Гигиена сельскохозяйственных животных. Ч.2. Гигиенический контроль воды и кормов. Учебно-методическое пособие

Методы исследования прогорклых жиров, основанные на определении альдегидов, имеют важное значение. Выделяют несколько методов определения содержания альдегидов в жире.

Рассмотрим качественное определение альдегидов (реакция Видмана). Реактивы: 1%-ный раствор флюроглюцина в ацетоне, серная кислота.

Ход определения. К навеске расплавленного в пробирке жира или масла (2 г) приливают 1 мл флюроглюцина и 2 капли серной кислоты. Пробирку плотно закрывают пробкой и тщательно встряхивают, в течение 2–3 мин. Недоброкачественный жир, имеющий альдегиды, через 2–3 мин окрашивается в красный цвет с малиновым оттенком.

Занятие 11. Методы определения токсинов искусственного происхождения

Фосфорорганические соединения составляют обширную группу химических веществ (карбофос). Они обладают высокой токсичностью как для насекомых, так и для сельскохозяйственных животных. Отравление животных в большинстве случаев происходит через пищеварительный тракт, кожу и легкие.

Карбофос – густая жидкость от жёлтого до коричневого цвета, имеет неприятный запах, в воде не растворяется, применяется для борьбы с тлями, клещами плодово-ягодных культур. Карбофос ядовит для животных, смертельная доза – 200 мг на 1 кг массы. Определяют карбофос по фосфору. В пробирку помещают 1–2 мл исследуемого вещества, добавляют 3–4 мл едкого натрия и кипятят 3 мин. Охлажденный раствор фильтруют, добавляют равные объёмы азотной кислоты и раствора молибдата аммония, затем подогревают. При наличии иона фосфора выпадает жёлтый осадок.

91

Занятие 12. Биологическая оценка токсичности кормов

Токсико-биологический анализ кормов проводят в обязательном порядке, за исключением случаев, когда в присланных для диагностики кормах предполагается обнаружение возбудителя аспергиллеза. В этом случае проводят только микологическое исследование корма, не прибегая к проверке его токсичности.

12.1. Алиментарные пробы

Токсичность многих видов кормов (зернофураж, грубые корма и др.) можно установить путём скармливания их 10– 15-ти дневным цыплятам, 10-ти дневным утятам, молодым голубям (лучше самцам), мышам и морским свинкам, а при определении токсичности сена - молодым морским свинкам и кроликам. Суточную дозу кормов заменяют исследуемым кормом и дают его 3–6 подопытным животным (птице) не менее 10 дней подряд. Токсикоз проявляется быстрее, если поражённый корм скармливать подопытным животным на голодный желудок; для этого перед опытом животных оставляют на 5–6 ч без корма (дачу воды не ограничивают). Ежедневно учитывают количество съеденного корма и анализируют клинические наблюдения.

Показателями токсичности кормов при проведении биопробы у мышей, морских свинок, кроликов являются потеря массы тела, расстройства желудочно-кишечного тракта (диарея, запор) и центральной нервной системы (дрожь, угнетение или возбуждение; нарушение координации движений, судороги, параличи); у цыплят и утят – посинение гребня и серёжек, сонливость, нередко диарея, развитие анемии, судороги, параличи; у голубей – рвота. Резко токсичные корма могут вызвать гибель подопытных животных и птиц без проявления клинических признаков.

92

В зависимости от степени токсичности и количества съеденного корма заболевание и гибель подопытных животных у отдельных особей могут наступать в различные сроки. Если после скармливания исследуемого корма или выпаивания экстракта из него гибель подопытных животных в период наблюдения (10 дней) не наступает, то их убивают и вскрывают для проведения патологических исследований.

При вскрытии павших или убитых подопытных животных чаще всего обнаруживают катаральное воспаление желудоч- но-кишечного тракта, иногда кровоизлияния, а также дегенеративные изменения в паренхиматозных органах (мозг, лёгкие, поджелудочная железа, почки, печень, селезёнка, половые органы). Кроме того, для птиц характерен токсический гепатит различной интенсивности (цвет в зависимости от степени токсичности корма печени - оранжевый, жёлтый и др.).

