Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Микробиология. Ч.3. Мир прокариот. Учебное пособие
.pdf
5.1. исполЬзование бактерий в селЬском хозЯйстве
также антибактериальной активностью и стимулируют ростовые процессы растений. Штаммы Bacillus subtilis используют
в фунгицидных препаратах «фитоспорин», «бактофит».
От погодных стрессовых ситуаций растения защищают
препараты, включающие ауксины, гиббереллины, кинины
и другие фитогормоны, которые вырабатывают микроорганизмы. В настоящее время разработано много комплексных препаратов пониженного класса опасности, которые не оказывают вредного влияния на человека и насекомых опылителей.
Приготовление кормов
Сено является незаменимым кормом для крупного и мелкого рогатого скота и лошадей. В хорошо и быстро высушенном сене микроорганизмы находятся в состоянии анабиоза.
В процессе сушки максимальная активность микроорганизмов
приходится на период, когда влажность травы уменьшается
на 40–60 %. В это время сено теряет много питательных веществ, которые поглощаются бактериями. Количество сахаров уменьшается на 20–30 %, декстринов на 10–45 %, крахмала на 2–28 %, жира на 10–15 %, белка на 10–40 %. При
дальнейшем снижении влажности активность микрофлоры
затухает и при полном высушивании практически прекращается. В сухом и уплотнённом состоянии сено может долго
храниться, однако при намокании сразу происходит активизация микрофлоры, что приводит к порче продукта. Процесс
сопровождается выделением тепла, температура повышается
до 90° и более. Сено может даже самовоспламениться, так
как к сильному разогреву добавляется выделение бактериями
горючих газов — водорода и метана. Гниющее сено нельзя
использовать в качестве корма, т. к. многие бактерии и грибы
выделяют токсичные вещества.
Заготовка растительной биомассы впрок с наименьшими
потерями питательных веществ осуществляется путём силосования. Подвергшийся спонтанному брожению корм хорошо
хранится, не боится сырости и перепадов температуры. Заготовку травы для силосования можно проводить и в дождливую погоду. Существуют два способа силосования — холодный
и горячий. При холодном силосовании траву закладывают
в бурты, ямы, траншеи или башни и плотно утрамбовывают.
101

102
5. применение микроорганизмов
На начальном этапе функционируют Bacterium herbicola
(40 %) и Pseudomonas fluorescens (40 %). Молочнокислые бак-
терии начинают активизироваться, когда содержание кислорода в среде уменьшается, и создаются микроаэрофильные
условия. В процессе силосования участвует большая группа
бактерий — Lactobacillus plantarum, L. brevis, Streptococcus
lactis, St. thermophilus, Betabacterium breve и др. Присутствуют также клостридии и бактерии кишечной группы, однако
при повышении кислотности гнилостные бактерии погибают.
Улучшению силосования способствуют сахара, а белки, напротив, препятствуют, так как они нейтрализуют ионы водорода,
что уменьшает кислотность. При недостатке сахара активизируются клостридии, которые выделяют масляную кислоту, и вкус корма портится, силос прогоркает. Силос нужно
хранить в уплотнённом и изолированном от доступа воздуха
виде, иначе активизируются плесневые грибы, которые не боятся повышенной кислотности. Для ускорения и улучшения
силосования в предварительно измельчённую траву добавляют
специальную закваску, соль и фермент амилазу.
Технологию горячего силосования применяют для грубых
и малоценных кормовых трав. В аэробных условиях мацерация грубых волокон идёт более эффективно, но при этом теряется много ценных питательных веществ. Для горячего силосования травяная масса раскладывается рыхло, слоем не выше
полутора метров. Следующая порция добавляется не раньше,
чем через два дня, когда температура поднимается до 50°.
Осаждение нижних слоёв происходит под тяжестью верхних
без специального уплотнения. В нижних слоях постепенно затухают аэробные процессы и включаются анаэробные. Молочную кислоту в процессе горячего силосования выделяет термофильная сенная палочка Bacillus subtilis. Последний верхний
слой утрамбовывается и хранилище запечатывается. Хранить
силос горячего приготовления нужно без доступа воздуха. При
силосовании широко применяются ферментативные препараты
и закваски чистых культур молочнокислых бактерий, что позволяет заготавливать корма высокого качества даже из трудно
силосуемых растений.
Для обогащения кормов белковыми компонентами также
используются продукты микробиологических производств.
На отходах сахарной, спиртовой, целлюлозной промышлен-

