Задача 8.

1. Клостридии - возбудители псевдимембранозного колита.

Псевдомембранозный колит - тяжелое заболевание, вызываемое С. difficile, сопровождается общей интоксикацией и лихорадкой, схват­кообразными болями в животе, диареей с примесью крови.

С. difficile обладает адгезив­ной активностью и продуцирует комплексный термолабильный ток­син, состоящий из энтеротоксина (токсина А) и цитотоксина (токсин В).

Токсин А действует на гуанилатциклазную систему, стимулируя образование цГМФ, что приводит к развитию диареи. Этот токсин об­ладает слабым летальным действием (его определяют путем внутри­венного введения токсина в разных разведениях экспериментальным животным). Токсин В ингибирует синтез белка, нарушает функции кле­точных мембран с потерей К+ и обладает сильным летальным дей­ствием, превышающим в 1000 раз активность токсина А.

2. Патогенез псевдомембранозного колита. При попадании C.difficile в желудочно-кишечный тракт псевдомембранозный колит развивается у людей на фоне лечения антибиотиками. В результате антибиотикотерапии подавляется нормальная микрофлора толстого ки­шечника, что приводит к снижению колонизационной резистентности, обусловленной, главным образом бифидобактериями и бактероидами. Это создает благоприятные условия для адгезии и колонизации эпителия толстого кишечника антибиотикоустойчивыми штаммами С. difficile.

Образующийся комплексный токсин вызывает развитие язвенного пленчатого колита с диарейными явлениями и кровью в испражнени­ях. Слизистая толстого кишечника частично или полностью некротизируется, покрывается лейкоцитами и налетом фибрина (псевдомембрана). У детей грудного возраста заболевание может воз­никать и без применения антибиотиков.

3. Лабораторный диагноз псевдомембранозного колита. Иссле­дуемые материалы: испражнения, рвотные массы, подозрительные пи­щевые продукты.

Методы исследования:

1) Бактериологический - выделение и идентификация возбудителя - С. difficile - проводится по тем же правилам, что и при других клостридиозах с установлением идентичности возбудителя, вы­деленного от больного и из пищевого продукта.

2) Серологический - определение токсинов серотипов А или В с помощью ИФА и встречного иммуноэлектрофореза.

Задача 9.

1. Да.

Этап исследо­вания	Ход исследования	Результат
1-й	Посев исследуемого материала на чашку Петри со средой Эндо	На среде Эндо рост 1ас+ колоний
2-й	Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле 1ас+ колоний с поливалентным препаратом ОКА-сыворотки. Оставшуюся часть колонии, давшей положительную реакцию агглютинации засевают на скошенный агар для получения чистой культуры 1! в API 20 Е тест-систему или др. тест-системы.	При положительной реакции агглютинации отобранной колонии с ОКА-сывороточным препаратом делают предварительное заключение о принадлежности колонии к ЭПЭ.
3-й	Идентификация чистой культуры: а) изучение морфологических свойств в мазке, окрашенном по Граму; б) учет биохимического тестирования в) серологическая идентификация: постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с поливалентными ОКВ-, ОКС-. OKD- и ОКЕ-сыворотками; 2. Постановка реакции агглютинации на стекле с каждой адсорбированной ОК-сывороткой, входящей в состав поливалентной сыворотки, давшей реакцию агглютинации; 3. Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными групповыми и факторными О-сыворотками. В случае О-иналлютинабельности выделенную культуру просевают при 100 С в течение 30 мин для разрушения К-антнгена.	а) в поле зрения видны грамотрицательные короткие палочки с закругленными концами, расположенные беспорядочно; б) биохимические свойства, характерные для E.coli; в) культура агглютинируется одной из поливалентных ОК-сывороточных препаратов, например ОКВ-сывороткой; 2. культура агглютинируется ОК-коли-сывороткой, при этом определяется К-антнген; 3. культура даст положительную реакцию агглютинации с групповой адсорбированной коли-сывороткой О.
4-й	У чет результатов идентификации и заключение по проведенному исследованию.	Заключение: из испражнений больного выделена E.coli, cepoгруппы О, типичная по свойствам.

2. Диареегенные E.coli отличаются от остальных эшерихий по антигенным свойствам и относятся к разным серогруппам и сероварам. Кишечные колиинфекции могут иметь различное клиническое тече­ние и другие существенные отличия в зависимости от серогруппы и серовара, к которым относится возбудитель.

3.

Категория	Серогруппа
Энтеротоксигенные E.coli (ЭТЭ, ЕТЕС)	О6, 08, 020, 025, 063, 078, 080, 085, 0115, О128ас, 0139, 0148, 0153, 0159, 0167
Энтеропатогепные E.coli (ЭПЭ, ЕРЕС)	055, 086, 0111, О119, 0125, 0126, 0127, 0128ав, 0142
Энтероинвазивныс E.coli (ЭИЭ, EIEC)	О26ас, 029, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152,0164,0167
Энтерогеморрагические E.coli (ЭГЭ, ЕНЕС)	0157,026,0111,0145
Энтероаггрегируюише (энтероаггрегативные) E.coli (ЭАгЭ, EAgEC)	Не выяснены

4. Термолабильные энтеротоксины (LT-1, LT-П) - это белки с м.м. 60000-83000, обладают антигенными свойствами, имеют много сходных свойств с холерогенным токсином. Механизм действия LT-токсинов идентичен механизму действия холерогена: LT-токсин состоит из 5 субъединиц В (акцептор) и 1 субъе­диницы А (активатор), которая расщепляется после прикреп­ления на ганглиозидах Gml эпителиоцитов на А1 и А2. А2 служит для связи с субъединицами В, а А1 является собствен­но токсином. Токсин А активирует аденилатциклазную систему, в результате накапливается цАМФ. Это ведет к нару­шению водно-электролитического баланса, изменяется ак­тивный транспорт ионов: в области крипт эпителиоциты усиленно выделяют анионы Cl, HCO, катионы Na, К. затруд­нено всасывание воды, за ионами из клеток выходит вода, что дополнительно усиливает аденилатциклазу. Действие LT-токсина приводит к обезвоживанию организма и к гипокалиемии.

Термостабильный энтеротоксин (ST) имеет м.м. 2000-10000, не обладает антигенными свойствами. По структуре сходен с LT-токсином. Действует на гуанилатциклазную си­стему, что приводит также к нарушению водно-солевого об­мена и к диарее, но диарея умеренная и более продолжительная.

5. Это Эшерихии категории ЭПЭ цитотоксичные, ограничено инвазивные, иногда Энтеротоксигенные.