18. Реакции иммунитета при вирусных заболеваниях

Р-ции иммунитета - это р-ции между антигеном и антителом или между антигеном и сенсибилизир (повыш чувствит) лимфоцитами, кот происходят в живом орг и м б воспроизведены в лаб условиях. Р-ции антигена с антителом назыв серологич или гуморал, потому что участвующие в них антитела (иммуноглобулины) всегда наход в сыворотке крови. Р-ции антигена с сенсибилизированными лимфоцитами назыв клет. Р-ции иммунитета испол: 1) для серологич диаг (серодиаг) заб- обнаружение в сыворотке крови больных людей антител к определен возбуд инфекц заб (известному антигену); если в сыворотке крови больного чела присутствуют антитела к какому-либо возбуд, то именно этот возбуд и вызвал данное инфекц заб; 2) для серологич идентификации (сероидентификации) микробов - для уст вида возбуд заб при помощи иммун диагностич сывороток (известных антител); если антитела связывают возбуд, выделенного от больного чела, то этот микроб идентичен тому, кот иммунизировали животного при получении иммун диагностич сыворотки. Р-ции иммунитета протекают в 2 фазы: 1) специфич ф – соедин активного центра антитела с детерминантной гр антигена с образ комплексов антиген-антитело; эта ф протекает быстро, но нет видимого эффекта; 2) неспецифич ф – появлен видимого эффекта взаимод-вия антигена и антитела – выпадение осадка (агглютинация) или помутнение (преципитация), что позволяет увидеть образ комплексов антиген-антитело и сделать вывод о соответствии антигена и антитела друг другу. К р-циям иммунитета относ р-ция агглютинации (РА), р-ция преципитации (РП), р-ция связывания комплемента (РСК). Р-ция агглютинации – это склеивание и выпадение в осадок микробных или др кл (эритроцитов) под д-вием антител в присутст электролита. Видимый эффект р-ции (феномен агглютинации) – образование осадка, кот назыв агглютинатом. Эту р-цию испол для серодиаг и сероидентификации. РА испол для серодиаг (обнаруж антител в сыворотке крови больных) брюш тифа и паратифа (р-ция Видаля), бруцеллеза (р-ция Райта), туляремии и лептоспироза. РА испол для сероидентификации (определ вида возбуд, выделенного от больного) при кишечных инф, коклюше, холере. Способы постановки РА. 1. Ориентировочная (пластинчатая) РА – проводится на стекле. На предметное стекло наносят 2 капли сыворотки и 1 каплю изотонич р-ра. В 1 из капель сыворотки и в каплю изотонич р-ра петлей вносят микробную культуру и перемешивают. Капля изотонич р-ра с микробами – контроль антигена, капля сыворотки без микробов – контроль антитела, капля сыворотки с микробами – опыт. Если в сыворотке имеются антитела, соответс микробным антигенам, кот с ней смешиваются, то антитела и антигены будут специфически связываться друг с другом и через 1 – 3 мин в опытной капле появятся хлопья агглютината. Контроль антигена д б мутным, а контроль антитела – прозрачным. Учет результатов р-ции проводится по появлен хлопьев агглютината. Если выпадают хлопья – р-ция +, т.е. антиген соответст антителу и по антигену можно опред антитело или наоборот. Если остается помутнение – р-ция-. 2. Развернутая р-ция агглютинации –проводится в пробирках. Вначале готовят 2-хкратные разведения сыворотки крови больного чела от 1:50 до 1:1600. В 6 пробирок наливают по 1 мл изотонич р-ра хлорида натрия. В 1ую пробирку вносят 1 мл сыворотки крови больного в разведении 1:50, перемешивают и получают разведение 1:100, затем 1 мл разведения 1:100 переносят во 2ую пробирку и получают разведение 1:200 и т.д. 2 пробирки оставляют для контроля антигена и сыворотки. В контроль сыворотки добавляют только сыворотку в разведении 1:50, в контроль антигена – только антиген. Во все остальные пробирки добавляют 0,1 мл антигена - диагностикума (О- или Н-) и ставят все пробирки в термостат при 37С на 18-20 ч. Учет результатов р-ции проводят по характеру, кол-ву образовавшегося осадка (агглютината) и степени мутности. Учет проводят только при след результатах в контролях: контроль сыворотки – прозрач, контроль антигена – мутный. О-антитела дают мелкозернистый осадок. Н-антитела – крупнозернис. По послед пробирке, в кот еще видна р-ция агглютинации, уст диагностич титр.