5.2. применение микроорганизмов в пищевой промышленности
ностей освоено получение дрожжей и биологически активных добавок, которые вырабатываются микроорганизмами:
Pseudomonas fluorescens (P. liquifaciens) производит аспарагиновую кислоту; Brevibacterium rium — лизин; Micrococcus
glutamatus — глутамат; Enterobacter aerogenes — валин; ацето-бутиловые бактерии синтезируют рибофлавин; актиномицеты — цианокобаламин (витамин В12). Для снижения активности патогенных бактерий, уменьшения негативного действия
гнилостной микрофлоры, усиления секреции пищеварительных
ферментов и улучшения аппетита в корма добавляют вещества
антибактериальной природы, например, бацитрацин (продукт
жизнедеятельности Bacillus licheniformis) и кормогризин, выде-
ляемый актиномицетами. Недопустимо применение медицинских препаратов, используемых для лечения людей, что, к сожалению, не редко нарушается и приводит к накоплению антибиотиков в мясе и через него в организме человека.
5.2. Применение микроорганизмов в пищевой
промышленности
Хорошо известна основополагающая роль микроорганизмов и их метаболических процессов в производстве кисломолочных продуктов, в хлебопечении и производстве алкогольных продуктов (вина, пива и т. д.).
Производство кисломолочных продуктов основано на гомоферментативном молочнокислом брожении. В естественных
условиях молочнокислые бактерии обитают на слизистой вымени коров и оттуда попадают в молоко, вызывая его прокисание. За счет естественной микрофлоры молока получают деревенские продукты — простоквашу, сметану, творог.
В промышленном производстве молоко сначала стерилизуют,
а потом добавляют стартовые культуры бактерий. Для приготовления таких продуктов, как йогурт, ряженка, варенец,
мацони, ацидофилин, используются термофильные лактобактерии — Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus,
L. acidophilus и др., которые развиваются при температуре
35–40 °С. Кефир, кумыс, айран, тан содержат некоторое количество этилового спирта — продукта жизнедеятельности
дрожжевых грибков, входящих в состав закваски, наряду
103

104
5. применение микроорганизмов
с молочнокислыми бактериями. Широко применяется агрегация микроорганизмов под названием «кефирный гриб»,
представляющая собой хрящеватые, морщинистые комочки, состоящие из кефирных дрожжей и видов Lactobacillus
иStreptococcus. Вприготовлении кумыса помимо Lactobacillus
bulgaricus принимает участие микроорганизмы рода Torula.
Наиболее ценным молочным продуктом является сыр. Процесс сыроварения состоит из двух этапов. Первый этап —
створаживание, которое проводится либо нагреванием кислого
молока с последующим отделением белковой твёрдой фракции
от жидкой сыворотки, либо с использованием сычужного фермента, выделяемого пропионовокислыми бактериями. На сычужном ферменте делаются твёрдые и наиболее дорогостоящие сорта сыра. Второй этап — созревание — очень сложный
и длительный процесс, в котором участвуют бактерии или
грибы. В молодом сыре весь азот находится в нерастворимом
состоянии в белке. По мере созревания белки гидролизируются сначала до полипептидов, а потом и до аминокислот.
В твёрдых сырах белок расщепляется на 25–35 %, а в мягких — почти полностью. В созревании сыра принимает участие целый ряд бактерий — Streptococcus lactis, S. cremoris,
Lactobacillus, Propionobacterium, а в сырах с плесенью пеницилл (Penicillium roqueforti), придающий специфический вкус
и аромат. Квашение овощей и грибов проводят гетероферментативные молочнокислые бактерии Leuconostoc mesenteroides,
Lactobacillus plantarum и др., которые выделяют не только
молочную, но и уксусную кислоты.
В производство алкогольных напитков в большинстве случаев используются дрожжи (сумчатые грибы). В естественном брожении виноградного сока участвуют винные
дрожжи Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoides, постоянно
обитающие на поверхности плодов и листьев. На предприятиях применяют чистые культуры определённых штаммов
дрожжей, которые добавляют в предварительно простерилизованный сок. На этапе созревания вина в процесс могут вовлекаться молочнокислые бактерии Pediococcus, Leuconostoc,
Lactobacillus, которые частично переводят очень кислую дикарбоновую яблочную кислоту в менее кислую молочную. При
этом не только снижается общая кислотность вина, но и обогащается его ароматический букет. Игристые вина подвергают-

