Работа 16. Обнаружение фенольного гидроксила в карбоновых кислотах

Выполнение работы: взять две пробирки, в одну поместить несколько кристаллов салициловой кислоты, а в другую – аспирина. Прибавить для растворения 3-4 капли воды и затем 1 каплю 1%-ного раствора хлорного железа (III). При наличии свободного фенольного гидроксила в молекуле исследуемого вещества немедленно появляется темно-фиолетовое окрашивание. Напишите формулы салициловой кислоты и аспирина.

Тема 5. Аминокислоты. Белки

В этом разделе представлены работы по изучению химических свойств аминокислот и белков. Аминокислоты являются структурными компонентами пептидов и белков и очень важными метаболитами. Ряд аминокислот и их производных используется с лечебной целью (метионин, глутаминовая кислота, глицин, аминокапроновая кислота и т.д.). В организме человека из аминокислот образуется огромное число биологически важных соединений - гистамин, серотонин, холин и многие, многие другие.

Задача работ: научиться экспериментально доказывать наличие функциональных групп в аминокислотах, а также пептидной связи и индивидуальных аминокислот в белках.

Оборудование, материалы: 1 %-ный раствор яичного белка; 3 %-ный раствор сульфата меди (II); 10%-ный раствор гидроксида натрия; 10 %-ный раствор ацетата свинца (II); концентрированная уксусная кислота; концентрированная серная кислота, концентрированная азотная кислота, раствор аммиака, 2%-ный раствор цистеина, 10%-ный раствор гидроксида натрия, 10% -ный раствор ацетата свинца, пипетки, пробирки, держатель, спиртовка.

Работа 17.Биуретовая реакция Пиотровского (на пептидную связь).

Выполнение работы: в первую пробирку наливают 5 капель 1% раствора яичного белка, во вторую 5 капель 1% раствора желатина. Во все пробирки приливают 5 капель 10% раствора гидроксида натрия и по 1 капле 1% раствора сульфата меди и перемешивают. Во всех пробирках раствор приобретает устойчивую красно-фиолетовую (сине-фиолетовую) окраску.

Эта реакция является универсальной для всех белков, так как она открывает наличие не менее двух пептидных связей, с помощью которых соединяются между собой аминокислоты, входящие в белки, и формируют его первичную структуру. Раствор белка (нативного) дает сине-фиолетовое окрашивание, а продукты его гидролиза (пептиды) - красно-фиолетовый цвет.

Работа 18. Ксантопротеиновая реакция на ароматические аминокислоты

Выполнение работы: в первую пробирку наливают 5 капель 1% раствора яичного белка, во вторую – 5 капель 1% раствора желатина. Во все пробирки добавляют по 2-3 капли концентрированной азотной кислоты. Смесь осторожно нагревают для быстрого протекания реакции, так как она хорошо идет и без нагревания. В первой пробирке жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет, характерный для нитропроизводных. Во второй наблюдается едва заметное бледно-желтое окрашивание. После охлаждения в каждую пробирку добавляют по 10 капель концентрированного раствора аммиака или 30% раствора едкого натра. Окраска жидкости переходит в оранжевую , т.к. образуется аммонийная (или натриевая) соль динитротирозина хиноидной структуры.

тирозин

нитропроизводное тирозина желтого цвета рН < 7,0

хиноидное производное оранжево-желтого цвета рН > 7,0

Ароматические аминокислоты фенилаланин, тирозин и триптофан нитруются азотной кислотой с образованием соединений желтого цвета. Реакция положительна также с пептидами и белками, содержащими эти аминокислоты.

Работа 19. Реакция Фоля на серосодержащие аминокислоты.

Выполнение работы: в первую пробирку наливают 2 мл 1% раствора яичного белка, во вторую – 2 мл 1% раствора желатина. В обе пробирки добавляют по 2 мл 10% -ного раствор гидроксида натрия и осторожно нагревают до кипения. Затем добавляют 5 капель 10%-ного раствора ацетата свинца и вновь кипятят.

В пробирке с яичным белком появляется буровато-черное или черное окрашивание, интенсивность которого зависит от концентрации раствора белка и содержания в нем цистеина и цистина. Раствор желатина не дает окрашивания, т.к. не содержит этих аминокислот.

(CH₃COO)₂Pb + Na₂S → PbS↓ + 2CH₃COONa

черный осадок

К серосодержащим аминокислотам относятся: цистеин, цистин и метионин. Реакция положительна только с цистеином и цистином. Метионин этой реакции давать не будет, поскольку сера в его молекуле связана прочно.