Диагностика туберкулеза животных

Известно, что атипичные микобактерий по ряду при­знаков имеют сходство с истинными микобактериями тубер­кулеза (морфология, тинкториальные свойства, кислото-, спирто- и щелочеустойчивость), но вместе с тем обладают рядом свойств, близких сапрофитным микобактериям (фор­ма колоний, скорость роста, ферментативная активность, лекарственная устойчивость).

По данным Bergey (1974), в настоящее время иденти­фицировано только 30 видов, 11 видов микобактерий зани­мают неопределенное понижение.

окрашива ют их по методу Циля-Нильсена и просматри­вают в иммерсионной системе микроскопа; преимущество данного метода – в его быстроте. Однако возможности его ограничены. Также следует учесть, что в век антибактери­альной терапии и химиопрофилактики микобактерии тубер­кулеза в их классической форме встречаются редко и могут выделяться в значительно меньшем количестве, поэтому этот метод оказывается недостаточно чувствительны м для их выявления. В таких случаях применяют методы «нако­плени я» или «обогащения» микобактерий. Исследования Е.Л. Скрябиной (1955), Н.М. Колычева (1990) показали, что методы дифференциации микобактерии туберкулеза от кис­лотоустойчивых сапрофитов, основанные на способности последних обесцвечиваться кислотами, щелочами, спирта­ми, а также различными окислителями (марганцово-кислым калием, перекисью, хлорамин ом ), ненадежны. В связи с этим микроскопия мазков не является дифференцирующим тестом патогенных и атипичных микобактерий, но она важ­на, так как позволяет установить чистоту и кислотоустойчи­вость изолированной культуры.

температурах их рост прекращается. Культуры микобакте­рий птичьего вида имеют температурный оптимум 42°С, в то же время некоторые штаммы способны расти при темпе­ратуре 22°С, а также при 42-45°С.

В качестве дифференциального теста используют спо­собность микобактерий расти на мясопептонном бульоне или агаре. Такой способностью обладают быстрорастущие и некоторые медленнорастущие микобактерии. Возбудите­ли туберкулеза крупного рогатого скота и человека на дан­ных средах не растут.

Некоторое дифференциальное значение имеют фор­ма и характер микроколоний, которые образуются при ро­сте микобактерий в жидких питательных средах. В 1947 г. G. Middlebrook, R. Dubos, С. Pirce обнаружили, что виру­лентные микобактерии отличаются от невирулентных по ха­рактеру роста микроколоний в жидкой кровяной среде, зави­сящему от содержания поверхностного липида (гликолипид миколовой кислоты – 6,6’- димиколаттрегалоза), который G. Middlebrook назвал корд-фактором, или фактором виру­лентности. В работах Н.М. Дыхно и др. (1956), P.O. Драб­киной (1963), А.А. Солонеко, Л.К. Анищенко (1972) также подтверждена связь между выраженностью корд-фактора и вирулентностью микобактерий туберкулеза, в то же время М.Н. Немсадзе (1971), П.П. Вишневский (1973), L. Rich­mond, M. Cummings (1950) и др. не обнаружили корреляции между выраженностью корд-фактора и вирулентностью ми­кобактерий туберкулеза.

По данным Н.М. Дыхно и др. (1966), Ю.К. Вейсфейле­ра (1975), М.П. Зыкова, Т.Б. Ильиной (1978), Т.Н. Байтеря­ковой, Р.Х. Зайнуллиной (1981), корд-фактор содержится и в некоторых атипичных микобактериях.

Я.А. Благодарный (1980) пишет, что несмотря на вы­сокую достоверность типирования микобактерий туберку­леза на лабораторных животных эта методика не получила широкого распространения. Одной из основных причин, как указывалось выше, является снижение вирулентности микобактерий туберкулеза под влиянием химиопрепаратов, главным образом, препаратов ГИНК (гидразида изонико­тиновой кислоты). Кроме того, типирование на животных обходится дорого, требует наличия специальных условий и, наконец, много времени, что значительно снижает практи­ческое значение этих исследований.

Н.С. Столыгво (1974) считает, что подкожное зараже­ние морских свинок взвесями изучаемых культур микобак­терий в парафиновом масле позволяет определить патоген­ность атипичных микобактерий.

М.М. Дыхно и др. (1963) показали, что в качестве био­логической модели при диагностике туберкулеза можно ис­пользовать развивающиеся куриные эмбрионы. Микобакте­рии туберкулеза человеческого вида оказывают неодинако­вое по тяжести патогенное действие на хорион-аллантоис­ную оболочку (ХАО) в сравнении с атипичными микобак­териями. Микобактерии птичьего вида, фотохромогенные штаммы и кислотоустойчивые сапрофиты специфических изменений на ХАО не вызывают.

Чтобы облегчить работу по идентификации кислотоу­стойчивых микроорганизмов, в последние годы применяют биохимические методы исследования, основанные на отно­шении микобактерий к химическим агентам и на их различ­ной ферментативной активности.

сокой степенью достоверности, проводятся в более корот­кий промежуток времени и с меньшими материальными за­тратами.

ют амидазную пробу (Bonicke, Lisboa, 1959), включающую в себя сокращенный амидный ряд: ацетамид, мочевину, никотинамид, миразинамид, сукцинамид, аллантоин. Сущ­ность метода заключается в том, что различные виды мико­бактерий, используя определенные амиды, расщепляют их с выделением аммиака, который можно улавливать реакти­вом Несслера и методом Русселя.

Помимо количественного метода определения ами­дазной активности по R. Bonicke, В. Lisboa, существует качественный бактериологический метод, предложенный A. Taguet и др. (1967).

Особое место в дифференциации микобактерий зани­мает никотинамидазная проба, разработанная R. Hergt et al. (1968). Авторы установили, что микобактерии туберкулеза человеческого вида обладают никотинамидазной активно­стью в большей степени, чем микобактерии бычьего вида. Положительную реакцию, кроме микобактерий человече­ского вида, дают микобактерий туберкулеза птиц и другие атипичные микобактерии.

В окислительно-восстановительных процессах ми­кробной клетки активное участие принимают ферменты каталаза и пероксидаза. Важность фермента каталазы для микобактерий определяется его защитной ролью от токси­ческого действия на бактериальные клетки перекиси водо­рода, которая появляется в тканях в результате клеточного обмена. Этот фермент имеется у всех видов микобактерий, кроме изониазидоустойчивых культур микобактерий тубер­кулеза (Рудой, 1969; Зыков, 1976 и др.). Исследования япон­ских микробиологов показали, что каталаза у вирулентных микобактерий нестойкая и разрушается при 65-68° С, в то время как у атипичных микобактерий она термостабильная. Эти данные подтверждают результаты и других авторов (Ohshima, Okuyama, 1986). Н.М. Макаревич, Ю.П. Афана­сьева (1966), изучая пероксидазно-каталазную активность у туберкулезных и атипичных микобактерий, обнаружили у последних наличие ярко выраженной каталазной и от­сутствие пероксидазной активности. В последние годы для идентификации микобактерий в схемы исследований вклю­чают и арилсульфатазный тест (Wayne, 1971; Kappler, 1971 и др.). Большое значение данный тест имеет при дифферен­циациии M. avium от М. intracellularae, которые трудно диф- ференцировать другими методами (Бараускене, 1973).