5.2. применение микроорганизмов в пищевой промышленности
ся вторичному спиртовому брожению под давлением в специально закупоренных бутылках. Газирует вино выделяющийся
углекислый газ. Херес получают добавлением в молодое вино
спирта, доводя содержание алкоголя до 15 %. Креплёное, таким образом, вино оставляется на воздухе и на его поверхности образуется плёнка из хересных дрожжей Saccharomyces
beticus subsp. fermenti и S. cheresiensis, которые переводят
часть спирта в ацетальдегид и образуют компоненты специфического хересного букета. Десертные вина, которыми славится
юг Франции, отличаются сладким вкусом и несравненным букетом благодаря грибку Botrytis cinerea, которым специально заражают виноград перед сбором. B. cinerea сбраживает
только глюкозу, фруктоза остаётся и придаёт вину сладость.
Кроме того, он уменьшает кислотность вина, разлагая часть
яблочной кислоты до СО2 и Н2О.
Производство пива также основано на спиртовом брожении. Подготовленное пивное сусло заквашивают чистой культурой пивных дрожжей. Штаммы пивных дрожжей — это
продукт длительной селекции. Они не встречаются в природе
и существуют только как пивная закваска, которая поддерживается в лабораторных или домашних условиях. Пивные
дрожжи делятся на верховые и низовые. Верховые дрожжи
всплывают, так как брожение идёт очень бурно, и выделятся много газов. Таким брожением получают крепкое пиво,
например, английский эль. Низовые дрожжи работают медленно и при более низких температурах (12–15°) по сравнению с верховыми (20°). Они выделяют мало газов и остаются на дне в осадке. В производстве рисового напитка сакэ
помимо дрожжей участвуют различные микроорганизмы —
осахаривание проходит под действием амилазы, выделяемой
грибком Aspergillus oryzae, кисловатый вкус напитку придаёт
молочная кислота, образующаяся в результате действия молочнокислых бактерий. В производстве пульке и текилы принимает участие Zymomonas mobilis, сбраживающий сок голубой агавы.
Пекарские дрожжи, которые производят в промышленных масштабах — это видоизменённые верховые пивные
дрожжи.
Натуральный уксус — продукт жизнедеятельности уксуснокислых бактерий. Этанол в аэробных условиях окисляется
105

106
5. применение микроорганизмов
до уксусной кислоты бактериями родов Gluconobacter
и Acetobacter. Технологии получения натурального винного
уксуса не изменились за много столетий. Один из способов,
называемый Орлеанским, заключается в выдерживании на открытом воздухе заполненных вином деревянных чанов. Через
некоторое время на поверхности вина образуется студенистая
плёнка, и вино превращается в уксус, при этом микроэлементы и вещества винного букета сохраняются. Для получения
уксуса таким способом требуется несколько недель. Более
быстрый способ позволяет свести процесс до 4–5 дней. Чан
заполняется стружками, на поверхности которых образуется
плёнка из уксуснокислых бактерий. Вино порциями впрыскивается в чан и параллельно вдувается воздух. Большая
поверхность соприкосновения субстрата с бактериями значительно ускоряет процесс.
5.3. Использование микроорганизмов
в металлургии
На протяжении всего периода добычи меди, начиная
с античных времен, используется гидрометаллургический
метод, но возможность участия бактерий в окислении меди
и других металлов была показана только в 1922 году, когда
В. Рудольф и Л. Хельброннер обнаружили рудничные бактерии, окисляющие пирит. В 1947 году А. Колмер и М. Хинкель выделили чистую культуру Thiobacillus (Acidithiobacillus)
ferrooxidans, экспериментально доказав микробиологическую
природу процесса. Thiobacillus ferrooxidans — литоавтотрофная ацидофильная тионовая бактерия (рН 1,0–4,8, opt. 2–3;
opt. t ~ 28° С), способная окислять соединения двухвалентного железа и других металлов с переменной валентностью (Ni,
Se, Mo, As, U и др.), участвует в окислении более 20 нерастворимых сульфидных минералов тяжёлых металлов (Cu, Zn,
Pb, Sb, Hg). Позже было показано, что в сульфидных рудах
распространены и другие бактерии, окисляющие Fe2+ и сульфидные минералы: Leptospirillum ferrooxidans, Thiobacillus
(Acidithiobacillus) thiooxidans, T. caldus, Sulfobacillus
thermosulfidooxidans, Sulfobacillus acidophilus и др. а также археи Acidianus brierleyi, Sulfolobus metallicus и др.

