диссертации / 10

111

3.5. Прогностическое значение исследования изменения секреции активных

форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром

деструктивном панкреатите

Для оценки возможности прогностического значения исследования из-

менения секреции АФК посредством метода ХЛ нами было произведено оп-

ределение суммарной секреции АФК ПМЛ крови, секреции О2ˉ ПМЛ крови и способности ПМЛ секретировать АФК крови под влиянием бактериальных ком-

плексных АГ в динамике развития ОДП (1-е, 3-и, 7-е и 14-е сутки стационарного лечения) у больных с асептической и инфицированной формой течения заболева-

ния.

3.5.1. Динамическое исследование суммарной секреции активных форм кислорода и секреции супероксид анион радикала кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови больных острым деструктивным панкреатитом

Значения величин Sхл Л-ХЛ и Лц-ХЛ, характеризующие суммарную секре-

цию АФК и секрецию О2ˉ ПМЛ крови в группе доноров были приняты нами за нормальные значения. В 1 сутки у 1 группы пациентов регистрируются макси-

мальные значения суммарной секреции АФК ПМЛ, превышающие норму на

272,1% (р<0,001) (рисунок 26).

112

Рис. 26. Динамика изменения суммарной секреции АФК крови, оцениваемой по величине площади под кривой Л-ХЛ, у больных с ОДП.

Примечание: *-р<0,05; #-p<0,001 по сравнению с группой доноров.

Во 2 группе это увеличение составило 83,5% (р<0,05). В динамике развития ОДП, по мере увеличения выраженности воспалительной реакции, к 3-м суткам стационарного лечения у всех больных наблюдается дальнейший рост значений суммарной секреции АФК ПМЛ крови. У пациентов 1 группы суммарная секре-

ция АФК ПМЛ крови увеличивается на 411,0% (р<0,001), а у пациентов 2 группы

- на 206,5% (р<0,05) по сравнению с донорами. К 7-м суткам данный показатель начинает достоверно снижаться в обеих обследуемых группах больных, но не достигает нормальных значений. В 1 группе пациентов с асептическим течением ОДП суммарная секреция АФК ПМЛ крови снижается в большей степени, чем во

2 группе с инфицированием ОДП. К 14-м суткам суммарная секреция АФК ПМЛ крови в 1 группе приближается к нормальным величинам, а у пациентов 2 груп-

пы ниже нормы на 22,6% (р<0,05).

Секреция О2ˉ ПМЛ крови в 1 группе пациентов выше нормы на 28,8%

(р<0,001) в 1-е сутки и на 31,9% (р<0,001) на 3-е сутки стационарного лечения ОДП, а на 7-е и 14-е сутки статистически не отличается от значений в группе до-

норов (рисунок 27). Во 2 группе пациентов уже в 1-е сутки наблюдается сниже-

ние уровня секреции О2ˉ ПМЛ крови на 34,2% (р<0,05) по сравнению с донорами

113

и на 48,9% (р<0,05) по сравнению с 1 группой пациентов. К 3-м суткам секреция О2ˉ возрастает и не сильно отличается от значений в 1 группе пациентов. На 7-е

сутки значения секреции О2ˉ становятся максимальными по сравнению с донора-

ми и 1 группой пациентов. Но к 14-м суткам данный показатель снова снижается и его значения ниже нормы на 16,7% (р<0,05).

Рис. 27. Динамика изменения секреции О2ˉ ПМЛ крови, оцениваемой по величине площади под кривой Лц-ХЛ, у больных с ОДП.

Примечание: *-р<0,05; #-p<0,001 по сравнению с группой доноров.

3.5.2. Динамическое исследование праймирующего влияния бактериальных комплексных антигенов на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови больных острым деструктивным панкреатитом

При изучении праймирующего влияния бактериальных комплексных АГ на суммарную секрецию ПМЛ крови у доноров нами было отмечено, что воздейст-

вие самой высокой концентрации всех исследуемых комплексных АГ (кроме

Klebsiella pneumoniae) - Смах= 1000×104 микр. кл/мл вызывает достоверное подав-

ление эффекта прайминга ПМЛ (ИП<1,0). У пациентов с различными формами течения ОДП в динамике развития заболевания это влияние на суммарную сек-

114

рецию АФК ПМЛ крови было неоднозначным. Наблюдаемый нами факт заложен в основу возможного прогнозирования формы течения воспалительного процесса при ОДП.

