Генетическая токсикология

Кроме фрагментов и мостов могут встречаться следующие нарушения.

Слипания хромосом, связанные с изменением консистенции хромосом.

Многополюсные митозы возникают в результате нарушения веретена деления.

Отставания хромосом возникают при нарушении поведения хромосом на веретене деления и могут быть обусловлены нарушениями как в самой хромосоме, так и в ахроматиновом веретене.

5.4.2.Определение мутагенного эффекта химического соединения

Мутагенное действие вещества оценивается по частоте индуцированных веществом хромосомных аберраций (ХА).

Хромосомные аберрации в митозе можно регистрировать на стадии метафазы, анафазы и телофазы.

В данной работе применяется ана-телофазный метод анализа хромосомных аномалий. Он не требует специальных навыков, длительного времени, более тонкого и детального определения изменений в строении хромосом. Вместе с тем метод является достаточно чувствительным при выявлении генотоксикантов. Он не позволяет выявить все типы хромосомных перестроек, однако позволяет определить, способен ли анализирующий фактор повреждать хромосомы, т.е. является ли мутагеном или нет.

Наиболее типичные картины хромосомных перестроек, выявляемые в ана-телофазе, представлены на рисунке 5.4.2.

Ход выполнения лабораторной работы

Анализ хромосомных аберраций проводится на тех же препаратах, что и при определении митотоксического действия фактора. Каждый студент анализирует так же по два препарата. Первый – давленый препарат кончика корешка лука (контрольный вариант), второй – давленый препарат кончика корешка лука, обработанного изучаемым фактором.

1. Анализ препаратов.

При большом увеличении микроскопа (12,5 × 1,5 × 40) просматривается весь препарат последовательно на соседних полях

86

Глава 5. Методы выявления и оценки генотоксикантов

зрения. Чтобы не учесть дважды один участок, просматривают препарат, передвигая его справа налево, затем следующий ряд слева направо, и т.д. Учитывают ана-телофазы на всем препарате. Причем учитываются только те клетки, в которых расстояние между анафазными (телофазными) группами больше ширины одной анафазной (телофазной) группы. Телофазные клетки, в которых наблюдается начало образования фрагмопласта, не учитываются. Анализ перестроек не проводится при наложении клеток и при нарушении целостности оболочки клетки.

Рис. 5.4.2. Картины хромосомных аберраций на стадии ана-телофазы

Клетки, в которых не удается определить тип аберрации, относят к классу «с неразобранными аберрациями».

Каждый студент составляет таблицу 5.4.1, в которую заносит все полученные им данные.

87

Генетическая токсикология

Таблица 5.4.1

Учет хромосомных аберраций

в меристеме проростков корешков Allium cepa*

* Заполняется каждым студентом.

2. Определение частоты хромосомных аберраций.

Показателем мутагенной активности изучаемого фактора является частота хромосомных аберраций (ХА, %). Частота хромосомных аберраций показывает отношение числа клеток с хромосомными аберрациями к общему числу клеток, находящихся на стадиях ана- и телофазы, и расчитывается по формуле:

ХА,% = (Аn+Т) ×100,

где n – количество аберрантных ана- и телофаз,

(А+Т) – общее количество ана-телофаз на препарате Рассчитайте частоту ХА в контрольном и опытном вариан-

тах.

Поскольку работа проводится как индивидуальное и групповое исследование, обработке и анализу подвергаются данные, полученные всеми студентами группы. На основании таблиц 5.4.1, составленных каждым студентом, группой составляется интегральная таблица 5.4.2, куда заносятся данные всех студентов. Эти интегральные данные подвергаются статистической обработке. Обработку проводят по формулам для малых выборок.

88

Глава 5. Методы выявления и оценки генотоксикантов

89

Генетическая токсикология

90