Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Диагностика туберкулеза животных
.pdf
стью
вирулентно-
С ослабленой
Продолжение табл. 22
- - - Бычий
4-6
+ +
- - - - + + + +
+ + Сапрофиты
+
+ ++
100
++ ++
+ + + + - - - -
- - - - - - - ± - - - -
Cельскохозяйственное предприятие
- - + - - + - ± 1-5++ - - - Птичий
- - - - + + _ + 2-4+ - - - Бычий
++++ ± ± Сапрофиты
++++
до100
± + ± + _ + _ _
- + + Атипичная
100
++++
- - + - - + - + 2-6 ++ - - - Птичий
Звероводческое сельскохозяйственное предприятие
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Сухие, крошко-
видные
2 44-57
Желтовато-оран-
жевые
3 9-10
Гладкие, мелкие,
зернистые
3 25-26
Мелкие, влажные
1 16-17
121
сероватые
Мелкие, сухие,
шероховатые
2 30-32
желтовато-оран-
жевые
6 6-11
Влажные + + + + _ _ _ _
10-12
влаж-
ные
1
Округлые,серо-
белые, влажные
1 14-15
Окончание табл. 22
M.phlei,
штаммы
Музейные
M. smegmatis
++++ ± ± Сапрофиты
++++
30-100
- - - - + + - + 4-8 ++ - - - Бычий
Мелкие, зернистые
- - - Сапрофиты
++
2-8
- - + - - + - +
Звероводческое сельскохозяйственное предприятие
то-влажные
Крупные серова-
++++ + + Атипичные
++++
50-100
Cельскохозяйственное предприятие
± + + + - - - -
влажные
Серовато белые,
++++ ± ± Сапрофиты
30
++++
более
± + + + - - - -
шароровидные,
Слизистые, полу-
+ + + + + - - - ++++ - - - Атипичные
гладкие
Гладкие, полу-
круглые
Контроль
Влажные, желто-
± + + + - - - - ++++ ++++ + +
вато-оранжевые
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
3 39-43
9 4-10 Серовато- белые - ± ± + - - - -
2 13-19
6 4-6
122
18 3-12
2 3-4
6 -
Каталазная активность. Микобактерии туберкуле-
за бычьего вида и М. intracellularae обладали слабовыраженной активностью, а при прогревании культур до 68°С
в течение 30 мин каталазная активность у них исчезала.
Сапрофитные и скотохромогенные микобактерии обладали
различной каталазной активностью (табл. 23) и не теряли ее
после прогревания.
В полуколичественном тесте высота каталазной активности достигла 100 мм и выше. У микобактерии туберкулеза с ослабленной вирулентностью каталазная активность не
выявлена.
Формамидазная активность была отрицательной у патогенных культур М. bovis, M. avium. Культуры авирулентных микобактерий, за исключением 4 из 63 (6,3%), обладали
положительной формамидазной активностью и были отнесены к кислотоустойчивым сапрофитам.
Формамидазная активность была отрицательной у патогенных культур и штаммов М. intracellularae. Микобактерии-сапрофиты, за исключением 5 культур М. fortuitum,
обладали положительной формамидазной активностью. У
двух культур, отнесенных к М. phlei, отмечена слабая формамидазная активность. У М. intracellularae формамидазная
активность была отрицательной, а 3 культуры М. gordonae
из 13 дали формамидазоположительную реакцию.
При анализе данных табл. 23, с учетом указанных тестов, 21 культуру микобактерий можно было бы определить
как М. gordonae или как М. scrofulaceum.
По литературным данным известно, что М. gordonae
гидролизует твин-80, в то время как М. scrofulaceum не спо-
собна к этой реакции. Учитывая этот и другие факты, мы
изучили диагностическую ценность некоторых биохимических тестов (табл. 24).
Указанными тестами было изучено 157 культур микобактерий, изолированных нами в течение трех лет из объектов животноводческих помещений сельскохозяйственного
предприятия «Покровский».
123
Таблица 23
Вид
микобактерий
М. intracellularae
по Скрябиной
Обесцвечивание
Корд-фактор
_ -
М. smegmatis
+ -
***
-
M. phlei
M. bovis
-
+ -
-
+
М. fortuitum
М. gordonae, М. scrofulace-
um не идентифицированы
-
-
-
-
(первый этап)
Результаты дифференциации микобактерий, изолированных из объектов среды обитания животных
ная
мидаз-
Форма-
для
Патогенность
Рост на среде
температуре, °С
Петраньяни при
ность
актив-
активность
Каталазная
кур
ков
Пигментация
Рост на МПА
52
45
37
22
Число
- ---
Слабая
-
кроли-
-
свинок
морских
-
±*
-
+ -
+
в пересеве, дней
Скорость роста
9 11-17 +
+3,5
+
+ ++ +
30-100
Не
зара-
_**
- + +
+ +
50 2-6 +
жали
(±2)
30-90
+ ++ +
То
же
-
-
+ + +
+ +
+
9 2-5
-
+3,5
30-35
Слабая
- - - + + «
+ -
-
28 15-25
(+5)
+ +
- + - - - «
+ -
30 2-7 +
(±3)
+ ++
30-90
жали
Не зара-
- + +
+ -
+
21 9-27
* У двух культур отмечена желтовато-оранжевая окраска.
