Лекции / ПромБТ_2020 5 Хроматография - аппаратура

Флуоресцентное детектирование OPA аминокислот

Бенз(а)пирен

Хроматограмма пробы питьевой воды, загрязнённой бенз(а(пиреном в концентрации 0,0005 мкг/л.

Колонка: Luna С18(2( 150х3.0 мм 3мкм, элюент: ацетонитрил-вода (74:26(, расход: 0.3 мл/мин, детектирование: флуориметрическое (поглощение 305-395 нм, испускание 430-470 нм(

Рефрактометрический детектор

Неспецифический => видит все Не применяется в градиентных системах Умеренная чувствительность

Используется для анализа не поглощающих в УФ соединений – углеводы, липиды.

Показатель преломления

Рефрактометрические детекторы обычно имеют полную шкалу 0.001 – 0.002 единицы преломления.

Устройство рефрактометрического детектора

Работа дифференциального фотодиода

В случае разницы показателей преломления в рабочей и сравнительной ячейке луч отклоняется. Различие интенсивностей падающего света на правой и левой части фотодиода даёт сигнал. При рутинной работе обе ячейки заполняют элюатом (элюентом). Далее проток через ячейку сравнения блокируется и подвижная фаза протекает только через рабочую ячейку.

Вариант оптической схемы рефрактометра

Луч проходит через ячейку дважды, что вдвое увеличивает чувствительность.

Современный рефрактометр (Knauer)

Гидравлическая схема прибора содержит переключатель для обеспечения промывки сравнительной ячейки. Один из её выходов остаётся присоединённым к гидравлическому тракту и в режиме работы – это позволяет уменьшить влияние пульсаций потока.

Особенности работы с рефрактометром

Показания рефрактометра очень зависят от

температуры. Изменение температуры на 1 K для чистой воды даёт изменение 1 10−4 RIU а для типичного органического растворителя 5 10−4 RIU.

Детектор нельзя применять для градиентных разделений!

Измерительная ячейка сделана из стекла по технологии ГОК и не выдерживает избыточного давления больше 2 бар. Детектор всегда должен стоять последним и не иметь гидравлического сопротивления на выходе (используйте капилляр с большим ID).

Детектор сильно чувствителен к пузырькам, поэтому необходимо тщательно дегазировать элюент.

Особенности работы с рефрактометром

На что обращать внимание при выборе и работе с рефрактометрическим детектором:

Диапазон показателей преломления, 1,3 – 1,75 (позволяет работать с широким кругом растворителей

Чувствительность (предел детектирования) зависит от РАЗНОСТИ показателей преломления подвижной фазы (элюента) и анализируемого вещества.

В случае их совпадения – детектирования НЕ произойдёт!