
- •Методы общей бактериологии
- •Введение
- •Бактериологическая лаборатория
- •Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Уборка лабораторного помещения
- •Мытье и обработка лабораторной посуды
- •Дезинфекция
- •Стерилизация
- •Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования
- •Виды стерилизации
- •Микроскопические методы исследования
- •Приготовление препаратов для микроскопииживых микроорганизмов
- •Приготовление мазков
- •Окраска мазков
- •Простые методы окраски мазков
- •Окраска по Муромцеву
- •Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков
- •Окраска по Граму
- •Видоизменения метода окраски по Граму
- •Окраска по Граму в модификации Хукера.
- •Выполнение метода:
- •Окраска по Граму в модификации Берка.
- •Выполнение метода:
- •Модификация по Синеву.
- •Модификация по Эткинсу.
- •Техника окраски:
- •Окраска кислотоустойчивых микробов
- •Окраска по методу Циль-Нильсена
- •Окраска в модификации Синева.
- •Метод Труантадля окрашивания на кислотоустойчивость.
- •Выполнение методики:
- •Метод Гонзеля
- •Метод Бунге и Траутенрота
- •Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)
- •Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)
- •Модификация окраски Грам—Муха
- •Способ Нейссера
- •Метод Пью (окраска метахроматических зерен)
- •Модификация Саватеева.
- •Окраска по Романовскому-Гимза
- •Окраска капсул
- •Метод окраски капсул по Дюгиду
- •Метод окраски капсул по Гиссу
- •Метод окраски капсул по Антони
- •Способ Михина
- •Способ Гисса
- •Способ Ольта
- •Модификация способа Ольта.
- •Способ Ребигера
- •Способ Гусельниковой
- •Способ Кауфмана
- •Способ Ионе
- •Окраска спор
- •Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру
- •Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону
- •Метод Виртца в модификации Саватеева
- •Модификация Шеффер и Фултона.
- •Способ Пешкова
- •Способ Мюллера
- •Способ Ауески
- •Способ Клейна
- •Окраска жгутиков
- •Метод окраски жгутиков по Грэю
- •Методика:
- •Метод окраски жгутиков по Ляйфсону
- •Методика:
- •Окраска жгутиков серебрением
- •Техника окраски.
- •Способ Уварова
- •Способ Леффлера
- •Способ Инуйе
- •Способ Бениньетти и Джино
- •Цитоплазматические включения
- •Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты
- •Окрашивание полифосфата
- •Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа
- •Метод окраски полисахаридов альциановым синим
- •Питательные среды
- •Техника посева микроорганизмов
- •Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды
- •Получение чистых культур
- •Посев штрихом
- •Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)
- •Выделение чистой культуры по способу Дригальского
- •Анаэростат для культивирования анаэробов
- •Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов
- •Рост микробов на плотной питательной среде
- •Особенности микробного роста на жидких питательных средах
- •Рост на полужидкой питательной среде
- •Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов
- •Сахаролитические свойства микроорганизмов
- •Протеолитические свойства микроорганизмов
- •Определение протеолитической активности микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов
- •Определение редуцирующей способности
- •Определение фермента каталазы
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Лабораторные животные
- •Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных
- •Правила пополнения вивария новыми животными
- •Правила содержания экспериментальных животных в виварии
- •Уборка и дезинфекция вивария
- •Личная гигиена работников питомника (вивария)
- •Правила кормления лабораторных животных
- •Заболевания лабораторных животных
- •Подготовка животных к заражению
- •Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных
- •Способы заражения
- •Наркоз лабораторных животных
- •Внутрикожный метод
- •Подкожный способ заражения
- •Внутримышечный способ заражения
- •Внутрибрюшинный способ заражения
- •Внутривенное заражение кроликов
- •Внутривенное заражение крыс и мышей
- •Заражение через пищеварительный тракт
- •Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение)
- •Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)
- •Внутримозговой метод (интрацеребральный)
- •Внутриплевральный метод
- •Содержание животных под опытом
- •Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка
- •Умерщвление и вскрытие лабораторных животных
- •Вскрытие животных
- •Определение вирулентности микробов
- •Определение токсигенности микробов
- •Литература
- •Оглавление
- •Методы общей бактериологии
Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение)
Животному, фиксированному на доске, прикладывают к носу кусочек ваты, смоченной эфиром или хлороформом. К заражению приступают после того, как у животного появится состояние легкого наркоза. Зараженный материал с помощью шприца вводят в нос небольшими каплями на глубину 1—1,5 мм мышам, 2—3 мм крысам, 4 мм кроликам и морским свинкам. Чтобы не поранить слизистые оболочки, для введения материала берут абсолютно тупую иглу.
Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)
Производится обычно у кроликов под местной анестезией глаза. Затем фиксируют глазное яблоко путем захватывания складки конъюнктивы (кнаружи от верхнего края роговицы) глазным пинцетом. После этого тонкой иглой, смоченной исследуемым материалом, протыкают роговицу у лимба в очень косом направлении и проникают в переднюю камеру глаза на глубину не менее 1 мм. Иглу тотчас же вынимают, а ранка закрывается сама по себе. При правильном введении иглы вытекания влаги из передней камеры быть не должно. Можно также после прокола роговицы продвинуть иглу в центральном направлении до тех пор, пока из просвета иглы не покажется жидкость. Выпустив несколько капель влаги передней камеры глаза, иглу соединяют со шприцем и вводят исследуемый материал (не более 0,05 мл).
Внутримозговой метод (интрацеребральный)
Применяется чаще у кроликов, крыс и мышей. Техника введения материала кроликам та же, что и при тральном методе, только инъекция производится прямой иглой через твердую мозговую оболочку непосредственно в толщу мозгового вещества.
Доза вводимого материала—0,2-0,3 мл. При отсутствии инструментов для трепанации можно произвести заражение в мозг путем прокола черепа через кожу, иглой шприца, несколько сбоку от средней линии в области затылочного бугра. Применяют также после разреза кожи прокол черепа острой канцелярской кнопкой с последующим введением в отверстие иглы шприца.
Кроликов можно также заражать в мозг через sulcus supraorbitalis (без трепанации).
Техника следующая: оператор пригибает к столу левой рукой голову фиксированного помощником животного, а правой производит укол короткой (4—5 мл длины) иглой в заранее прощупанную борозду. Направление при проколе должно быть несколько наклонное к средней линии, а невертикальное (опасность попадания в глазницу). Место укола предварительно выстригают и обрабатывают йодной настойкой. При проколе кожа смещается от середины к sulcus supraorbitalis; после прокола черепное отверстие закрывают кожей. Способ очень удобный и быстрый, животные переносят операцию без наркоза.
У белых мышей и крыс техника внутримозгового введения следующие: животное фиксируют в левой руке, кожу головы оттягивают большим и указательным пальцами к затылку, а мизинцем и безымянным удерживают хвост. Прокол производят через кожу в область темени, латеральне средней линии; место укола предварительно обрабатывают настойкой йода. Материал вводят медленно, во избежание резкого повышения внутричерепного давления.
Внутриплевральный метод
Укол производят с правой стороны в межреберное пространство короткой, тупой иглой.
Содержание животных под опытом
После заражения лабораторные животные носят название «подопытных» животных. Их содержат в особом, изолированном от питомника помещении при лаборатории. Технический персонал вивария обязан обо всех случаях заболевания или падежа немедленно сообщать специалисту, проводившему прививки данным животным. Врач и лаборант ежедневно наблюдают за состоянием привитых ими животных, а также проводят клинические исследования.