При выделении из образцов кормов неизвестных токсических грибов для установления их роли в этиологии отравления подозреваемый корм скармливают тем видам животных, которые болели в хозяйстве.

12.2. Проба на аквариумных рыбах

Для определения токсичности зернофуража (зерно и продукты его переработки, кроме комбикормов) применяется метод исследования общей токсичности с использованием аквариумных рыб (гуппи). Принцип метода основан на извлечении из зернофуража ацетоном жиро- и водорастворимых фракций токсических веществ и в последующем воздействии этих фракций на гуппи. Метод позволяет определять токсичность зернофуража в течение 24 ч.

Реактивы, посуда и приборы: ацетон; колбы плоскодон-

ные объемом 500 мл с притёртой пробкой для экстракции; химические стаканы на 600–700 мл; воронки стеклянные диаметром 100 мм; баня водяная или песочная электрическая; мельница электрическая лабораторная; пипетки на 5 мл; фильтры обеззольные.

93

Ход определения. Пробу зернофуража в количестве 50 г тщательно измельчают на лабораторной мельнице, помещают в плоскодонную колбу с притёртой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют при встряхивании на шут- тель-аппарате в течение 2 ч. Экстракт фильтруют через бумажныйфильтр в фарфоровую чашку (экстракты из зерна кукурузы и проса фильтруют дважды) и выпаривают под тягой в водяной бане (55–60 °С) досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и переносят его в стеклянную ёмкость с 500 мл аквариумной воды (воды, в которой содержались использованные для пробы гуппи) комнатной температуры (17–20 °С). В раствор помещают 5 гуппи и независимо от пола и возраста, за которыми наблюдают в течение 24 ч. Рыб, вышедших из опыта, выбраковывают. Степень токсичности исследуемого зернофуража определяют по таблице 19.

При положительной биопробе в обязательном порядке проверяют качество ацетона, используемого для извлечения жиро- и водорастворимых фракций токсинов. В качестве контроля используют 1%-ный водный раствор ацетона (на воде в которой содержатся гуппи). В случае доброкачественности ацетона гуппи в приготовленном растворе должны оставаться живыми в течении суток.

94

12.3. Определение токсичности комбикормов, пораженных микроскопическими грибами

Метод основан на извлечении ацетоном токсических веществ из комбикорма, частичной очистке экстракта (гексаном) от липидов и некоторых неполярных хлор- и фосфорорганических соединений с последующими переэкстракцией микотоксинов хлороформом и исследованием на рыбах гуппи.

Реактивы, посуда, приборы: гексан, хлороформ для нар-

коза, делительные воронки на 250 мл и т. д.

Ход определения. Пробу комбикорма в количестве 50 г помещают в плоскодонную колбу с притёртой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют на шуттель-аппарате в течение 2 ч (в статическом положении – 20 ч). Экстракт фильтруют через бумажный обеззольный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают под тягой в водяной бане (55–60 °С) до объёма 45–50 мл. Остаток переносят в делительную воронку, в которую добавляют 10 мл воды. Чашку смывают 5 мл ацетона, смыв сливают в делительную воронку и встряхивают 2 мин. Затем в воронку вносят 50 мл гексана и встряхивают 1–2 мин. После разделения слоев нижний сливают в другую делительную воронку, а остаток (гексановая фракция) – в фарфоровую чашку. При необходимости эту фракцию исследуют на наличие хлор- и фосфорноорганических соединений.

Ацетоноводную взвесь (в делительной воронке) дважды экстрагируют 40 мл хлороформа (в каждом случае встряхивают 2 мин). После разделения слоев хлороформенные фракции (нижний слой) сливают в фарфоровую чашку и упаривают под тягой на водяной бане (55–60 °С) до исчезновения хлороформа (досуха). Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и переносят его в стеклянную ёмкость в 500 мл аквариумной воды (17–20 °С). В раствор помещают 5 гуппи независимо от пола и возраста, за которыми ведут наблюдения в течение 24 ч, отмечая их гибель через 24 ч.

