Техника окраски:

1. окрасить мазок раствором I в течение минуты,

2. промыть водой,

3. обработать раствором II в течение минуты,

4. обесцве­тить спиртом в течение 5 минут,

5. дополнительно окрасить в течение 10 секунд,

6. промыть водой и высушить.

Окраска кислотоустойчивых микробов

Кислотоустойчивость микробов зависит не только от наличия в них значительного количества липидов (около 36%), но и от ряда других хими­ческих и физических факторов. Так, например, установлено, что при нару­шении целостности фиксированных клеток возбудителя туберкулеза путем растирания их между стеклами эти микробы теряют кислотоустойчивость.

Окраска по методу Циль-Нильсена

1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый раствор фуксина и подогревают; при появлении паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько минут (2—3 минуты). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и промывают мазок водой.

2. Обесцвечивают препарат 5—10% водным раствором серной кислоты в тече­ние 3—5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5% раствор азотной или 3% раствор соляной кислоты.

3. Мазок тщательно промывают водой.

4. Споласкивают 96°спиртом.

5. Снова промывают водой.

6. Докрашивают в течение 3—5 минут леффлеровской метиленовой синькой или водным раствором (1:1000) малахитовой зе­лени или метиловой зелени.

7. Краску смывают водой, препарат высу­шивают.

Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — рубиново-красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото- и спиртоустойчивых сапрофитов — синие. Для обесцвечивания мазков при окраске по Циль-Нильсену вместо растворов кислот и спирта особо рекомендуется применение солянокислого алкоголя (соляной кислоты 3 мл + 96° спирта 97 мл) до слабо заметного розоватого оттенка препарата. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой по основной прописи. Указанным методом достигается одновременное испытание бацилл на кислото- и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спиртоподатливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото- и спиртоустойчивы.

Окраска в модификации Синева.

Фильтровальную бумагу пропитывают 2% спиртовым раствором основного фуксина, сушат и нарезают на полоски. На фиксированный мазок наносят несколько капель дистиллированной воды, накладывают полоску окрашенной бумаги, нагревают до появления паров и далее обрабатывают по оригинальной прописи Циль-Нильсена.

Мирохин (1941) рекомендует при отсутствии основного фуксина окра­шивать мазки на туберкулез по видоизмененному способу Чистовича:

1. окрас­ка генцианвиолетом или метилвиолетом на анилиновой воде с подогре­ванием — 2 минуты,

2. промывание водой,

3. обесцвечивание 2-5% азотной кислотой 8—10 секунд,

4. промывание водой,

5. обесцвечивание спиртом до побледнения,

6. промывание водой,

7. докрашивание 0,1% сафранином несколько секунд,

8. промывание водой и высушивание.

Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — фиолетовые на красном фоне. Кислотоустойчивость того или иного микроорганизма можно определить флуоресцентным методом. У этого метода есть преимущество, заключающееся в том, что стекла с образцами, в которых подозревается при­сутствие, например, микобактерий, можно просматри­вать под объективом с увеличением 60^, а не 100^; следовательно, все стекло целиком можно просмотреть за короткое время.