Р-ция преципитации (РП) – это осаждение растворим антигена при д-вии антител в присутствии электролита. Видимый эффект р-ции (феномен преципитации) – помутнение (образование мутного кольца или осадка – преципитата). РП применяют для обнаружения неизвестного антигена при ряде инфекц заб: при сибир язве, туляремии, менингите, оспе. В судебной медицине ее испол для опред видовой принадлежности крови, спермы; в санитарно-гигиенич исслед – для уст фальсификации пищ продуктов. РП отличается очень высокой чувствит и позволяет обнаружить антиген в разведении 1:1 000 000 и 1: 10 000 000. Способы постановки РП. 1. Р-ция кольцепреципитации – проводится в спец преципитационных пробирках (диаметр – 0,4-0,5 см, высота – 7-8 см). В пробирку вносят 0,2 – 0,3 мл преципитирующей сыворотки и по стенке длинным носиком пастеровской пипетки осторожно наслаивают такое же кол-во преципитиногена. Затем осторожно из горизонт положения пробирки ставят вертикально. Учет результатов р-ции проводят по появл белого кольца на границе антиген-антитело. При + р-ции наблюдается образование такого кольца. В этом случае антиген соответ антителу и происходит их связывание. Если в кач-ве преципитиногена испол прокипяченные и профильтрованные вод экстракты органов и тк, то р-ция назыв р-цией термокольцепреципитации (н, при диаг сибирс язвы). 2. Р-ция преципитации в геле – проводится в чашках Петри или на предметных стеклах, куда помещают слой агарового геля. При застывании геля в нем вырезают лунки, в кот помещают антигены или антитела, или и то и др. Различают 2 метода РП в геле:а) метод простой (радиальной) иммунодиффузии: 1 из компонентов р-ции иммунитета (антиген или антитело) помещают в лунку, а др компонент – смешивают с агаром; при + результате (антиген соответ антителу) вокруг лунки образуется кольцо преципитата; б) метод двойной иммунодиффузии: и антитело и антиген помещают в отдельные лунки, они диффундируют в агаровом геле навстречу друг другу; при + результате на месте встрече антитела и антигена образуются линии преципитац. Р-ция связывания комплемента (РСК) – это сложная серологич р-ция, в кот участвуют 2 сис-мы антиген-антитело и комплемент. 1-ая сис-ма – специфич, 2-ая – гемолитич сис-ма. Эта р-ция разработана Ж.Борде и О.Жангу, кот уст, что при образ комплекса антиген-антител с этим комплексом связывается комплемент. Видимого эффекта при этом не наблюдается, поэтому для выявл связывания комплемента (а след, и для выявл образования комплекса антиген-антитело при их соответст друг другу), т.е. в кач-ве индикатора испол 2-ая – гемолитич сис-ма. РСК испол чаще для серодиаг (обнаружения антител к возбуд заб в сыворотке крови больного) гонореи, сифилиса, коклюша, сыпного тифа и др. риккетсиозов и многих вирусных заб. РСК также испол для сероидентификации. Постановка РСК. Перед постановкой опыта антиген, сыворотка больного, гемолитич сыворотка и комплемент титруются (опред их титр). Сыворотка больного прогревается при 56С в теч 30 ми. РСК проводят в 2 фазы. I ф – специфич: в 1ой пробирке готовят специфич сис-му - смешивают равные кол-ва известного антигена, сыворотки больного и комплемента, в др пробирке готовят гемолитич сис-му – смесь эритроцитов барана и гемолитич сыворотки, пробирки ставят в термостат при 37С на 30 мин. Одновр готовят контроли на антиген, комплемент и гемосис-му, контрол пробы с сывороткой заведомо больного чела (+ сыворотка) и заведомо здорового чела (- сыворотка) и также помещают в термостат на 30 мин. II ф – индикаторная: в исходную смесь и во все контрол пробирки добавляют одинаковые кол-ва гемолитич сис-мы и учитывают результаты р-ции после выдерживания в термостате 30 мин. Учет результатов РСК проводят при безупречных результатах в контролях. + р-ция (чел болен и в его сыворотке имеются соответ антитела к возбуд заб - антигену): в I ф в специфич сис-ме образ комплексы антиген-антитело, с кот связывается комплемент, после добавления гемолитич сис-мы во II ф гемолиз не наблюдается, т к комплемент связан 1-ой специфич сис-мой. Видимый эффект – образование осадка эритроцитов. – р-ция (чел здоров и в его сыворотке нет антител к возбуд заб): комплексов антиген-антитело не образуется и комплемент в I ф остается свободным, после добавления гемолитич сис-мы во II ф комплемент связывается с обязательно имеющимися здесь комплексами антиген-антитело (это комплексы эритроциты-антиэритроцитарные антитела) и вызывает гемолиз эритроцитов. Видимый эффект – гемолиз эритроцитов – "лаковая кровь". Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) - метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в присутствии иммунной к нему сыворотки крови. Р-ция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении ан­тигенов вирусов антителами иммун сы­воротки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диаг мно­гих вирусных болезней, возбуд кот (вир гриппа, кори, краснухи, клещево­го энцефалита) могут агглютинировать эритроциты различных животных. +Механизм. Типирование вируса проводят в р-ции торможения гемаг-глютинации (РТГА) с набором типоспецифич сывороток. Результаты р-ции учитывают по отсутст гемагглютинации. Подтипы вируса А с антигенами H₀N₁, H₁N₁, Н₂N₂, H₃N₂ и др. м б дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток.