
- •Введение
- •ГЛАВА 1. Генетическая токсикология, предмет и задачи
- •ГЛАВА 2. Изменчивость
- •2.1. Типы изменчивости
- •Рис. 2.1.1. Типы изменчивости
- •2.2. Основные положения теории мутаций
- •2.3. Новые положения теории мутаций
- •2.4. Классификация мутаций
- •2.5. Генные мутации
- •2.5.1. Типы генных мутаций
- •2.6. Хромосомные мутации
- •Рис. 2.6.1. Классификация хромосомных аберраций
- •Рис. 2.6.6. Выявление делеций во время мейоза и на политенных хромосомах
- •Рис. 2.6.7. Эффект положения гена: изменение числа фасеток в зависимости от положения генов в хромосоме
- •Рис. 2.6.8. Выявление дупликаций во время мейоза
- •Рис. 2.6.9. Образование инверсионной петли в мейозе
- •Рис. 2.6.13. Участок метафазной пластики. Транслокация: транслокоционный крест (слева – фотография, справа – реконструкция)
- •2.7. Геномные мутации
- •Рис. 2.7.1. Классификация геномных мутаций
- •2.8. Уровни защиты организмов от мутагенов
- •ГЛАВА 3. Методы оценки мутагенов
- •3.1. Проблемы оценки мутагенов
- •Рис. 3.1.1. Принципиальная схема поэтапного тестирования (B.A. Bridges, 1974): “+” – положительный ответ тестирования, “–” – отрицательный ответ тестирования
- •3.2. Бактериальные тест-системы для выявления мутагенов
- •3.4. Цитогенетические методы
- •3.4.1. Метафазный анализ
- •3.4.2. Ана-телофазный анализ
- •3.4.3. Микроядерный тест
- •Рис. 3.4.1. Образование микроядра из ацентрического фрагмента
- •3.4.4. Сестринские хроматидные обмены
- •Рис.3.4.2. Метафазная пластинка (сестринские хроматидные обмены обозначены стрелками)
- •3.4.5. Политенные хромосомы
- •ГЛАВА 5. Методы выявления и оценки генотоксикантов
- •5.1. Отбор и подготовка проб для проведения токсикогенетического анализа
- •5.2. Chlorella vulgaris как тест-объект для оценки генотоксичности факторов окружающей среды
- •Рис. 5.2.1. Жизненный цикл хлореллы
- •Рис. 5.2.2. Метод последовательного разведения культуры клеток хлореллы
- •Таблица полученных в ходе работы результатов
- •Сравнение данных по выживаемости и частоте мутаций у хлореллы
- •Рис. 5.2.5. Соотношение типов мутаций у Chlorella vulgaris
- •Таблица полученных в ходе работы результатов
- •5.3.1. Клеточный (митотический) цикл
- •Рис. 5.3.1 Клеточный (митотический цикл)
- •Рис. 5.3.2. Митотическое деление растительной клетки: 1 – ядро, 2 – хромосомы, 3 – цитоплазма, 4 – кариолемма, 5 – кариоплазма, 6 – глыбки хромтина, 7 – веретено деления, 8 – фрагмопласт, 9 – ядра дочерних клеток
- •Рис. 5.3.3. Морфология хромосом в течение клеточного цикла
- •5.3.2. Ход выполнения лабораторной работы
- •Определение митотического индекса в меристеме корешка Allium cepa*
- •5.3.3. Определение митотоксической активности тканей
- •Сводная таблица учета митотического и фазных индексов в меристеме проростков корешков Allium cepa*
- •5.3.4. Статистическая обработка результатов
- •Рис. 5.3.5. Соотношение фазных индексов
- •Рис. 5.4.1. Типы хромосомных аберраций (схема)
- •5.4.2. Определение мутагенного эффекта химического соединения
- •Рис. 5.4.2. Картины хромосомных аберраций на стадии ана-телофазы
- •Рис. 5.4.3. Частота хромосомных аберраций в меристеме проростков корешков Allium cepa
- •Рис. 5.4.4. Соотношение типов хромосомных аберраций
- •5.5.1. Жизненный цикл дрозофилы
- •5.5.2. Методы культивирования дрозофилы
- •Частота летальных культур у Drosophila melanogaster
- •Рис. 5.5.2. Половой диморфизм у Drosophila melanogaster
- •Рис. 5.5.3. Мутации у Drosophila melanogaster
- •Приложение
- •Генетический код
- •Словарь терминов
- •Список использованной литературы
- •Прохорова Инна Мечиславовна

Глава 5. Методы выявления и оценки генотоксикантов
учесть дважды один и тот же участок, рассматривают препарат, передвигая справа налево, затем следующий ряд слева направо. Анализируют 600 клеток с хорошо прокрашенными ядрами, неповрежденными клеточными стенками. Подсчитывают общее количество проанализированных клеток, а так же число делящихся клеток отдельно по стадиям митоза: в профазе, метафазе, анателофазе.
Каждый студент составляет таблицу 5.3.1, в которую заносит все полученные им данные.
Таблица 5.3.1
Определение митотического индекса в меристеме корешка Allium cepa*
Поле зрения |
Количество клеток в стадии |
|
|
|
|
|
интерфа- |
профазы метафазы анафазы телофазы |
|
зы |
|
1
2
3
4 и т. д.
∑ клеток в каждой фазе
Сумма делящихся клеток (П+М+А+Т)
* Заполняется каждым студентом.
5.3.3. Определение митотоксической активности тканей
Показателем уровня митотической активности тканей является митотический индекс (МI, %). Митотический индекс показывает отношение числа клеток, находящихся в митозе, к общему числу проанализированных клеток, исследованных на препарате изучаемой ткани. Индекс может говорить о нормальном протекании митоза, об угнетении процесса деления клеток или, напротив, усилении митотической активности тканей. На основании этого делается заключение о митотоксическом или митозстимулирующем действии изучаемого фактора. Определяется МI, % по фо р- муле:
79

Генетическая токсикология
МI,% = (П +М +А +Т) ×100,
N
где (П+М+А+Т) – сумма клеток, находящихся на стадии профазы, метафазы, анафазы и телофазы соответственно.
Рассчитайте значения митотического индекса в контрольном и опытном вариантах и занесите данные в таблицу 5.3.2.
Таблица 5.3.2
Сводная таблица учета митотического и фазных индексов в меристеме проростков корешков Allium cepa*
|
- |
клетокВсего |
делящихсяСумма клеткок |
|
|
|
|
|
|
повторности№ (ко решка) |
МI, % Xi − |
|
(Xi − |
|
)2 |
||
|
|
|
|
X |
X |
|||
Контроль |
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
4 |
|
|
|
|
|
|
|
|
5 |
и т.д. |
|
|
|
|
|
|
|
Сумма, ∑ |
|
|
|
|
|
|
|
|
Среднее, |
|
|
|
|
|
|
|
X m
ν
Опыт
1
2
3
4
5 и т.д.
Сумма, ∑
Среднее
X m
ν
* Вносятся данные всей группы.
Число клеток в профазе |
ПИ, % |
Число клеток в метафазе |
МИ, % |
Число клеток в анателофазе |
А-ТИ, % |
|
|
|
|
|
|
80