Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)

1. На фиксированный мазок наливают профильтрованную смесь из 10 мл насыщенного спиртового раствора метилвиолета и 100 мл 2% карболовой воды (смесь пригодна 3 дня) и нагревают до кипения 4—5 раз, постоянно добавляя свежий раствор краски, или же оставляют на 24-48 часов при комнатной температуре;

2. Не промывая водой, на мазок наливают раствор Люголя на 10—15 минут;

3. Промывают водой;

4. Обесцвечивают сначала 5% раствором азотной кислоты в течение минуты, затем:

5. Обесцвечивают 3% раствором соляной кислоты в точение 10 секунд

6. Обесцвечивают смесью спирта и ацетона (1:1) до полного обесцвечивания мазка (до прекращения растворения краски);

7. Дополнительно окрашивают разведенным (1:10) фуксином или 1% водным раствором сафранина в течение нескольких секунд;

8. Ополаскивают водой, высушивают.

Микроскопическая картина: на красном (коричневом) фоне — сине-фиолетовые палочки и резко ограниченные зерна.

Модификация окраски Грам—Муха

Мазок сначала окрашивают смесью из 3 частей карболового раствора фуксина с 1 частью метилвиолета по Муху (см. выше), затем продолжают окраску по оригинальной прописи.

Микроскопическая картина: палочки — красного цвета, зерна — темно-фиолетовые.

Способ Нейссера

(Используется для окраски метахроматических зерен — волютина).

Раствор А
Метиленовая синька	0,1 г
Этиловый спирт 95°	2 мл
Ледяная уксусная кислота	5 мл
Дистиллированная вода	100 мл
Раствор Б
Кристаллвиолет	1 г
Этиловый спирт 95°	10 мл
Дистиллированная вода	300 мл

Для окраски смешивают 2 части раствора А с 1 частью раствора Б.

Техника окраски. На фиксированный мазок наливают смесь растворов А и Б, через минуту краску сливают, мазок обрабатывают раствором Люголя в течение минуты, затем промывают водой и докрашивают в течение 2—3 минут раствором хризоидина (1 г краски в 300 мл дистиллированной горячей воды), промывают водой и высушивают.

Микроскопическая картина: зернистость — темно-синяя, тела бактерий —светло-желтые.

Метод Пью (окраска метахроматических зерен)

К 2 мл этилового спирта добавляют 0,2 г толуидиновой синьки, а затем 100 мл 5% раствора уксусной кислоты (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл воды). Раствор хорошо хранится. На фиксированный мазок наливают краску и нагревают 1—2 минуты, до появления паров. Дают остыть, смывают водой, высушивают и иссле­дуют. При микроскопии с искусственным освещением метахромазия заметна особенно резко.

Микроскопическая картина: тела палочек — синего цвета, метахроматические зерна — красновато-фиолетовые.

Модификация Саватеева.

Приготовление красящих бумажек.

0,2 г толуидиновой синьки растирают в ступке с 5,8 г кристаллической лимонной кислоты (предварительно растертой в порошок) до получения равномерной синевато-сиреневой окраски всего порошка; затем, продолжая растирать, постепенно добавляют 10 мл дистиллированной воды. Когда вся смесь растворится, прибавляют 1 мл чистого глицерина и, хорошо размешав смесь пестиком, добав­ляют еще 10 мл дистиллированной воды; содержимое выливают в чашку и смачивают им узкие полоски (5 см длиной) фильтровальной бумаги, высуши­вают их при комнатной температуре, режут и хранят в темноте.

Техника окраски. На фиксированный мазок наносят 8—10 капель воды, кладут бумажку и нагревают 1 минуту до появления паров, что повто­ряют 3—4 раза с добавлением воды. Дают мазку остыть, смывают водой бумажку с краской, сушат и исследуют.

Результат тот же, что и при оригинальном методе Пью.