5.3. исполЬзование микроорганизмов в металлУргии
Рудные бактерии относятся к ацидофилам с оптимумом рН
около 1,5–3,0. Наряду с мезофильными, среди них есть и термофильные бактерии (opt. t ~ 50–60° С).
В условиях естественного залегания руд активность рудоокисляющих бактерий сдерживается отсутствием кислорода.
При разработке сульфидных месторождений руды вступают
в контакт с воздухом, и в них активируются микробиологические процессы, приводящие к выщелачиванию металлов.
Эти процессы нашли применение и в металлургии. Тионовые
бактерии ускоряют растворение халькопирита в 12 раз, арсенонирита и сфалерита в 7 раз, ковелина и борнита в 18 раз
по сравнению с обычными химическими методами. Выщелачивание меди с помощью Th. ferrooxidans запатентовано
в США в 1958 году. Теперь этим способом в мире ежегодно
добывают сотни тысяч тонн меди, или примерно 5 % от ее общей добычи, при этом себестоимость меди в 1,5-2 раза ниже,
чем при обычных гидрометаллургических или пирометаллургических способах.
Современного развития биогидрометаллургия достигла
к началу 80-х годов ХХ века. В промышленных масштабах
бактериальное выщелачивание применяется для извлечения
металлов из руд в США, Канаде, Перу, Испании, Португалии,
Мексике, ЮАР, Австралии, Финляндии и других странах.
Основа технологии бактериального выщелачивания состоит
в орошение отвалов мелкодробленой руды растворами, содержащими серную кислоту, ионы железа, солей калия, азота,
фосфора и культуру тионовых бактерий. Образующаяся пульпа перемешивается и аэрируется в специальных ёмкостях,
при этом выщелачивающий раствор обогащается извлекаемыми из руды ионами металлов. Затем раствор собирают в отстойниках и извлекают из него металлы одним из физикохимических методов (электролизом, осаждением, экстракцией
растворителями в виде комплексных соединений и т. д.).
Общую схему реакции выщелачивания можно представить уравнением: MS + 2O2 → MSO4, где М — двухвалентный
металл. Например, выщелачивание меди из халькопирита или
из ковеллина можно описать следующим образом:
107
4CuFeS 2 + 17O2 + 2H2SO4 → 4CuSO4 + 2Fe2(SO4)3 + 2H2O
CuS + 2O2 → CuSO
4

108
5. применение микроорганизмов
Из медно-цинковых концентратов за 72–96 ч в раствор
извлекаются до 25 % Cu, 90 % Zn и Cd, из свинцовых концентратов можно полностью извлечь Cu, Zn и Cd.
В настоящее время разработаны методы и технологии
выщелачивания многих металлов и даже урана, разделения
сложных руд, извлечения золота из сульфидных минералов
с использованием бактерий.
В арсенопирит, антимонит и другие минералы бывают
включены мельчайшие частицы золота, которые можно освободить при окислении сульфидов. В золотосодержащих мышьяковистых концентратах арсенопирит (FeAsS) практически
полностью разрушается за 120 ч, что позволяет очистить концентраты от токсичных примесей мышьяка и при последующем цианировании извлечь до 90 % золота.
2FeAsS + 7O2 + 2H2O → 2FeAsO4 + 2H2SO4
Сходным путем получают серебро из содержащих марганец серебряных руд.
В окислении уранинита Thiobacillus ferrooxidans принимает, вероятнее всего, косвенное участие. Оксид урана IV
окисляется ионами Fe3+, образующимися при окислении пирита, содержащегося в урановых рудах.
UO2 + 2Fe3+ → UO
2 +
2Fe2+ + 1/2O2+ 2H+ → 2Fe
+ 2Fe
2 +
3 +
+ H2O
Бактериальное выщелачивание обеспечивает комплексное
и более полное использование минерального сырья, не требует создания сложных горнодобывающих комплексов, экологически безопасно, высокоэффективно, позволяет значительно уменьшить потери, возникающие при переработке бедных
и сложных руд, когда тысячи тонн металлов теряются в виде
шлаков и «хвостов».
В настоящее время развиваются и другие методы биогеотехнологии — удаление серы из углей, борьба с метаном
в угольных шахтах, повышение нефтеотдачи пластов и др.

