Техника окраски.

1. На препарат (используя пинцет Корнэ!) наливают протраву (реактив II) и в течение 1—2 минут подогревают до появления паров.

2. Тщательно смывают протраву дистиллированной водой (удалению протравы способствует протирание стекла вокруг мазка кусочком фильтровальной бумаги).

3. Обрабатывают препарат в течение 2—2,5 минут раствором серебра (при легком подогревании, пока на препарате не станут видны весьма слабо окрашенные в коричневый цвет округлые пятна (рассматривать на белом фоне или в проходящем свете!). Тщательно промывают мазок дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

Микроскопическая картина: тела бактерий — угольно-черного цвета, жгутики — в виде тончайших волнообразно извитых нитей коричневого или янтарно-черного цвета на прозрачном или желтоватом гомогенном фоне.

Если жгутики не окрасились, удаляют масло с препарата ксилолом и вторично повторяют процедуру окраски, так как жгутики обнаруживаются только при особенно интенсивной окраске.

В препарате могут быть осадки или грязный фон вследствие переноса на стекло частиц агара, конденсационной воды или при употреблении плохо очищенных стекол, грязного пинцета, наконец, в том случае, если была плохо отмыта протрава.

Если бактериальная эмульсия слишком густа, то бактерии в мазке будут скучены и картина флагелляции вследствие беспорядочного сплетения жгутиков будет неясна. Желательно подобрать такую концентрацию, чтобы в одном поле зрения находилось от 5 до 10 отдельно расположенных бактерий с хорошо расправленными жгутиками.

Заготовляемые для хранения препараты заключают в парафиновое масло или чистый канадский бальзам под покровным стеклом, иначе они быстро обесцветятся под действием света. Несмотря на то, что окрашивание жгути­ков считается одной из тонких микробиологических операций, окраска по Морозову при известной пунктуальности выполнения даже в руках начинаю­щих дает прекрасные результаты.

Способ Уварова

Особенность данного способа окраски жгутиков — отсутствие в протраве танина.

Техника окраски.

1. Культуру освежают двух-трехкратными пересевами на свежий агар и выращиванием при 37° в течение 15—16 часов.

2. Для приготовления эмульсии в физиологический раствор, налитый в чистую пробирку в объеме 5 мл, осторожно погружают петлю со свежей культурой для получения слабой эмульсии. Легкими круговыми вращениями пробирки между ладонями эмульсию равномерно смешивают, затем добавляют в нее одну каплю формалина.

3. Для окраски приготовляют:

а) насыщенный водный раствор калийных квасцов;

б) раствор: сульфаниловой кислоты 0,5 г + соляной кислоты 1,5 мл + 100 мл дистиллированной воды;

в) раствор Мюра: насыщенный водный раствор калийных квасцов 25 мл + насыщенный спиртовой раствор генцианвиолета - 5 мл;

г) насыщенный спиртовой раствор основного фуксина. Растворы «а» и «б» смешивают в пропорции 1:2. Растворы «в» и «г» смешивают в пропорции 3:1.

4. Окраска. Пастеровской пипеткой наносят на чистое предметное стекло каплю эмульсии и подсушивают препарат в термостате; на высох­ший нефиксированный препарат наливают смесь растворов «а» и «б», подогре­вают над пламенем при слабом отхождении паров 1—2 минуты, смывают водой и слегка высушивают. Затем на препарат наливают смесь красок «в» и «г» (раствор Мюра и насыщенный спиртовой раствор основного фуксина), нагревают препарат 1—2 минуты до слабых паров, обильно промывают и высушивают.

Микроскопическая картина: жгутики — яркого красно-фиолетового или розовато-фиолетового цвета, тела бактерий — густо-фиолетовые.