Методы идентификации нуклеиновых кислот

Методы выявления ДНК и РНК-возбудителей в настоящее время применяют в основном для диагностики вирусных инфекций. Методы генной диагностики базируются на выявлении нуклеотидных последовательностей непосредственно в патологическом материале с помощью молекулярных зондов — искусственно полученных нуклеиновых кислот, комплементарных вирусным нуклеиновым кислотам и меченных биотином или радиоактивной меткой.

Особенность метода ПЦР— многократное копирование (амплификация, репликация) с помощью фермента ДНКполимеразы определённого фрагмента ДНК, состоящего из нескольких десятков или сотен нуклеотидных пар, который уникален, то есть специфичен для данного вида вирусавозбудителя. Механизм репликации таков, что достраивание фрагмента может начаться только в определённых стартовых блоках, для создания которых в заданных участках ДНК используют затравки (праймеры) — специально синтезированные олигонуклеотиды. Праймеры комплементарны последовательностям в пределах границ специфического фрагмента, и синтез ДНК протекает только в этих границах.

Процесс ПЦРзаключается в большом числе циклов синтеза (амплификации) специфического фрагмента ДНК, накоплении большого числа копий, которые затем могут быть выявлены обычными методами детекции (иммунофлюоресцентный анализ, электрофорез).

Преимущества пцРдиагностики:

●простота исполнения; ●возможность полной автоматизации; ●быстрота получения результата; ●малое количество патологического материала, необходимого для исследования; ●возможность диагностики острых, хронических, латентных инфекций; ●выявление некультивируемых, персистирующих форм патогенов.

По чувствительности ПЦРнаиболее совершенен как диагностический метод (на несколько порядков выше, чем другие тесты). Специфичность метода также высока, но пока большинство тестсистем недостаточно надёжны, чтобы вытеснить классические методики при диагностике даже абсолютных патогенов.

Что касается оппортунистических инфекций, то значение молекулярногенетических методов диагностики пока нельзя признать скольконибудь значимыми, так как определяющим моментом в развитии таких воспалительных процессов служит количественный фактор, а не само по себе присутствие микроорганизма в обследуемом локусе.

В настоящее время ПЦР-методышироко используют в диагностике вирусных, паразитарных и бактериальных ИППП, чаще в качестве первичного скрининга, а также контроля излеченности в сочетании с другими методами лабораторной диагностики. С помощью новейших технологий, таких как ПЦР в режиме реального времени и метода NASBA, можно определить точное количество вируса у ВИЧ-пациентов.

Ммунологическое исследование крови

Ухудшение экологической обстановки и социальноэкономические условия, сопровождающиеся длительной стрессовой ситуацией, приводят к снижению иммунореактивности населения, увеличению частоты развития вторичных иммунодефицитных состояний. Снижение pезистентности организма, употребление ЛС с иммунодепpессиpующим эффектом, pецидивиpующая хроническая вирусная инфекция способствуют развитию вялотекущих воспалительных и дистpофических процессов в половых органах женщины. Нарушения в иммунной системе — важное звено в патогенезе эндометриоза, а также в возникновении и пролиферации новообразований у женщин с бесплодием неясного генеза, наличием антиспеpмальных АТ, АФС, острыми и хроническими воспалительными заболеваниями.

Местные и системные изменения иммунитета можно выявить при иммунологическом исследовании крови с использованием основных традиционных и современных методов. Иммунологические методы необходимы для создания новых диагностических и лечебных технологий, включающих патогенетически обоснованную индивидуально подобранную иммунотерапию с учётом особенностей иммунной системы конкретного пациента. Своевременная правильная диагностика иммунологических нарушений, позволяющая провести их коррекцию, позволяет снизить дозы и длительность применения антибиотиков, предупредить возникновение аллергических реакций.

Основные параметры иммунного статуса (табл. 6-3, табл. 6-4) — количество и активность циркулирующих лимфоцитов, естественных киллеров и фагоцитирующих клеток, концентрация сывороточных иммуноглобулинов, содержание специфических АТ. Иммунологические методы позволяют охарактеризовать тот иммунологический фон, на котором развивается большинство гинекологических и акушерских заболеваний, и позволяет контролировать эффективность лечения, в первую очередь иммуномодулирующими препаратами.

Таблица 6-3. Основные показатели иммунного статуса

Показатель	Относительное содержание, %	Содержание в литре, 109 кл/л
Лейкоциты	100	4,5–9,5
Лимфоциты	18–39	1,6–2,4
CD3+ (Т-лимфоциты)	56–75	1,0–1,6
CD4+ (Т-хелперы)	34–48	0,6–1,2
CD8+ (цитотоксические Т-лимфоциты)	19–30	0,3–0,7
CD4+/CD8+		1,5–2,6
CD16+ (NK-клетки)	8–19	0,2–0,4
CD56+ (NK-клетки)	5–18
CD3–CD56,16+	4–16
CD3+CD56,16+	1–16
CD19+ (В-лимфоциты)	5–10
CD5+CD19+ (Bl-лимфоциты)	1–2,0
CD95+	27–55
CD4+CD25+ (активированные Т-лимфоциты)	1,8–7,5

Таблица 6-4. Основные показатели иммунного статуса

Иммуноглобулины		Интерфероновый статус
Показатель	Содержание в литре, г/л	Показатель	Ед/мл
IgM	0,5–2,0	Сывороточный интерферон (ИФН)	<4
IgG	8,0–16,0	ИФН-a	32–256
IgA	0,7–3,0	ИФН-y	16–64