) пробирка –
пустая и сверху открыта, две другие запаянные и содержат
стандартный раствор солянокислого гематина определенной
окраски.
Оборудование: гемометр Сали, 0,1 % раствор НСl, смеситель,
стерильный скарификатор, пипетка, дистиллированная вода,
стеклянная палочка, спирт, вата.
Рис. 4 Гемометр Сали
1 - пробирки со стандартным раствором;
2 - градуированная пробирка с исследуемой кровью;
3 -смеситель;
4 - пипетка;
5 - палочка для смешивания.
ХОД РАБОТЫ
1. В градуированную пробирку гемометра Сали налить 0,1 %
раствор соляной кислоты до нижней круговой метки – 0,2 мл.
2. Приготовить смеситель к забору крови (на тупой конец
надеть резину, промыть водой и продуть).
3. Ватным тампоном протереть мякоть 4-го пальца левой руки
и скарификатором проколоть палец (это делают потому, что 4-й
палец имеет отделенное от других пальцев синовиальное влагалище,
поэтому в случае воспаления в зоне скарификации процесс не
40
распространится на всю кисть), отступив от середины на 1-2 мм
влево.
4. Первую каплю крови стереть сухим тампоном. Во вторую
каплю погрузить кончик смесителя, держа его вертикально. Набрать
крови до метки 0,2 мл.
5. Смеситель погрузить в градуированную пробирку гемометра
и выдуть из нее кровь на дно пробирки.
6. Смеситель промыть 2-3 раза 0,1% раствором соляной
кислоты из верхнего прозрачного слоя.
7. Содержимое пробирки тщательно перемешать, ударяя
пальцем по ее концу и помешивать палочкой, а потом оставить на 5
минут.
8. В пробирку с раствором, размешивая палочкой, по каплям
внести дистиллированную воду до полного совпадения цвета
жидкости в градуированной пробирке с цветом стандарта.
9. Показания гемометра снять по нижнему мениску жидкости в
градуированной пробирке.
Градуированная пробирка гемометра имеет две шкалы,
нанесенные с обеих сторон. Одна шкала (с делениями от 2 до 23)
показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови,
грамм-процент (г%) гемоглобина. Вторая шкала (с делениями от 12
до 140) показывает единицы гемометра (или относительный процент
гемоглобина), при этом 100 единиц (или 100% по гемометру Сали)
означают, что в 100 мл крови содержится 16,67 г гемоглобина, или
100 единиц соответствует 16,67 г%.
10. Вычисление концентрации гемоглобина по формулам в г%,
% и г/л
Пример 1. Равенство красок достигнуто на отметке 15 г%
гемоглобина. Для расчета концентрации Hb в относительных
процентах применяется формула:
Формула для расчета: Х = (100 % х 15 г%)/16,7 г%,
где Х – относительное содержание гемоглобина, %.
16,7 – стандартная концентрация Hb в г%.
Пример 2. Равенство красок достигнуто на отметке 80.
Следовательно, исследуемая кровь содержит 80% гемоглобина по
сравнению со стандартом (16,7 г%)
Формула для расчета: Х = (16,7 г% х 80 %)/100 %,
где Х – количество гемоглобина в г%
Для того чтобы выразить концентрацию гемоглобина в
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]