Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови иммуноферментным методом

СИНОНИМЫ

Определение содержания цитокинов в крови, цитокиновый статус.

ОБОСНОВАНИЕ

Цитокины — медиаторы взаимодействия иммунокомпетентных клеток, регулируют процессы их пролиферации и дифференцировки, обеспечивая нормальное функционирование иммунной системы. Цитокины синтезируются клетками иммунной системы после их активации чужеродными или собственными модифицированными Аг. Определённые провоспалительные цитокины, такие как ИЛ1β, ИЛ6, фактор некроза опухолиα, обеспечивают формирование очага воспаления, и их концентрация в сыворотке крови отражает степень воспалительного процесса. Противовоспалительные цитокины (типичный представитель — ИЛ10) блокируют активность Тлимфоцитов, моноцитов/макрофагов и синтез этими клетками провоспалительных цитокинов. Цитокины участвуют в патогенезе некоторых заболеваний, и определение цитокинового профиля может способствовать уточнению диагноза или стадии заболевания.

ЦЕЛЬ

Измерение содержания определённых цитокинов в сыворотке крови для уточнения диагноза или стадии заболевания.

ПОКАЗАНИЯ

Острые и хронические воспалительные, гиперпластические и опухолевые процессы в органах женской репродуктивной системы.

ПОДГОТОВКА

Взятие крови до приёма пищи.

МЕТОДИКА

Иммуноферментный метод определения Аг (в данном случае цитокинов) в сыворотке крови с использованием различных систем детекции.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

Показатели содержания цитокинов в сыворотке крови здоровых женщин не должны превышать 50 пг/мл. Результат исследования может служить дополнительным показателем при диагностике и контроле эффективности лечения женского бесплодия, ВЗОМТ, эндометриоза. Чувствительность и специфичность метода зависят от качества используемых реагентов.

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА РЕЗУЛЬТАТ

• Продукты лизиса эритроцитов в исследуемой сыворотке.

• Срок хранения. Следует хранить сыворотки при 4 °С не более 6 ч, при замораживании до –40 °С — до 6 мес.

АЛЬТЕРНАТИВНЫЕ МЕТОДЫ

• Тестирование биологической активности цитокинов.

• Внутриклеточное окрашивание цитокинов в стимулированных клетках и использование проточной цитофлюориметрии.

Иммуноферментный анализ для количественного определения антифосфолипидных антител к кардиолипину, фосфатидилсерину, β2гликопротеину, аннексину, протромбину

СИНОНИМЫ

Иммуноферментный анализ для определения антифосфолипидных АТ (IgG, IgM, IgА).

ОБОСНОВАНИЕ

АТ, направленные против фосфолипидов и фосфолипидсвязывающих белков, могут ассоциироваться с эндометриозом, бесплодием неясного генеза, неудачными попытками ЭКО и ПЭ в полость матки.

ЦЕЛЬ

Тест предназначен для количественного определения АТ к фосфолипидам и фосфолипидсвязывающим белкам в сыворотке крови.

ПОКАЗАНИЯ

Рекомендуют для включения в обследование женщин с бесплодием неясного генеза, при эндометриозе и подготовке к ЭКО, ПЭ и беременности.

ПОДГОТОВКА

Все реагенты и исследуемый материал перед использованием выдерживают при комнатной температуре и тщательно перемешивают.

МЕТОДИКА

Количественный непрямой твёрдофазный иммуноферментный анализ. АТ из исследуемого материала и стандартов связываются с фосфолипидами и фосфолипидсвязывающими белками, иммобилизованными на поверхности лунок планшета. Это можно обнаружить с помощью конъюгата поликлональных АТ против иммуноглобулинов человека с пероксидазой хрена по изменению окрашивания субстратнохромогенного раствора. Оптическую плотность измеряют на фотометрепри длине волны 450 нм, рассчитывают средние значения оптической плотности для стандартов, контролей и образцов, с помощью калибровочной кривой по значению оптической плотности определяют соответствующую концентрацию АТ в Ед/мл.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

Нормальный диапазон концентраций:

• АТ к кардиолипину: 0–10 Ед/мл;

• АТ к фосфатидилсерину: 0–10 Ед/мл;

• АТ к β2гликопротеину: 0–5 Ед/мл;

• АТ к аннексину: 0–5 Ед/мл;

• АТ к протромбину: 0–10 Ед/мл.

Чувствительность и специфичность: метод специфичен для АТ к соответствующим фосфолипидам и фосфолипидсвязывающим белкам. Перекрестных реакций с АТ к ДНК или другими сифилисспецифичными АТ не отмечено. Нижняя граница определения АТ классов IgG и IgМ составляет 0,5 Ед/мл.

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА РЕЗУЛЬТАТ

• Гемолиз.

• Гиперлипидемия.

• Повторное замораживание и оттаивание исследуемых сывороток.

• Бактериальное загрязнение.

• Изменение концентрации исследуемых образцов.

• Нарушения условий хранения сывороток.