95

Доброкачественность ацетона, используемого в подготовки биопробы, определяют способом, аналогичном при проведении биопробы зерна.

Оценку степени токсичности исследуемого комбикорма при помощи гуппи определяют по таблице 19.

В рационах свиней и птиц запрещается использовать слаботоксичные и токсичные комбикорма

12.4. Определение в силосе токсина В. Botulinus (работа выполняется в боксе)

Берут 1,5–2 кг силоса из нескольких мест, из частичек силоса готовят эмульсию и, тщательно прикрыв стерильной марлечкой, оставляют на 2 ч для экстрагирования. Экстракт центрифугируют до получения прозрачной жидкости.

Пробы для лабораторного исследования берут в широкогорлые стерильные колбы пинцетом, обожжённым на пламени горелки, и заливают двухкратным количеством стерильной воды или физраствора.

Биологическую пробу экстракта на наличие токсина ставят на морских. Морским свинкам вводят 1,5–2,5 мл экстракта через рот из шприца без иглы. При наличии в корме токсина свинки заболевают и погибают в течение первых двух суток.

12.5. Количественное определение головни в зерне

Берут навеску 25 г зерна, всыпают в коническую колбу и заливают 20 мл бензина. Колбу закрывают пробкой и взбалтывают в течение минуты. Бензин с находящимися в нём спорами головни сливают через сетку в градуированный цилиндр, а в оставшееся зерно снова наливают 20 мл бензина. Так повторяют 2–3 раза, сливая бензин через сетку в цилиндр. Затем зерно высыпают на сетку, ополаскивают колбу бензином и выливают его в цилиндр, ополаскивая зерно. Сетку с цилиндра снимают, закрывают его пробкой и оставляют в покое на 20–25 мин для полного осаждения спор головни в градуированной части. После отстаивания опреде-

96

ляют число делений, занимаемых компактной чёрной массой. Содержание спор головни определяют по формуле:

где Х – содержание головни, %; 0,02 – весовой коэффициент одного деления цилиндра, г;

А – число делений, занимаемых осадком спор в нижней части цилиндра;

25 – навеска зерна, г;

100 – перевод в %.

12.6. Определение спорыньи в зерне

Из навески 400 г зерна отбирают вручную все склерации («рожки»), как целые, так и их частицы, взвешивают на технологических весах с точностью до 0,01 г и определяют процентное содержание спорыньи.

12.7. Определение амбарных вредителей

Амбарные вредители (жуки, бабочки и паукообразные) уничтожают зерновые запасы, а также превращают питательные вещества кормов под влиянием своих метаболитов а опасные, иногда ядовитые продукты. Установлено, например, что в организме амбарного долгоносика содержится особое вещество, контаридин, которое обладает нарывным действием. Когда амбарный долгоносик попадает вместе с размельченным кормом в организм животного, возникают серьезные расстройства пищеварения.

Определение мучных клещей. Тело клеща прозрачное,

длинной 0,4–0,7 мм, блестящее. Клещ многояден. Клещ гибнет при температуре 40 ºС и влажности зерна 13 %. Насыпают 200–300 г зерна тонким слоем на кусок чёрной бумаги размером 40×40 см. Один край бумаги осторожно приподни-

97

мают, зерно скатывается, полупрозрачные сероватые клещи задерживаются, хорошо видимые с помощью лупы на чёрном фоне. Степень поражённости зерна мучными клещами следующая: I – на 1 кг зерна до 20 клещей; II – больше 20 клещей; III – сплошной слой из клещей. Для доброкачественного зерна допускается I степень поражённости клещами.

Определение амбарного долгоносика. Амбарный долгоно-

сик – небольшой жучок (длина тела 2,5–4,7 мм). Молодые жуки коричневого цвета, старые чёрного. Личинка белого цвета, 3–4 мм.

Для определения явной формы заражённости зерна (в зерне находится взрослая форма вредителя). Среднюю пробу 1 кг зерна просеивают через сито с круглыми отверстиями диаметром 2,5 мм. Часть образца, прошедшую через сито, согревают в течении 10–15 мин при температуре 25–30 ºС и выбирают живых долгоносиков. Если в 1 кг зерна находится от 1 до 5 долгоносиков – заражённость считают первой степени; 6–10 долгоносиков – второй; более 10 долгоносиков третьей степени.

Поражение зерна скрытой формой амбарного долгоносика определяют следующим образом. Из образца зерна берут навеску 15 г, которую освобождают от сорных примесей, испорченных зёрен, и высыпают на медную сетку в железной оправе. Амбарный долгоносик откладывает яички в просверленное им в зерне отверстие и заклеивает его пробкой из слизи и крупинок крахмала. Методика определения поражения скрытой формой амбарного долгоносика основана на появлении окраски и увеличении размера пробочек. Сетку с зерном опускают на минуту в чашку с тёплой водой (около 30 °С), в которой пробочки сильно набухают и увеличиваются в размерах. Затем сетку с зерном переносят на 1 мин в 1%-ный раствор марганцовокислого калия, в котором пробочки окрашиваются в чёрный цвет. Держат зерно в растворе 45 сек. Зерно отмывают от излишков марганцовокислого калия погружением сетки в холодную воду, после чего рассыпают тонким слоем на

98

фильтровальную бумагу и рассматривают каждое зерно под лупой. Выпуклые тёмно-окрашенные пробочки, закрывающие отверстия с яичками амбарных долгоносиков, видны при рассматривании каждого зерна. Если в навеске зерна в 15 г обнаружено до 10 пораженных зёрен - это I степень, 11–20 – II; больше 20 – III степень поражённости.

12.8. Определение биопробой токсичности кормов с использованием инфузорий Stilonihia

Основан на извлечении ацетоном из кормовой муки, сырья и комбикормов различных фракций токсических веществ и последующем воздействии водных растворов этих фракций на инфузории Stilonihia (рис. 1).

Метод позволяет определить токсичность кормовой муки, сырья и комбикормов в течение 1,5–2 ч, включая время подготовки водных растворов ацетоновых экстрактов.

Приготовление водного раствора ацетонового экстракта кормов. Пробу кормовой муки, сырья и комбикормов в количестве 10 г измельчают на лабораторной электрической мельнице в течение 1–2 мин и просеивают через сито с ячейкой 1,0 мм.

Необходимую навеску пробы (таблица 20) помещают в пробирку с притёртой пробкой (ёмкостью 25 мл), заливают ацетоном и экстрагируют пробу при энергичном встряхивании в течение двух минут. После этого пробирку помещают в штатив и дают отстояться в течение 15 мин. Экстракт в количестве 0,5 мл осторожно отбирают при помощи длинной иглы шприцем и переносят в химический стакан с отстоянной в течение одной недели и декантированной водопроводной водой комнатной температуры. Количество воды, приливаемое к ацетоновому экстракту в зависимости от вида корма, приведено в таблице 20.

Экстракцию видов сырья с малым удельным весом (мука травяная, мука кровяная, шрот, лузга, отруби) необходимо

99

проводить в конических колбах вместимостью 50–100 мл с пришлифованными пробками. Отстоявшийся в них экстракт для удобства отбора шприцем переливают в пробирку ёмкостью 5 мл, и дают отстояться еще 5 мин, а затем 0,5 мл экстракта переносят также в химический стакан с водой.

Таблица 20

Приготовление водного раствора ацетонового экстракта кормовой муки, сырья и комбикорма

Подготовка тест-организма. Для культивирования сти-

лонихий в чашку Петри вносят 25 мл питательной среды, корм – 0,003 сухих пекарских дрожжей и приливают 0,1–0,2 мл культуры инфузорий. Пересев культуры производят два

100