Всего: 157
** Заражение лабораторных животных осуществлялось выборочно.
*** Часть культур обесцвечивалась жавелевой водой по методике E.Л. Скрябиной.
124
Как видно из табл. 24, для М. bovis характерна уреазная
активность. Наибольшей активностью обладала культура
М. scrofulaceum, которая разлагала мочевину, никотинамид
и пиразинамид. Из 13 культур, определенных как М. gordo-
nae, 8 не разлагали мочевину и только 5 обладали уреазной
активностью.
Для М. intracellularae характерна никотинамидазная и
пиразинамидная активность. Быстрорастущие микобактерии были определены как М. fortuitum, М. phlei и М. smeg-
matis. Культуры М. fortuitum быстро и хорошо росли на
среде Петраньяни, образуя гладкие серовато-белые, влажные круглые или шероховатые неокрашенные колонии. У
22 культур этих микобактерий установлена ацетамидазная,
уреазная, аллантоиназная и формамидазная активность. У 3
культур отмечена слабая никотинамидазная активность и у
2 — пиразинамидазная.
Микобактерии, отнесенные к кислотоустойчивым сапрофитам, М. phlei и М. smegmatis, обладали более широким амидазным спектром. М. phlei ферментировали мочевину, никотинамид, пиразинамид и формамид. Однако, как
мы уже указывали, у 2 культур из 6 отмечена слабая формамидазная активность. У 29 культур М. smegmatis выявлена
ферментативная активность в отношении 7 амидов большого амидного ряда, за исключением малонамида. У 2 культур
выявлена слабая ферментация салициламида.
Тест восстановления нитратов дал положительный результат у М. fortuitum, M. phlei и М. smegmatis. Остальные куль-
туры дали отрицательную реакцию на редукцию нитратов.
Салициловый натрий в концентрации 0,1% оказывал
губительное действие на микобактерии бычьего вида. Все
другие давали хороший рост на среде Левенштейна-Йенсена с добавлением салицилового натрия. Этот тест позволяет
отдифференцировать апатогенные кислотоустойчивые микобактерии от возбудителя туберкулеза бычьего вида.
При изучении устойчивости микобактерии к 5%-му
хлориду натрия было установлено, что указанная концен-
125
Таблица 24
рованы
тифици-
Не иден-
6, (7±), 9
1, 2, 3, 4, 5,
M. fortui-
М. intracel-
Виды микобактерий
М. gordo-
M. scrofu-
M. phlei М. smegmatis
tum
lularae
nae
laceum
M. bovis
3, 5, 6
1, 3, (5±),
25(19,6%) 8 (6,2%) 13 (10,2%) 7(5,5%) 27 (21,3%) 6 (4,4%) 31 (24,5%) 10(7,8%)
(6±), 8
- - - - + + +
- + + + + + +
- - -3 - +22 ± +
- - - - + + +
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Тесты
животноводческих помещений сельскохозяйственного предприятия «Покровский»(второй этап)
Культурально-биохимическая характерактеристика, микобактеркй, изолированных из объектов
Количество
штаммов
Амидный ряд 3 3, 5, 6 3 или 0 5, 6
Редукция ни-
тратов
Рост на среде
Левенштей-
на-Йенсена с
салициловым
натрием
Формамидазная
126
к 0,5%-му
Устойчивость
активнссть
хлористому
натрию
Окончание табл. 24
Через 3 не-
дели
дели
Через 3 не-
дели
3 не-
Через
неделю
Через 1
- - - - + + +
- - - - - - -
2 3 4 5 6 7 8 9
- - - -
Через
Через 1
3 не-
неделю
- - - -
дели
1
Примечание: 5(±) — отдельные культуры давали сомнительные или слабоположительные реакции.
к 0,1%-й пикриновой
кислоте
к 0,2%-й пикриновой
кислоте
Рост на среде с NaNO2 как единственным источ-
ником азота
Деградация салицилово-
го натрия и ПАСК
Гидролиз твина - 80 - - + - ± + +
127
трация соли задерживает рост на глицериновом бульоне
М. bovis и скотохромогенных микобактерий. М. fortuitum,
M. smegmatis и М. phlei в течение 2-3 недель образуют на
указанной среде хорошо сформированную пышную пленку.
