4.) Основные символы и сокращения для обозначения хромосомных аномалий: обозначения – плеч хромосом, аберраций хромосом, анеуплоидий.

Кариотип человека в норме и при хромосомных заболеваниях требуют унифицированной символики хромосом. В настоящее время исследователи всего мира – клинические генетики, невропатологи, педиатры, психологи, психиатры используют «Международную систему для цитогенетической номенклатуры хромосом человека». Согласно последней номенклатуре такие морфологические признаки хромосом, как теломеры, центромеры, специфические полосы по длине хромосомы, используются в качестве сравнительных знаков.

В хромосоме выделяют - короткое – p и длинное - q плечи хромосом. В каждом плече выделяют районы, полосы и сегменты, которые пронумерованы от центромеры к теломере, например, запись – 6 q2,3 указывает на то, что это хромосома 6, длинное плечо q, район 2, сегмент 3. Районы и сегменты на хромосомах проявляются после дифференциального окрашивания хромосом различными методами Q, G, R, C, T.

В номенклатуре существует следующие обозначения для описания нормальных кариотипов 46, ХХ девочка и 46, ХУ мальчик. В начале кариотипа записывается общее число хромосом, включая половые хромосомы. Затем записываем половые хромосомы.

Численные аномалии обозначаются изменением числа хромосом в кариотипе и указанием (+) или (–) той или иной присутствующей или отсутствующей хромосомы. Исключением являются половые хромосомы, при количественных аномалиях которых (+) или (–) никогда не ставятся. Причём отсутствие одного из гомологов хромосом или его части (делеция) в кариотипе, несмотря на тип мутации (численной или структурной), носит название моносомии – полной или частичной, а присутствие – трисомии полной или частичной. Полиплоидии отражаются только числом хромосом (69).

Структурные аномалии типа делеций, дупликаций, инверсий, инсерций и транслокаций обозначают как: del(-), dup(+), inv, ins и t соответственно, центрические робертсоновские - rob.

Когда необходимо обозначить какой – либо участок при описании аномалий хромосом, то вначале пишут число хромосом в кариотипе, затем номер хромосомы в которой произошла мутация, потом символ плеча (p или q) и знаки плюс или минус записываем после символа плеча. Например:

46,ХХ, del, Х p(-) – женский кариотип с 46 хромосомами и делецией короткого плеча Х – хромосомы.

45,ХХ, rob 15,16 – кариотип с 45 хромосомами и робертсоновской транслокацией,

46,ХУ, t 2,5, q21, q31 – транслокация произошла между сегментами 21 и 31 длинных плеч 2 и 5 хромосом.

5.)Цитогенетический метод и его возможности. Цитогенетический метод основан на микроскопическом исследовании хромосом –

•кариотипа (индивидуального набора хромосом в норме, и при геномных и хромосомных мутациях)

•полового хроматина

Позволяет выявлять

1. Геномные мутации:

а) полиплоидии,

б) анеуплоидии – трисомии 2п + 1 (с. Дауна, Эдварса, Патау, Клайнфельтера),

- моносомии 2п – 1 (Тернера - Шерешевского),

- нулисомии 2п – 2

в) мозаицизм 46/45 хромосом в группах клеток

2. Хромосомные абберации – транслокации (с. Дауна), делеции (с. «Кошачьего крика», Вольфа - Хиршхорна)

3. Микрохромосомные перестройки при моногенных синдромах (филадельфийская хромосома - делеция 21 хромосомы – миелолейкоз - белокровие)

Цитогенетический метод применяется для:

1. диагностики хромосомных и геномных болезней

2. изучения хромосомных и геномных мутаций

3. определения пола при нарушении половой дифференцировки фенотипа

4. изучения полового хроматина

6.) Этапы цитогенетического метода – приготовление и окрашивание препаратов метафазных хромосом: а)подбор клеточного материала б)методы культивирования в)получение препаратов метафазных пластинок с раздельно лежащими хромосомами г)окраска хромосом:  стандартная сплошная рутинная окраска хромосом по методу Гимзе;  дифференциальное окрашивание по методу Гимзе в сочетании с дополнительными процедурами;  использование флуоресцентных красителей (акрихин – иприт);  особые модификации окраски (С – метод, Q – метод, G – метод); д)изучение количества и структуры хромосом.

• Подбор клеточного материала,

• Культивирование соматических клеток на искусственных питательных средах (клетки человека быстро размножаются на питательных средах)

• Добавление ФГА - фитогемагглютинина – стимулятора митоза,

• Добавление колхицина – мутагена разрушающего веретено деления во время митоза, для остановки митоза на стадии метафазы

• Обработка клеток гипотоническим раствором, вследствие хромосомы набухают, рассыпаются и лежат свободно

• Окрашивание хромосом

• Изучение под микроскопом, фотографирование

• Вырезание и построение идеограммы

Основные сведения о морфологии хромосом человека получены при изучении их в метафазах митоза и прометафазе-метафазе мейоза. При этом важно, чтобы количество делящихся клеток было достаточно велико.