Определение токсигенности микробов

В патологии человека большую роль играют токсигенные микроорганизмы, к которым относятся возбудители ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции, дифтерии, а так­же некоторые штаммы бактерий дизентерии Григорьев -Шига, стафилококка и стрептококка и некоторые другие.

Экзотоксины, вырабатываемые различными представите­лями этой группы микробов, обладают резко выраженной токсичностью, высокой избирательностью действия с пораже­нием отдельных органов и тканей и способностью при парен­теральном введении в организм вызывать образование анти­тел—антитоксинов, способных нейтрализовать соответствую­щие им экзотоксины.

Продуцируемые в процессе жизнедеятельности микроба экзотоксины легко диффундируют из клетки в окружающую их питательную среду. Бульонную культуру микроба выдер­живают в термостате в течение 2—3 недель для накопления в ней токсина, затем фильтруют через бактериальный фильтр. Получаемый при этом прозрачный фильтрат содержит неразведенный токсин.

Токсигенность микробов определяют по тому же принципу, что и вирулентность. Единицами измерения токсигенности, как и вирулентности, являются минимальная смертельная до­за (Dlm) и средняя смертельная доза (LD₅₀).

Для определения Dlm и LD₅₀ фильтрат бульонной культуры разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия в сотни, тысячи и миллионы раз. Каж­дую дозу токсина испытывают одновременно на 6—10 жи­вотных. Для постановки проб подбирают животных, наибо­лее чувствительных к исследуемому токсину. Например, дифтерийный токсин титруют на морских свинках, столбнячный токсин—на мышах.

При учете полученных результатов в протоколе опыта от­мечают дозу введенного токсина, способ его введения, массу тела животного и время наступления его гибели после введе­ния токсина.

Литература

1. Аристовский В.М. др. Учебник медицинской микробиологии. — М: Медгиз, 1949.

2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. Биргера М.О, — М: «Медицина», 1982.

3. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. —М.: «Медицина», 1978.

4. Методы общей бактериологии в 3-х т. — М:, «Мир», 1983.

5. Розанов Н.И. Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных. — М:, ГИСХИ. 1952.

6. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федоров В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. — М.: «Колос», 1995.

7. Тимаков В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии. — М.: Медгиз, 1958.

Оглавление

Введение 3

Бактериологическая лаборатория 3

Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места 4

Правила работы и поведения в лаборатории 7

Уборка лабораторного помещения 8

Мытье и обработка лабораторной посуды 9

Дезинфекция 13

Стерилизация 14

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования 14

Виды стерилизации 16

Микроскопические методы исследования 21

Приготовление препаратов для микроскопии живых микроорганизмов 21

Приготовление мазков 26

Окраска мазков 28

Простые методы окраски мазков 31

Окраска по Муромцеву 31

Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков 32

Окраска по Граму 32

Видоизменения метода окраски по Граму 34

Окраска по Граму в модификации Хукера. 35

Окраска по Граму в модификации Берка. 36

Модификация по Синеву. 38

Модификация по Эткинсу. 39

Окраска кислотоустойчивых микробов 40

Окраска по методу Циль-Нильсена 40

Метод Труанта для окрашивания на кислотоустойчивость. 41

Метод Гонзеля 42

Метод Бунге и Траутенрота 43

Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость) 43

Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость) 43

Способ Нейссера 44

Метод Пью (окраска метахроматических зерен) 44

Окраска по Романовскому-Гимза 45

Окраска капсул 46

Метод окраски капсул по Дюгиду 46

Метод окраски капсул по Гиссу 46

Метод окраски капсул по Антони 47

Способ Михина 47

Способ Гисса 47

Способ Ольта 48

Способ Ребигера 48

Способ Гусельниковой 48

Способ Кауфмана 49

Способ Ионе 49

Окраска спор 49

Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру 50

Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону 51

Метод Виртца в модификации Саватеева 51

Способ Пешкова 52

Способ Мюллера 52

Способ Ауески 53

Способ Клейна 53

Окраска жгутиков 54

Метод окраски жгутиков по Грэю 55

Метод окраски жгутиков по Ляйфсону 56

Окраска жгутиков серебрением 57

Способ Уварова 59

Способ Леффлера 59

Способ Инуйе 60

Способ Бениньетти и Джино 60

Цитоплазматические включения 60

Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты 61

Окрашивание полифосфата 61

Окрашивание полисахаридов с использованием реак­тива Шиффа 61

Метод окраски полисахаридов альциановым синим 62

Питательные среды 63

Техника посева микроорганизмов 70

Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды 72

Получение чистых культур 74

Посев штрихом 75

Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху) 76

Выделение чистой культуры по способу Дригальского 77

Анаэростат для культивирования анаэробов 77

Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов 77

Рост микробов на плотной питательной среде 77

Особенности микробного роста на жидких питательных средах 80

Рост на полужидкой питательной среде 81

Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов 81

Сахаролитические свойства микроорганизмов 82

Протеолитические свойства микроорганизмов 83

Определение индола в культуре микроор­ганизмов 85

Определение сероводорода 85

Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов 85

Определение редуцирующей способности 86

Определение фермента каталазы 86

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам 87

Лабораторные животные 89

Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных 90

Правила пополнения вивария новыми животными 91

Правила содержания экспериментальных животных в ви­варии 93

Уборка и дезинфекция вивария 97

Личная гигиена работников питомника (вивария) 98

Правила кормления лабораторных животных 98

Заболевания лабораторных животных 100

Подготовка животных к заражению 102

Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных 106

Способы заражения 110

Наркоз лабораторных животных 110

Внутрикожный метод 111

Подкожный способ заражения 111

Внутримышечный способ заражения 112

Внутрибрюшинный способ заражения 112

Внутривенное заражение кроликов 112

Внутривенное заражение крыс и мышей 113

Заражение через пищеварительный тракт 113

Заражение через дыхательные пути (интраназальное зара­жение) 115

Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод) 115

Внутримозговой метод (интрацеребральный) 115

Внутриплевральный метод 116

Содержание животных под опытом 116

Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка 116

Умерщвление и вскрытие лабораторных животных 120

Вскрытие животных 121

Определение вирулентности микробов 124

Определение токсигенности микробов 125

Литература 126

Дмитрий Аркадьевич Васильев Сергей Николаевич Золотухин

Анатолий Анисимович Щербаков

Лидия Владимировна Карпунина