Использование нитрата как единственного источника
азота проверяли на синтетической среде, содержащей азот
только в виде нитрата натрия. Установлено, что М. bovis и
скотохромогенные микобактерии не обладали способностью усваивать нитратный азот и расти на этой среде, в то
время как М. fortuitum давали видимый рост в течение одной недели. К концу второй недели появлялся рост М. smeg-
matis, и только на третьей неделе культивирования отмечали
очень скудный рост М. phlei. На контрольных средах без добавления NaNO2 не установлено роста ни у одной из изучаемых культур.
Резистентность к пикриновой кислоте характерна для
микобактерий четвертой группы по Е.Н. Runyon.
Деградация салицилового натрия в недельный срок
была выявлена у 23 культур М. fortuitum и только 4 культуры
не окрашивали среду в черный цвет. М. smegmatis и М. phlei
также росли на средах, но среды при этом не окрашивались
в черный цвет. Лишь через три недели примерно в 80% случаев наблюдали почернение среды. Аналогичные явления
были отмечены и при изучении деградации ПАСК.
Для оценки сахаролитической активности у изучаемых микобактерий были использованы пестрые ряды. Сахаролитическая активность была изучена у 117 культур микобактерий. Результаты этих наблюдений показаны в табл.
25, из которой можно заключить, что наиболее активными
оказались микобактерии-сапрофиты М. phlei, M. smegmatis.
Обращает на себя внимание аураминовая дисковая
проба, с помощью которой, по данным отечественных и зарубежных ученых, можно легко и быстро дифференцировать вирулентные микобактерии (аураминположительные)
от атипичных и сапрофитных кислотоустойчивых микобактерий (аураминнегативные).
По этой пробе мы проверили более 100 культур ми-
128
Таблица 25
спирты
Многоатомные
дульцит
инозит
нит
ман-
сорбит
лактоза
мальтоза
сахароза
трегалоза
кси лоза
рамноза
Моносахариды Дисахариды
Сахаролитическая активность микобактерий
Число
Виды мико-
штам-
бактерий
ноза
мов
галактоза
араби-
манноза
фруктоза
глюкоза
25 ± - - - - - - + - - - - - - -
M. bovis
М. scrofula-
8 + - - - - - - - - - - - - - -
ceum
13 + - - - - - - - - - - - - - -
М. gordonae
М. intracel-
129
7 + - - - - - - - - - - - - - -
lularae
- - - 18+ - - - - - - -
+ - - + - - - + + - -
+ + + + + - - + + + 28+
-
+
+
б + + +.
27 + + +
31 + + +
М. fortuitum
M. phlei
М. smegmatis
Контроль
- - - - - - - - - - -
- - - + - - - - - - -
-
-
1 + - -
1 ± - -
М. avium
М.bovis
+ + + + + - - + + + +
+
1 + + +
1 + + + + + - - + - - - + + - -
Примечание. «±» – реакция сомнительная (окраска среды с коричневатым оттенком)
М. smegmatis
M. phlei
кобактерий, изолированных с объектов среды обитания животных. Полученные результаты позволяют сделать заключение о высокой диагностической ценности аураминовой
дисковой пробы. Следует лишь указать, что микобактерии,
определенные нами по другим тестам как М. intracellularae,
в большинстве случаев были аураминположительными.
Следовательно, аураминовую дисковую пробу можно использовать для дифференциации патогенных микобактерии
от непатогенных как дополнительный метод.
Биопроба. У 151 кролика и 151 морской свинки, зара-
женных патогенными микобактериями, изолированными в
хозяйствах (см. табл. 22), на секции выявлены характерные
туберкулезные изменения. У животных, в том числе у четырех норок, зараженных кислотоустойчивыми сапрофитами и атипичными микобактериями, отмечены хорошее развитие, прибавка в массе, а после убоя на месте инъекции
культур ни у одного животного не было найдено никаких
поражений. Лимфатические узлы, селезенка, сальник, печень, почки, легкие, сердце были стерильны в отношении
микобактерий как при окраске мазков-отпечатков, так и при
посевах на яичные среды.
Устойчивость к лекарственным препаратам (ПАСК,
фтиазид, тубазид, стрептомицин) у выделенных культур не
определяли, поскольку были получены четкие результаты
биологической пробы.
Для подтверждения видовой принадлежности микобактерий у 19 культур, изолированных с объектов животноводческих помещений, а также у 25 культур из объектов
внешней среды сельскохозяйственного предприятия «Блюдчанский» изучены патогенные свойства. У 28 кроликов и
28 морских свинок выявлены характерные туберкулезные
изменения (узелковая форма). У животных, зараженных,
по предварительным данным, микобактериями-сапрофитами, отмечены хорошее развитие, прибавка в массе, а после
убоя ни у одного животного не было найдено никаких поражений. Лимфатические узлы, селезенка, сальник, печень,
130
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]