Тема 8. Нуклеиновые кислоты

В этом разделе представлены работы по изучению состава нуклеиновых кислот. Нуклеиновые кислоты ДНК и РНК являются, как и белки, гетерополимерами, построенными из различных мононуклеотидов.

В структуре нуклеиновых кислот, то есть в последовательности нуклеотидов, заложена вся информация о живом организме. Благодаря нуклеиновым кислотам она сохраняется и передается по наследству. Структурная организация нуклеиновых кислот довольно сложная, но в ней можно выделить первичную, вторичную, третичную структуру. В организме человека нуклеиновые кислоты связаны с простыми белками. Такие смешанные биополимеры называются нуклеопротеинами.

Задача работ: научиться осуществлять гидролиз биоорганических фракций, содержащих нуклеопротеины, идентифицировать компоненты нуклеопротеинов в гидролизате фракций.

Оборудование, материалы: 0,5 г пекарских дрожжей, 1 М раствор серной кислоты, 10%-ный раствор гидроксида натрия, 1%-ный раствор сульфата меди, 2%-ный аммиачный раствор нитрата серебра, 1%-ный спиртовой раствор тимола, концентрированная серная кислота, насыщенный раствор молибдата аммония, фильтровальная бумага, колба на 100 мл, обратный холодильник, плитка, пробирки, спиртовка.

Работа 39. Гидролиз фракции, содержащей нуклеопротеины

Выполнение работы: 0,5 г пекарских дрожжей помещают в колбу на 100 мл, добавляют 10 мл 1 М раствора серной кислоты. Делают карандашом по стеклу отметку исходного объема смеси. Колбу закрывают пробкой с обратным холодильником и кипятят в течение 20 мин. После окончания гидролиза содержимое охлаждают до комнатной температуры, доводят водой до первоначального объема и фильтруют через бумажный фильтр. С полученным фильтратом проделывают качественные реакции на составлые части нуклеопротеинов.

Работа 40. Качественные реакции на открытие составных частей

нуклеопротеинов

Схема полного гидролиза нуклеопротеинов

Нуклеопротеины

Простой белок Простетическая группа-

(протамин или гистон) нуклеиновая кислота

Полипептиды Полинуклеотиды

Пептиды Мононуклеотиды

Дипептиды Фосфорная Нуклеозиды

кислота

Аминокислоты

Пуриновые Пентозы

(аденин, гуанин) (рибоза или

Пиримидиновые дезоксирибоза)

основания

(урацил, цитозин, тимин)

Выполнение работы:

а) Биуретовая проба на пептиды.

К 5 каплям гидролизата прибавляют 10 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия и 1 каплю 1%-ного раствора сульфата меди. Жидкость окрашивается в розово-сиреневый цвет.

б) Серебряная проба на пуриновые основания.

К 5 каплям гидролизата приливают 5 капель 2%-ного аммиачного раствора нитрата серебра. Через 3-5 минут наблюдают образование рыхлого бурого осадка серебряных соединений пуриновых оснований.

в) Качественная реакция Молиша на пентозную группировку.

К 10 каплям гидролизата прибавляют 2-3 капли 1%-ного спиртового раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно приливают равный объем концентрированной серной кислоты. На дне пробирки образуется розовое окрашивание вследствие образования продукта конденсации фурфурола с тимолом.

г) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

К 5 каплям гидролизата приливают 5 капель молибденового реактива (раствора молибдата аммония в азотной кислоте) и кипятят на спиртовке 3-5 минут. Жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении образуется желтый кристаллический осадок комплексного соединения фосфорно-молибденового аммония ((NH₄)₃PO₄·12MoO₃).