Лекции / ПромБТ_2020 5 Хроматография - аппаратура

Петли из стали надо правильно инсталлировать!

Возьми один конец петли и поместите винт (1) и феррулу (2) на капилляр (3) Вставьте капилляр в порт (4). Подожмите так, чтобы капилляр упёрся в дно порта. Продолжая прижимать капилляр, затяните винт вручную максимально сильно.

С помощью ключа затяните на четверть оборота. Смотрите рисунок А.

Отвинтите винт и убедитесь, что феррула зажалась на капилляре. Повторите процедуру с другой стороной петли. Смотрите рисунок B.

Окончательно вставьте и завинтите винты в соответствующие порты.

Смотрите рисунок C. С помощью этикетки или маркера зафиксируйте сторону порта 2 на петле.

При работе со стальными петлями и стальными феррулами – привязка к конкретному инжектору и номеру порта обязательна!

Автосамплер

Особенности растворения пробы

•Проба растворяется в том же растворителе, что используется для элюирования

•Проба не должна иметь механических примесей, недопустимо образование эмульсий, только прозрачный раствор. В случае гетерогенных примесей необходима фильтрация или центрифугирование.

•Если проба не растворяется, добавляют растворитель, смешивающийся с элюентом, растворяющий пробу (необходимо сделать холостой ввод этой смеси растворителей). В случае добавления "сильных" растворителей (e.g. ТГФ для ОФ хроматографии, метанол для НФ) возможны сильные изменения формы и удерживания пиков. В этом случае необходимо уменьшать объем проб (e.g. заменить петлю 50 мкл на петлю 20 мкл).

Закол в сильном растворителе = проблемы

Закол в сильном растворителе = проблемы

Влияние растворителя образца на профиль пика Условия:

образец — фенилаланин; элюент — буфер рН 3.5 : ацетонитрил (92:8); сорбент — обращенная фаза; детекция — УФ, 210 нм.

Образец растворяли в буфере с:

а) 0 %; б) 30 % в) 50 % г) 70 % ацетонитрила

Эффект перегрузки колонки - объем

При превышении объёма пробы эффект перегрузки проявляется в уширении пиков, сдвигов времён удерживания в сторону увеличения и, при достижении пределов линейного диапазона детектора, к уплощению вершин пиков.

Объем пробы => ширина пиков

Объем пробы необходимо выбирать так, чтобы достигнуть компромисса между чувствительностью анализа и адекватной шириной первого значимого пика.

Базовое правило: ≤ 0.15 1 Влияние объёма пробы на сильно удерживаемые пики (в отсутствии перегрузки) незначительно.

Термостат колонки

Обеспечивает стабильность времен удерживания

Высокотемпературные разделения