Праймирующее влияние комплексного антигена Escherichia coli на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови больных острым деструктивным панкреатитом

При воздействии комплексного АГ E.coli в различных концентрациях (5×104 -

1000×104 микр.кл/мл) на ПМЛ крови больных 1 группы не наблюдается обратной дозовой зависимости ИП, как в группе доноров (Приложение. Таблица 1). На протяжении всего исследования вплоть до 14-х суток стационарного лечения влияние всех концентраций комплексного АГ вызывает праймирование суммар-

ной секреции АФК ПМЛ крови, в том числе и Смах, достоверно подавляющая суммарную секрецию АФК ПМЛ у доноров. Воздействие оптимальной концен-

трацией данного комплексного АГ вызывает увеличение праймирующей способ-

ности ПМЛ по сравнению с группой доноров на 32,4% (р<0,001) в 1-е сутки ста-

ционарного лечения, на 29,7% (р<0,001) - на 7-е сутки, на 16,2% (р<0,05) - на 14-е

сутки. При воздействии Смах в 1 группе наблюдается увеличение праминг-

эффекта в 1-е сутки - на 139,3% (р<0,001), 7-е сутки - на 332,6% (р<0,001), а на

14-е сутки - на 71,9% (р<0,001) по сравнению с донорами (рисунок 28).

При воздействии комплексного АГ E.coli на ПМЛ крови пациентов 2 группы на протяжении всего срока наблюдения фиксируется обратная дозовая зависи-

мость ИП от концентрации комплексного АГ, но данный показатель достоверно снижен по сравнению с таковым у доноров. Воздействие Сопт данного комплекс-

ного АГ вызывает снижение праймирующей способности к суммарной секреции АФК ПМЛ по сравнению с группой доноров и 1 группой пациентов. При воздействии Смах во 2 группе также фиксируется снижение праймингэффекта: в

1-е сутки на 23,6% (р<0,001), 7-е- на 6,7% (р<0,05), а 14-е сутки - на 5,6% (р<0,05)

по сравнению с донорами.

115

Рис. 28. Динамика изменения прайминг - эффекта ПМЛ крови, оцениваемого по индексу соотношения площадей Л-ХЛ у больных с ОДП при воздействии комплексного АГ E.coli. в концентрации 1000×104 микр. кл/мл.

Примечание: *-р<0,05; #-p<0,001 по сравнению с группой доноров.

Праймирующее влияние комплексного антигена Staphylococcus aureus

на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови больных острым деструктивным панкреатитом

При воздействии комплексного АГ Staphylococcus aureus в различных кон-

центрациях (5×104 -1000×104 микр.кл/мл) на ПМЛ крови у пациентов 1 группы не наблюдается обратной дозовой зависимости ИП, как в группе доноров (Прило-

жение. Таблица 2). На протяжении первых 7-ми суток стационарного лечения влияние всех концентраций комплексного АГ вызывает праймирование суммар-

ной секреции АФК ПМЛ крови, в том числе и Смах, достоверно подавляющая суммарную секрецию АФК ПМЛ у доноров. К 14- м суткам значения ИП в 1

группе пациентов на всех концентрациях комплексного АГ не значительно отли-

чаются от таковых в группе доноров. Воздействие оптимальной концентрацией данного комплексного АГ вызывает увеличение праймирующей способности ПМЛ к секреции АФК по сравнению с группой доноров на 11,5% (р<0,05) в 1-е

116

сутки стационарного лечения, на 39,7% (р<0,05) - в 7-е сутки. При воздействии Смах в 1 группе наблюдается достоверное увеличение праминг-эффекта в 1-е

сутки - на 251,6% (р<0,001), 7-е сутки - на 487,0% (р<0,001), а на 14-е сутки -

всего на 3,2% (р<0,05) по сравнению с донорами (рисунок 29).

