Роль звёздчатых клеток поджелудочной железы в регенерации органа на фоне медь-дефицитной диеты у крыс

Предполагается, что звёздчатые клетки поджелудочной железы играют важную роль в восстановлении ткани органа после повреждения.

Целью исследования стало изучение участия звёздчатых клеток поджелудочной железы в ее регенерации на фоне медь-дефицитной диеты у крыс.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на 24 белых крысах-самцах линии Вистар. Животные находились на медь-дефицитной диете с добавлением медь-связывающего вещества в течение 8 недель, затем были переведены на стандартный корм. Контрольные животные находились на стандартном корме в течение всего эксперимента. Животные выведены из эксперимента через 4, 6, 8 недель диеты и через 4, 6, 8 недель после отмены медь-дефицитной диеты. Гистологические срезы поджелудочной железы окрашивались иммуногистохимически с использованием антител к маркёру звездчатых клеток поджелудочной железы десмину.

Результаты. На фоне медь-дефицитной диеты отмечены признаки разрушения ацинарной ткани с сохранением протоковых структур и островков поджелудочной железы; аналогичная картина наблюдалась через 4 недели после перевода на стандартный рацион питания. Частичное восстановление ацинусов через 6 и 8 недель после отмены диеты. В контрольной группе животных при окрашивании с антителами к десмину выявлены единичные отростчатые десмин-позитивные клетки, преимущественно расположенные вокруг сосудов. Аналогичная картина наблюдалась через 4 недели кормления медь-дефицитной диетой.

Через 6 недель диеты отмечено более интенсивное окрашивание клеток по периферии островков, увеличилось число окрашенных отростчатых клеток в ацинусах. Через 8 недель диеты на фоне более интенсивного окрашивания клеток островков обнаружены отдельные отростчатые десмин-позитивные клетки, расположенные вокруг сосудов и перидуктулярно.

После отмены диеты отмечено увеличение числа десмин-позитивных клеток в ацинарной ткани. На фоне бледного окрашивания островковой ткани единичные десмин-позитивные клетки обнаружены в островках и на границе сохранившихся островков и формирующихся ацинусов.

Выводы. Увеличение числа звёздчатых клеток поджелудочной железы, локализованных преимущественно в участках вновь формирующейся ацинарной ткани, на фоне ее повреждения и регенерации, по-видимому, отражает их участие в процессах восстановления ткани поджелудочной железы.

Гафиятуллина Г.Р., Мавликеев М.О.

«Казанский (Приволжский) федеральный университет»

Морфометрический анализ изменений в мышечной ткани пациентов с хроническими облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей после клеточной терапии

Хронические облитерирующие заболевания артерий нижних конечностей (ХОЗАНК) являются одной из наиболее частых причин снижения качества жизни и инвалидизации трудоспособного населения. Во всем мире ХОЗАНК поражены 12-14% популяции, причем заболеваемость возрастает до 20% после 75 лет [1, с.15; 2, с.617]. Несмотря на прогресс ангиохирургии, существует группа пациентов, для которых возможности хирургических методов коррекции магистрального кровотока ограничены из-за невозможности адекватной реконструкции дистального сосудистого русла. Этим определяется сохраняющийся интерес к непрямым методам реваскуляризации [3,с. 215].

В настоящее время существуют экспериментальные работы, в которых показано достоверное увеличение плотности капиллярной сети и развитие коллатералей в скелетной мышце после введения СК, полученных из различных источников [4,с.1215], при её ишемии. К сожалению, данные работы не располагают достаточной статистической базой и ограничиваются оценкой клинических показателей [5,с.244]. Таким образом, морфофункциональные основы терапевтического эффекта трансплантации СК при ХОЗАНК остаются неизученными, а ее эффективность не доказана на клиническом уровне из-за отсутствия статистически значимой выборки.

Целью нашего исследования было изучение эффективности терапии хронических облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей (ХОЗАНК) аутологичными стволовыми клетками периферической крови (СКПК) и выявление лежащих в её основе морфофункциональных механизмов: влияние трансплантации СК на гипертрофию мышечных волокон и развитие фиброза.

Исследование проведено на биоптатах икроножной мышцы пораженной конечности 30-ти больных ХОЗАНК, полученных до и через 3 месяца после внутримышечного введения мобилизованных аутологичных СК, и аутопсиях икроножной мышцы. Парафиновые срезы мышц окрашивали по Массону для выявления коллагеновых волокон и морфометрического анализа (определения площади поперечного сечения мышечных волокон), иммуногистохимически с антителами к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA), с антителами к маркеру эндотелия (CD34). Определяли степень фиброза, производили морфометрический анализ образцов с использованием графического пакета ImageJ, подсчитывали число мышечных волокон и капилляров и определяли их соотношение, производили полуколичественную оценку пролиферации. Статистическая обработка проведена с помощью программного пакета STATISTICA 8.

Результаты исследования показали рост соотношения числа капилляров к числу мышечных волокон на 22,4% (с 1,52 до 1,86; p<0,05).Значительный прирост плотности капиллярной сети (на 58,6±31,1%) сопровождал усиленную экспрессию PCNA, при меньших значениях прироста числа капилляров (10,3±26,7%) активная пролиферация не выявлена. По данным морфометрического анализа площадь поперечного сечения мышечных волокон после трансплантации стволовых клеток достоверно выше (3144,49±1269,33 мкм²), чем до трансплантации (2318,68±750,57 мкм², p<0,05), что вместе с данными об увеличении экспрессии PCNA может свидетельствовать о регенерации мышечной ткани. Корреляционный анализ выявил наличие положительной корреляции средней силы (коэффициент корреляции r=0,67926) между приростом капиллярной плотности сети и приростом площади поперечного сечения волокон. Не удалось выявить различий в степени фиброза (3,47±1,70%) и после (3,51±2,10%) терапии, что может свидетельствовать об отсутствии прогрессирования заболевания, что говорит об отсутствии влияния трансплантации стволовых клеток на уровень фиброза. В норме доля соединительной ткани очень мала (0,319±0,162%).

Аутотрансплантация СКПК приводит к улучшению васкуляризации ишемизированной конечности путем стимуляции развития микроциркуляторного русла. Увеличение плотности капиллярной сети приводит к активации пролиферации и дифференцировки миосателлитов, их слиянию с образованием мышечных трубочек и юных мышечных волокон, а также пролиферации ядер зрелых миоцитов и гипертрофии мышечных волокон. В совокупности неоангиогенез и происходящая на его фоне регенерация мышечных волокон с участием активированных миосателлитов приводят к улучшению клинических показателей.

Кульмасова А.С.

«Казанский (Приволжский) федеральный университет»