Генетическая токсикология

Серия последовательных разведений

Рис. 5.2.2. Метод последовательного разведения культуры клеток хлореллы

64

Глава 5. Методы выявления и оценки генотоксикантов

II. Учет полученных результатов.

Чашки контрольного и опытного вариантов с хлореллой после 7 дней инкубации вынуть из термостата. Вначале учесть кон-

трольный вариант. Для этого под МБС-1 (ув. 8 × 0,6) просмотреть всю поверхность посева в чашках Петри. Подсчитать общее количество выросших колоний отдельно в каждой чашке контрольного и опытного вариантов. Чтобы было удобнее вести подсчет, надо крышку чашки разделить на 8 секторов. Просчитанные колонии отмечать точкой, нанесенной на крышку чашки. Далее подсчитать все мутантные колонии на каждой чашке.

Для каждой чашки опытного и контрольного вариантов подсчитать процент выживаемости клеток (В,%) по формуле:

W, % = N 100,

Nконтр.

где N – число выросших на чашке колоний,

Nконтр. – среднее число выросших колоний в контрольном варианте.

Вычислить для каждой чашки отдельно процент мутаций

(М, %):

M, % = Nl 100,

где l – число мутантных колоний на чашке, N – число выросших колоний.

Все результаты внести в таблицу 5.2.1.

65

Генетическая токсикология

Таблица 5.2.1

Таблица полученных в ходе работы результатов

1

2

3

4

Сумма,

∑

Сред-

нее, X

III. Статистическая обработка полученных результатов.

а) Нахождение общего размаха колебания признаков: общий размах признака ограничивается лимитами, т.е. минимальным (Xmin) и максимальным (Xmax) значением вариант. Вариантой в нашем случае является каждая чашка с посеянными клетками хлореллы. Какой вывод можно сделать, проведя сравнение контрольного и опытного вариантов? Подчеркните в таблице значения лимитов.

б) Вычисление средней арифметической: поскольку в данной работе число вариант меньше 30, следует пользоваться прямым способом: все варианты суммируются и полученная сумма делится на число вариант:

где ∑X – сумма вариант, n – число вариант.

в) Вычисление среднего квадратического отклонения (σ):

среднее квадратическое отклонение характеризует разнообразие признаков. Показателем этого являются и лимиты. Но судить по лимитам о разнообразии признака нельзя. Ведь это крайние значения, а они могут быть нехарактерными для большинства вари-

66

Глава 5. Методы выявления и оценки генотоксикантов

ант. А среднее квадратическое отклонение учитывает отклонение от среднеарифметической каждой варианты. Поэтому σ является наилучшим показателем разнообразия признака. Для малых выборок σ рассчитывается по формуле:

где n – количество проанализированных вариантов.

Рассчитайте значение σ для выживаемости и мутабильности отдельно по контрольному и опытному варианту. Полученные конечные значения и промежуточные расчетные (X i − X ) , (X i − X ) 2

внесите в таблицу 5.2.1.

г) Оценка достоверности средней арифметической: средние арифметические, характеризующие действие изучаемого вещества на выживаемость и частоту мутаций у хлореллы, рассчитаны для нашего небольшого числа повторностей, для нашей выборки. Будут ли они достоверны и для всей генеральной совокупности, для любого числа повторностей? Это устанавливается при помощи средней ошибки (m). Для малых выборок:

m = ± σn ,

где m – ошибка среднего,

s – среднее квадратичное отклонение;

n – количество проанализированных вариантов.

Из формулы видно, что величина средней ошибки находится в обратной зависимости от n. Таким образом, чем больше повторностей опыта исследуется, тем меньше ошибка X . Величину

X записывают с величиной его ошибки: X ± m . Рассчитайте m для контрольного и опытного вариантов.

д) Нахождение показателя достоверности разницы: запол-

ните таблицу 5.2.2, внеся в нее уже вычисленные показатели X , m, ν для выживаемости и мутабильности. Число степеней свободы (ν) вычисляется по формуле:

ν = n – 1.

67