При воздействии комплексного АГ Staphylococcus aureus на ПМЛ крови па-

циентов 2 группы на протяжении всего срока наблюдения фиксируется обратная дозовая зависимость ИП от концентрации комплексного АГ, но данный по-

казатель достоверно снижен по сравнению с таковым у доноров на всех концен-

трациях комплексного АГ. Воздействие Сопт данного комплексного АГ вызывает снижение праймирующей способности к суммарной секреции АФК ПМЛ по сравнению с группой доноров и 1 группой пациентов. При воздействии Смах во 2

группе также фиксируется снижение праймингэффекта: в 1-е сутки на 67,7% (р<0,001), 7-е-14-е сутки - на 29,0% (р<0,05) по сравнению с донорами.

Рис. 29. Динамика изменения прайминг - эффекта ПМЛ крови, оцениваемого по индексу соотношения площадей Л-ХЛ у больных с ОДП при воздействии комплексного АГ Staphylococcus aureus в концентрации 1000×104 микр. кл/мл.

Примечание: *-р<0,05; #-p<0,001 по сравнению с группой доноров.

117

Праймирующее влияние комплексного антигена Klebsiella pneumoniae

на секрецию активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови больных острым деструктивным панкреатитом

При воздействии комплексного АГ Klebsiella pneumoniae в различных кон-

центрациях (5×104 -1000×104 микр.кл/мл) на ПМЛ крови больных 1 группы не на-

блюдается двухфазной дозовой зависимости ИП, как в группе доноров (Прило-

жение. Таблица 3). На протяжении всего исследования вплоть до 14-х суток ста-

ционарного лечения влияние всех концентраций комплексного АГ вызывает праймирование суммарной секреции АФК ПМЛ крови, в том числе и Смах, досто-

праймирующей способности ПМЛ по сравнению с группой доноров. Однако, при воздействии Смах комплексного АГ, в течение всего исследования фиксируется увеличение праймирующей способности ПМЛ крови в 1 группе пациентов по сравнению с донорами. В 1-е сутки ИП увеличивается на 79,4% (р<0,001), на 7-е

сутки - на 53,9% (р<0,05), а на 14-е сутки - на 20,6% (р>0,05).

Во 2 группе пациентов при воздействии комплексного АГ Klebsiella pneumoniae показатель, характеризующий прайминг - ИП также не имеет двухфа-

зовой дозовой зависимости от концентрации комплексного АГ, как и в 1 группе.

Но достоверно снижен по сравнению с таковым у доноров. Воздействие Сопт дан-

ного комплексного АГ вызывает снижение праймирующей способности к сум-

марной секреции АФК ПМЛ по сравнению с группой доноров и 1 группой паци-

ентов. При воздействии Смах в 1сутки ИП достоверно снижен на 43,1% (р<0,05),

на 7-е сутки – на 28,4% (р<0,05), а на 14-е сутки – на 38,2% (р<0,05) (рисунок 30).

118

Рис. 30. Динамика изменения прайминг - эффекта ПМЛ крови, оцениваемого по индексу соотношения площадей Л-ХЛ у больных ОДП при воздействии комплексного АГ Klebsiella pneumoniae в концентрации 1000×104 микр. кл/мл.

Примечание: *-р<0,05; #-p<0,001 по сравнению с группой доноров.

При воздействии комплексного АГ Pseudomonas aeruginosa в различных концентрациях (5×104 -1000×104 микр.кл/мл) на ПМЛ крови больных 1 группы не наблюдается обратной дозовой зависимости ИП, как в группе доноров (Прило-

жение. Таблица 4). На протяжении всего срока наблюдения вплоть до 14-х суток стационарного лечения влияние всех концентраций комплексного АГ вызывает праймирование суммарной секреции АФК ПМЛ крови, в том числе и Смах, дос-

товерно подавляющая суммарную секрецию АФК ПМЛ у доноров. Воздействие Сопт данного комплексного АГ не вызывает увеличение праймирующей способ-

ности ПМЛ по сравнению с группой доноров. Однако, при воздействии Смах в 1

группе наблюдается достоверное увеличение праминг-эффекта в 1-е сутки - на

119

367,5% (р<0,001) , 7-е сутки - на 477,5% (р<0,001), а на 14-е сутки - на 117,5% (р<0,001) по сравнению с донорами (рисунок 31).