5.4. исполЬзование микроорганизмов в очистке окрУжающей среды
5.4. Использование микроорганизмов в очистке
окружающей среды от загрязнений
Участие микроорганизмов вразложении
органических загрязнений
Микроорганизмы могут рассматриваться как фактор биологического восстановления («самоочищения») почв и водоемов от загрязнений, в первую очередь органикой. Основными
загрязнениями почв выступают нефтепродукты (до 50 % всех
загрязнений). Особым видом загрязнений с XX века стали
чужеродные для природы вещества — ксенобиотики (синтетические полимеры, красители, пестициды, лекарства, моющие
и чистящие средства и др.), плохо поддающиеся разложению
и активно накапливающиеся в окружающей среде.
Микроорганизмы принимают участие как в аэробных,
так и в анаэробных процессах «самоочищения». Они быстро
приспосабливаются к использованию новых веществ за счёт
перестройки их ферментативного аппарата. В аэробных условиях в утилизации трудно разлагающихся веществ ведущую
роль играют окислительные процессы, такие как гидроксилирование, декарбоксилирование, гидролиз эфирных связей,
окислительное расщепление ароматических колец. В анаэробных условиях осуществляются различные восстановительные процессы: восстановительная трансформация (перевод
нитрогруппы в аминогруппу), восстановительное дегалогенирование, насыщение связей, восстановление альдегидов и кетонов в спирты, а также гидролиз и конденсация. Наиболее успешными разрушителями ксенобиотиков выступают:
Pseudomonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Flavobacterium,
Arthrobacter, Nocardia, Rhodococcus, Bacillus. При этом луч-
ше справляются с утилизацией ксенобиотков микробные сообщества, где осуществляется синтрофия с межвидовым переносом водорода, ацетата, формиата и других веществ, чем
отдельные бактерии.
Разложение алифатических углеводородов начинают с окисления концевой метильной группы под воздействием монооксидаз через спиртовую группу до кислотной. Углеводороды
с короткой цепью легче поддаются разложению. Длинно-
109

110
5. применение микроорганизмов
цепочечные углеводороды доступны только некоторым микроорганизмам, например, Pseudomonas, Agrobacterium,
Corynebacterium и другим актинобактериям. Ароматические
соединения начинают видоизменяться в катехолы путём введения гидроксильных групп. Некоторые виды Pseudomonas
имеют фермент диоксидазу, который способствует разрыву связей в кольце ароматических соединений. Пероксидазы стрептомицетов трансформируют молекулы азокрасителей в катион-радикалы. В анаэробных условиях бактерии
Proteus, Enterococcus, Pseudomonas, Streptococcus faecalis,
имеющие азоредуктазы, преобразуют азокрасители в ароматические амины. Метаногены, сульфат и нитратредукторы
успешно разлагают гетероциклические соединения (индолы, производные пиридина, фураны, никотиновую кислоту).
Пластик исинтетические ткани подвергаются воздействию протеиназ, вырабатываемых некоторыми бактериями и грибами.
Хуже всего поддаются разложению полимерные смолы (полиэтилен, полипропилен, полистиролы и др.). Однако и они,
хотя и очень медленно, но всё же разрушаются в аэробных условиях грибами и бактериями из родов Streptomyces,
Arthrobacter, при высокой температуре к ним подключаются
Bacillus subtilis, B. mycoides, Aerobacter aerogenes. Полиме-
ры разлагаются на растворимые олигомеры под действием
бактериальных ферментов, принимающих участие в переработке лигнина. Микроорганизмы природных сообществ лучше
приспосабливаются к использованию ксенобиотиков для своих
нужд по сравнению с лабораторными культурами.
Естественные природные процессы «самоочищения»
протекают медленно, и лимитируются многими факторами,
в первую очередь уровнем кислорода, малой растворимостью
веществ, очаговой концентрацией загрязнений, недостатком
доступных соединений азота и фосфора и др. С целью интенсификации процессов биологической очистки необходимо
рассосредоточение и растворение загрязнений, внесения косубстратов (кислорода и минеральных солей). Для улучшения аэрации, например, разработаны способы подача в почву
по трубам кислорода под давлением. Внесение веществ, дефицитных для бактерий, способствует разложению ксенобиотиков,
так, использование азотных и фосфорных удобрений ускоряет
ликвидацию разливов нефти.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