Рис. 31. Динамика изменения прайминг - эффекта ПМЛ крови, оцениваемого по индексу соотношения площадей Л-ХЛ у больных с ОДП при воздействии концентрацией 1000×104 микр.кл/мл комплексного АГ Pseudomonas aerugenosa.

Примечание: *-р<0,05; #-p<0,001 по сравнению с группой доноров.

Во 2 группе пациентов при воздействии комплексного АГ Pseudomonas aeruginosa показатель, характеризующий прайминг - ИП также не имеет обрат-

ной дозовой зависимости, как в 1 группе. Причем влияние всех концентраций комплексного АГ Pseudomonas aeruginosa не вызывает эффекта прайминга ПМЛ крови в течение всех 14-ти суток. Однако воздействие Смах во 2 группе также вызывает снижение данного эффекта, но оно выше, чем у доноров: в 1-е сутки на

12,5% (р<0,05), 7-е- на 52,5% (р<0,001), а 14-е сутки - на 115,0% (р<0,001).

Таким образом, полученные результаты по динамическому исследованию секреции АФК ПМЛ крови у больных с ОДП показывают, что уже на ранних сроках заболевания (1-е сутки стационарного лечения) при инфицированном течении ОДП наблюдается изменение кислородозависимого метаболизма ПМЛ крови, проявляющееся в снижении суммарной секреции АФК, снижении секреции О2ˉ и снижении суммарной секреции АФК под влиянием бактериаль-

ных комплексных АГ, участвующих в инфицировании при ОДП.

120

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На начальном этапе нашей работы мы отработали условия определения сек-

реции АФК ПМЛ методами Л-ХЛ и Лц-ХЛ в норме, а также исследовали прай-

мирующее влияние инкубации в течение 60 мин при 37˚С на ПМЛ. Данное воз-

действие на ПМЛ будет являться неспецифическим фактором, поскольку не тре-

бует наличия специфических рецепторов на поверхности клетки для запуска ды-

хательного взрыва. Механизм такого влияния заключается в изменении ионной проницаемости мембран клеток и последующей сборке и активации НАДФН-

оксидазы ПМЛ [35]. В наших исследованиях мы установили, что в механизмах прайминга ПМЛ при воздействии инкубации в течение 60 мин при 37˚С играют роль компоненты цельной крови, которые in vivo присутствуют в кровеносном русле. При изучении праймирующего влияния инкубации в течение 60 мин при

37˚С на выделенных ПМЛ мы получили, что влияние компонентов цельной кро-

ви на активацию НАДФН-оксидазы незначительно и составляет 13-15%. В то же время влияние на другие ферментные системы – МПО и СОД, ответственные за секрецию АФК, отличных от О2ˉ составляло 160-169%.

Таким образом, можно заключить, что в цельной крови присутствуют фак-

торы, которые при воздействии инкубацией при 37˚С в течение 60 минут оказы-

вают значительное предстимулирующее влияние на работу таких ферментных систем окислительного метаболизма ПМЛ как МПО и СОД. В то же время, мож-

но сделать вывод о том, что процессы выделения клеток оказывают негативное влияние на способность ПМЛ к секреции АФК. Поэтому для получения резуль-

татов по изучению секреции АФК ПМЛ in vitro неискажающих и приближен-

ных к картине in vivo необходимо проводить исследование на цельной крови.

Также мы подтвердили наше предположение о том, что и сами ПМЛ в кровенос-

ном русле могут предстимулироваться в ответ на влияние такого неспецифиче-

ского фактора как температура 37˚С, причем за счет активации НАДФН-

оксидазной реакции.